ICS _13. 310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 198—1998 中毒检材中氯喹的定性 及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for chloroquinoline in case samples 1998-12-08发布 1999-03-01实施 中华人民共和国公安部发布 GA/T 198-1998 前 #言 本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。氯喹是治 疗症疾的极为重要的药物，但使用不当会引起中毒，甚至死亡。本标准的制定是建立在20多年办案实践 和研究的基础上的。本标准适用于中毒及中毒死亡者的尸体内脏组织和体液，以及现场物证中的氯喹的 定性及定量分析。 本标准的主要内容为：检材的适用范围、提取净化方法、GC定性及定量分析方法和TLC定性分析 方法，以及各方法的评价、定量计算公式等。 本标准由中华人民共和国公安部提出。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：公安部第二研究所。 本标准主要起草人：赵敬真。 中华人民共和国公共安全行业标准 中毒检材中氟喹的定性 及定量分析方法 GA/T 1981998 Methods of qualitative and quantitative analysis for chloroquinoline in case samples 1范围 本标准规定了中毒检材中氯唑的提取净化方法和定性及定分析方法。 本标准适用于中毒者的呕吐物、胃吸出物和中毒死亡者的胃内容物、胃、肝、肾、肺、心、血等组织、体 液，以及现场可疑物证等检材中氯喹的检验。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GA/T122—1995毒物分析名词术语 3定义 本标准采用GA/T122中的定义。 第一篇 气相色谱法（GC法） 4原理 本方法采用在生物检材中加入内标物，经提取、净化、浓缩后，用具有氢火焰离子化检测器(FID)或 氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪检测其中药物，以保留时间(RT值）和相对保留时间（RRT值）作定性 分析；以峰面积为依据，用内标法或外标法进行定量分析。 5试剂(所有试剂均为分析纯） 5.1无水乙醇。 5.2甲醇。 5.3乙醚。 5.4氯仿。 5.5无水硫酸钠。 5.6氢氧化钠。 5.7浓硫酸。 中华人民共和国公安部1998-12-08批准 1999-03-01实施 1 GA/T198-1998 5.8浓盐酸。 5.9氯唑的标准溶液 5.9.1氯喹纯品：称取一定量的磷酸氯唑粉剂（99%以上纯度），溶于水，加10%NaOH调至pH12；然 5.9.2氯唑储备液：精确称取100.0mg氯唑（盐基）用无水乙醇溶解移入10mL容量瓶中，加无水乙 醇稀释至刻度，混匀得10.0mg/mL氯唑储备液，冰箱中保存，使用期2a。 5.9.3氯唑标准液取氯喹储备液一定量，稀释10倍，得1.00mg/mL的氯唑标准溶液，冰箱保存，使 用期1a。 5.10内标物溶液：1.00mg/mLSKF525A的无水乙醇标准溶液，冰箱保存，使用期1a。 6仪器及器材 6.1 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器(FID)或氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪。 6.2 色谱数据微处理机。 电动振荡器。 6. 3 6.4 K.D浓缩器或其他浓缩装置。 6.5 微量注射器（10μL、50μL、100μL）。 100150mL具塞三角烧瓶。 6.6 分液漏斗（50mL、100mL、150mL）。 6.8小型多用振荡器。 6.9其他常用玻璃器材。 7提取净化方法 7.1方法一：本方法适用含量微、取材量较大的检材的提取净化。 取绞碎肝、肾、胃及血液等组织和体液5~10g（mL)，加无水乙醇5mL沉淀蛋白，用20%氢氧化钠 水溶液调节pH值12以上，用乙醚50mL提取2次，每次振荡15min，分出乙醚液，合并于100mL分 液漏斗中；加1%氢氧化钠水液5mL洗涤12次，水10～15mL洗一次，每次振摇1min，弃去水相 层，乙醚液用无水硫酸钠脱水并转移至另一只干净的分液漏斗中；用0.1mol/L盐酸或0.1mol/L硫酸 5mL反提3次，每次振摇510min，分出酸液合并，弃去乙醚液，酸液用20%氢氧化钠调节pH值为 12；此碱液转入50mL干净分液漏斗中，用氯仿15mL提取2次，每次振摇5～10min，分出氯仿液，脱 水，K.D浓缩或其他装置挥发氯仿至干，残留物中加甲醇或无水乙醇0.1～0.2mL定容，涡旋1min，备 检。 