ICS_13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 200—1998 中毒检材中士的宁、马钱子生物碱 的定性及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for strychnine,brucine in case samples 1998-12-08发布 1999-03-01实施 中华人民共和国公安部发布 GA/T 200—1998 前言 本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。 士的宁、马钱子生物碱共存于番木整和吕宋豆种子内，是一种植物性生物碱。一般种子中含士的宁 成分约0.9%～1.9%、马钱子碱约0.7%0.9%。在医疗上用作中枢兴奋剂，治疗弱视、瘫摊、再生障碍 等疾病。毒性较大，常有人用来投毒、自杀，也有因用药不当引起中毒或死亡的事件发生。在一般情况下， 番木整中毒者的体内除含有士的宁成分外，还含有一定量的马钱子碱。 现场可疑物证及中毒者的血、肝、胃等有关检材中士的宁、马钱子碱的定性及定量分析，从1980年 起公安部第二研究所就进行了研究实验，1993年至1995年又作为专项研究的药物之一立项。经过大量 的研究实验及实际案例应用，已形成了较成熟的分析方法。在此基础上制定出本标准。 本标准的附录A和附录B都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国公安部提出。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：公安部第二研究所。 本标准主要起草人：封世珍。 中华人民共和国公共安全行业标准 中毒检材中士的宁、马钱子生物碱 GA/T 200—1998 的定性及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for strychnine,brucine in case samples 1范围 本标准规定了士的宁、马钱子碱中毒后生物检材及现场可疑物证的定性及定量分析方法， 本标准适用于士的宁、马钱子碱中毒者呕吐物、胃吸出物以及中毒死亡者肝、肾、胃及胃内容物、血 液、心、肺等生物检材以及现场可疑物证的药物定性及定量分析。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GA/T122--1995毒物分析名词术语及符号 3定义 本标准采用GA/T122中的定义。 第一篇薄层色谱法（TLC法） 4、原理 检材样品中的士的宁、马钱子生物碱经液一液萃取、净化、浓缩后，将样品液点于薄层层析板上，经 展开、显色后与纯品药物或添加提取的标准品比较，进行定性分析。 5试剂（所用试剂均为分析纯或化学纯） 5.1无水乙醇、氯仿。 5.220%氢氧化钠液、1%氢氧化钠液、1%盐酸液。 5.3硅胶GF254薄层板（0.25~0.30mm）或HGF254薄层板。 再加水250mL溶解并混匀即得。 5.5展开剂 系统（1)：乙醚：甲醇：二乙胺=9：1：1； 系统（2）：苯：甲醇：二乙胺=9：1：1； 系统（3）：已烷：丙酮：二乙胺=5：4：1。 中华人民共和国公安部1998-12-08批准 1999-03-01实施 1 GA/T200—1998 5.6标准溶液 单一药物标准溶液：分别取士的宁、马钱子碱药物纯品用乙醇配成10.0mg/mL标准贮备液，使用 期2a；取储备液分别稀释为1.00mg/mL的标准使用液，使用期0.5a。 中，加乙醇至刻度，摇匀得含士的宁、马钱子碱各1.00mg/mL的混合标准使用液，冰箱保存，使用期 0.5 a. 6仪器与器材 6.1K·D浓缩器或其他浓缩装置。 6.2电动振荡器。 6.3台式旋涡振荡器。 6.4微量注射器10μL、100μL。 6.5展开缸、喷雾器。 6.6254nm紫外灯。 7操作方法 7.1提取与净化 取检材血5mL或尿10mL，胃内容物5g，绞碎的肝、胃等组织5g分别装于100mL具塞三角瓶中 （尿液装于分液漏斗中）。另取2份相应的空白检材，其中1份加人混合药物标准使用液100μL （1.00mg/mL）混匀，另1份空白做阴性对照。在上述样品中加5mL无水乙醇（尿液不加）充分振荡使 其沉淀蛋白，加20%氢氧化钠液约0.2mL，使其pH值为11~14。用氯仿40mL、30mL振荡提取2次， 左右，静置彻底分层后弃去碱液。氯仿经无水硫酸钠脱水，用K.D浓缩器或在60℃下吹空气流浓缩至 0.2mL，备检。若检材高度腐败，应用1%盐酸液10mL×2反提氯仿液，分层后，弃去氯仿层，收集酸液 调为pH11~14，再用氯仿20mL提取2次，合并氯仿液浓缩至0.2mL，备检。 如检材为现场药片、茶杯、纸片等物证，用氯仿、甲醇、乙醚等溶剂浸泡、洗涤提取，直接浓缩至一定 体积，备检。 7.2点样、展开、显色 距薄层板底部1~2cm，间隔1~1.5cm处用10μL微量注射器取检材、添加、空白、纯品液各5~ 10μL，分别置于薄层板上，选用展开剂展开。当溶剂前沿展至7～10cm左右时取出挥去溶剂，在紫外灯 下观察并标出斑点位置，然后用碘化铋钾试剂显色。检材液中斑点与纯品、空白、添加比较，根据斑点颜 色及R值进行定性分析。 8结果评价 8.1添加在空白检材中的士的宁、马钱子碱经显色后与纯品比较，若估量回收率在50%左右，空白无 干扰，检材无论阳性、阴性结果均为可靠。如添加样品未出现斑点或回收率低于50%时，检材阴性结果 不可靠，应重新实验。 8.2如检材中出现有R值和颜色与士的宁、马钱子碱相同的斑点，而空白检材无干扰时，阳性结果才 可靠。如空白有干扰，应换展开剂或用气相色谱法、色谱/质谱法验证分析。 8.3用薄层层析法进行定性分析，必须选择两种以上展开剂，且斑点边缘清晰方可确认。 2 GA/T200-1998 第二篇 气相色谱法（GC法） 9原理 生物检材中的士的宁、马钱子碱药物用SKF525A作内标物，以空白检材添加标准品和空白检材为对 照，经用液一液萃取法和液一一固萃取法平行提取净化后，选用配有氮磷检测器的气相色谱仪进行定性及 定量分析。 10试剂与试药（所有试剂均为分析纯） 10.2pH10.5缓冲液：1mol/L的碳酸氢钠用5mol/L碳酸钠调为pH10.5。 10.3碳酸钠固体试剂、饱和碳酸钠溶液。 10.41mol/L盐酸、6mol/L盐酸。 10.5甲醇、乙醇、氯仿、乙醚、异丙醇。 10.6药物标准液：精确称取士的宁、马钱子碱、SKF525A（内标物）纯品，用乙醇配制成1.00mg/mL的 标准液。临用前取此液稀释10倍，得0.100mg/mL的单一药物标准液，使用期0.5a。 取1.00mg/mL的士的宁、马钱子碱各1.0mL装于同一个10mL容量瓶中，加乙醇至刻度，得士 的宁、马钱子碱各0.100mg/mL的混合药物标准液，使用期0.5a。 11 仪器与器材 11.1配有氮磷检测器和微处理机的气相色谱仪。 11.2离心机。 11.3抽滤器。 11.4其他器材同第5章。 12操作方法 12.1定性分析操作方法 12.1.1提取与净化 12.1.1.1液一液萃取法：取检材血2mL或绞碎的胃、肝组织2g装于15mL具塞试管中，加内标物 使用液50μL（0.100mg/mL），混匀；加5～6滴饱和碳酸钠溶液，调pH为11左右，用7mL乙醚提取2 次，每次振5min，离心；分出乙醚液用1mL水洗涤，离心，吸出底层水液弃去在乙醚中加1mol/L盐 酸2mL反提2～5min，离心，吸出底层酸液置于另一试管中。再用2mL1mol/L盐酸反提1次，合并 酸液，酸反提液用碳酸钠固体调pH为11左右。用2mL氯仿振荡提取5min，离心，吸出上层碱液弃去， 底层氯仿液（勿带水份）置于另一尖底试管中，在60℃C下用空气吹干；加50μL甲醇强振溶解，供分析。 12.1.1.2血、尿液一固萃取法 取检材血1mL或尿液10mL装于15mL具塞试管中，加内标物使用工作液50μL （0.100mg/mL），血中加pH10.5缓冲液8mL，尿液用饱和碳酸钠调pH为11左右。检材液转人已活化 的GDX-403柱中，使流速为2mL/min左右，待样品液流完后用5mL水淋洗。水液流完后用柱下抽气 或柱上加压法使柱中残留水份彻底流出以干燥柱子。用6mL氯仿/异丙醇（8：2)混合溶剂洗脱，收集 洗脱液于尖底试管中。如溶剂顶部仍有残留水份，应离心后用吸管将上层水液吸出弃去。溶剂在60℃下 用空气吹干，50μL甲醇溶解，供分析。 12.1.1.3胃、肝等固体脏器的液一固萃取法 3 GA/T200—1998 取绞碎的胃、肝组织并称取1g装于15mL具塞试管中，加内标物使用工作液100L 用20%氢氧化钠液和饱和碳酸钠液调pH值为11左右。以下操作按血中12.1.1.2方法进行过柱、洗脱 等步骤操作。 固体肝、胃检材也可以采用下列方法变为液体样品：取绞碎组织1.0g，添加内标物使用液100μL， 用8mLpH6的缓冲液浸泡振荡提取1h，离心后过滤，滤液调为pH11左右。然后按12.1.1.2液一固萃 取法操作。 12.1.1.4直接提取法 取现场物证，如空碗、茶杯、注射器等直接用甲醇浸泡洗涤，甲醇液浓缩后供分析。 检材若为水样液体，用氯仿直接提取，分出氯仿液浓缩干后用甲醇溶解供分析。 检材若为中药残渣，应先进行挑选，取出可疑的马钱子种子或植物的中药，用弱酸液温浸，过滤后调 pH11左右；然后用氯仿提取，挥干氯仿，甲醇溶解供分析。 12.1.2气相色谱分析参考条件