7.2 2方法二：本方法适合于新鲜检材的微量提取净化。 取绞碎的肝、肾、胃、血液等组织或体液2g(mL)装于15mL的具塞玻璃试管中，各检样添加内标 物SKF525A10~20uμg，摇匀，加0.5~1mL无水乙醇沉淀蛋白，20%氢氧化钠水液0.5mL，使检材的pH 值在11以上；以乙醚8mL提取2次，每次振摇10min，离心5min，分出乙醚液加1mL水洗1次（主要 50mL烧杯或蒸发血中，50℃水浴挥干乙醚，残渣用8mL1%盐酸水液分3次溶解并过滤于10mL具 塞试管中，用50%氢氧化钠调节其pH值11以上；加2mL氯仿提取5min，离心5min，吸取上层水液 弃去，下层氯仿转移到一只干净、干燥的尖底试管中，70℃C温度下空气流吹干，残留物中加50～100μL 无水乙醇或甲醇定容供分析用。 7.3直接提取法：取现场可疑物证，如注射器、药片、空瓶等，直接用甲醇浸提，浓缩后供分析。 7.4方法回收率 方法一：5g组织添加100μg氯喹，回收率为81%±3.7%。 2 GA/T 198—1998 方法二：2g组织添加20μg氯唑，回收率为75%士5.4%。 8气相色谱定性分析 8.1气相色谱条件(参考值) 8.1.1色谱柱 1）3%SE-30ChromosorbWHP80~100目2mX2.6mm(id)玻璃填充柱； 2）3%~5%0V-17ChromosorbWHP80~100目2m×2.6mm(id)玻璃填充柱； 3）SE-30、OV-1、OV-101、SE-54等弹性石英毛细管柱（0.25~0.5mm(id)×25mX0.32μm）。 8.1.2其他条件 柱温：250~270℃； 汽化室温：280~300℃； 检测器温：280300℃(FID或NPD)； 载气：高纯氮气50~70mL/min（填充柱）；1~5mL/min（毛细柱）。 空气和氢气比例根据自己使用的仪器调最佳值。 8.2进样 吸取各试样（检材、空白添加提取液及标准样品溶液)12μL，依次注入设定好的气相色谱仪中，每 个试样进样2~3次。 8.3记录 分别记录各试样的保留时间（RT值），求出各试样的相对保留时间（RRT值），与标准样品比对定 性。记录空白添加标准品、内标物及纯标准样品的峰面积（或蜂高）的平均值，计算空白添加药物或内标 物的回收率，评价操作方法的价值。 8.4色谱图（参考值） 色谱图见图1、图2。 GA/T 198—1998 A B 仪器：ASP501N型GC,C-R3A微处理机;B、CGC-8A,C-R3A微处理机 柱：A5%SE-301.5mX3mm填充柱 BSE-5430m×0.25mm石英毛细柱 C3%SE-302mX2.6mm填充柱 柱温：A250℃B250~300℃程温，速率10℃/min;C260℃ 检测器：FID280～300℃，汽化室：290~300℃ Nz:A65mL/min;B1.25kg/cm²;C2kg/cm² RT值：A4.98';B7.4';C3.49" 图1氯喹的气相色谱图 GA/T 198--1998 B：肝添加标准药物提取液 A：药物标准液 HP-5890B型GC/NPD，3365化学工作站 OV-125m×0.25mm(id)×0.32μm石英毛细柱 柱温：240C保持3min，升温速率8℃/min升至280℃，保持8min 检测器温：280℃汽化室温：280℃ N2:20Psi;H2:22Psi;AIR:55Psi RT值：1—SKF525A（内标物）2.62min； 2-嚏4.49min； 3奎宁5.78min; 4一优奎宁6.27min 5-士的宁8.39min； 6一马钱子碱 13.38min 图2氯唑等药物的GC图谱 8.5回收率计算公式 空白添加氯喹的峰面积（峰高）值、 外标法回收率（%） X100 等量已知氯喹的峰面积（峰高）值 检材中添加SKF525A峰面积（峰高）值 内标回收率（%)： 等量纯品SKF525A峰面积（峰高）值 X100 8.6检出限及线性关系 检出限50ng/FID，10ng/NPD，0~10μg/mL呈线性关系。 9气相色谱定量分析 9.1试样制备 准确称取待定量检材2.0～5.0g，体液2.0~5.0mL各2份。称取相应的空白检材等量1份，添加 氯唑标准10～50μg（根据检材初定量数据添加略高于初定值的量），各试样中添加SKF525A内标物10~ 50 μg。 9.2提取净化方法同第7章。 9.3色谱分析条件同8.1。 9.4进样同8.2。