A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T102-1995 中毒检材中巴比妥类药物的 定性定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative anal ysis for barbiturates in case samples 1995-06-12发布 1997-01-01实施 中华人民共和国公安部发布 中华人民共和国公共安全行业标准 中毒检材中巴比要类药物的 GA/T102—1995 定性定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis fer barbiturates in case samples 1主题内容与适用范围 本标准规定了中毒检材巴比要类药物的检验方法 本标准适用于中毒检材中的巴比要、苯巴比要、速可眠、戊巴比要、异戊巴比妥、硫喷要及其他化学 结构相似的巴比要类药物的定性、定量分析。 2引用标准 GA/T122~1995 毒物分析名词术语 3定义 本标准定义采用GA/T122一1995标准中的定义。 第一篇气相色谱法 本标准可提供的检材有：中毒者的血、尿、中毒死亡者的血、肝、尿、肾、脑、胆汁、胃及胃内容物等；对 怀疑注射入体内者，还需提供注射部位肌肉。凡有现场的还需提供现场收集怀疑含有药物的物证。 4原理 本方法系采用在生物检材中加入内标药物，经提取、净化、浓缩后，用具有火焰离子化检测器（FID） 或氮磷检测器（NPD)的气相色谱谐仪测其中药物。经与本组药物标准品对照，以绝对保留时间RT值或相 氮磷检测器比火焰离子化检测器具有较高的灵敏度，可用来分析含治疗量以下的生物检材中的巴 比要类药物。 在相同色谐条件下，巴比妥类药物的甲基衍生物的灵敏度高于原体药物，对生物检材中巴比妥类药 物可进行衍生化后再分析其衍生物。 5试剂 所有试剂，均为分析纯。 5.1无水乙醇 5.2浓盐酸 5.3乙醚 中华人民共和国公安部1995-06-12批准 1997-01-01实施 1 GA/T102—1995 5.4氧仿 5.5无水硫酸钠 5.76mol/L盐酸 5.8三级活度中性层析氧化铝：取市售中性层析氧化铝于130℃烘箱中烘3～4h，冷后立即按6%比例 加蒸馏水搅拌均匀，放回原瓶中备用。 5.9层析用颗粒活性碳0.43~0.5mm或20~40目。 5.10单一药物标准储备溶液：精密称取巴比妥类各种药标准品100mg，分别于10mL容量瓶中，用无 水乙醇溶解并稀释至刻度，混匀，得每毫升含10mg药物的标准液，置一10℃冰箱中保存。该液可使用 - 年。 5.11单一药物标准使用液精密量取单一药物标准储备液巴比妥、异戊比妥、戊巴比妥、速可眠、硫喷 妥各1mL，苯巴比妥2mL分别移入10mL容量瓶中，各加无水乙醇至刻度，混匀，得每毫升乙醇各含 1mg巴比妥、异戊巴比妥、速可眠、硫喷妥、戊巴比妥及2mg苯巴比妥的标准使用液，置4℃冰箱中保存。 该溶液可使用半年。 5.12混合药物标准使用液各取单一药物标准储备液巴比妥、异戊巴比妥、速可眠、硫喷妥要各1mL、 苯巴比妥标准溶液2mL于同一个10mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，得每毫升乙醇液含苯巴比 妥2mg，其他巴比妥类药物各1mg混合的标准使用液。该溶液可使用半年。 5.13内标物标准溶液精密称取内标物烯丙异丙巴比妥（Aprobarbital)100mg于10mL容量瓶中，加 无水乙醇至刻度，混匀。得每毫升乙醇液含内标物10mg的标准贮备液。混匀，置4℃冰箱中保存。 5.14内标物标准使用液精密量取内标物标准溶液1mL于10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻 度，混匀。得每毫升含内标物1mg的使用液。置4℃冰箱中保存。该溶液可使用半年。 5.15pH9碳酸钠液：25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中。 5.16硫酸二甲酯（此试剂为刺激性有毒液体，使用时不得外溢）。 5.17四氟化碳 6仪器 6.1气相色谱仪：具有火焰离子化检测器(FID)及氮磷检测器(NPD)，和色谱数据处理机。 6.2电动振荡器 6.3K、D浓缩器 6.4台式通用旋涡振荡器 6.5水浴锅 6.6微量注射器10μL、100pL 7操作方法 7.1定性分析 7.1.1提取取检血5mL、尿10mL、胆汁5mL及胃内容物、绞碎的肝、胃、肾、脑等组织各5g分别放 于100mL具塞三角烧瓶中，各加入内标物标准使用液100μL（含100μg内标物），混匀。另取份相应的 空白脏器作空白对照，在上述样品中（尿、胆汁除外）各加入5mL无水乙醇，充分振摇使蛋白发生累状沉 淀，再加6mol/L盐酸调节酸度至pH2，用乙醚50mL振荡提取15min，静置澄清后，分出乙醛于另一三 角瓶中或缓慢倒入已填装好的净化柱中。残渣再用乙30mL，振播提取15min，再分出乙醚。 7.1.2净化及浓缩 7.1.2.1装柱取长约20~30cm内径约1.5cm下口具活塞的玻璃层析柱（也可用50mL分液漏斗代 替）。于底层松松塞上少许脱脂棉，依次装入无水硫酸钠2～3g，三级活度中性层析氧化铝10～15g，如遇 GA/T102-1995 7.1.2.2淋洗用20mL乙醛预淋装好的柱子（注意预淋时勿使柱中无水硫酸钠表层干阔），然后将 7.1.1步第一次提取液倒入柱中，待第一次提取液刚流完时，再倒入第二次提取液，用活塞控制流速，以 一滴接一滴流出淋洗液为宜，待第二次乙醚提取液刚流完时，用20mL乙醛洗脱柱子。全部过柱后的乙 醚液收集于100mL分液漏斗中。 7.1.2.3用5mL0.45mol/L氢氧化钠液反提乙醚共二次，每次振荡5min，合并氢氧化钠反提液，再用 6M盐酸调节至pH2.用10mL氯仿分两次提取上述酸液，每次振荡5min，放置没清后，分出氟仿经无水 硫酸钠脱水后，将氯仿置K.D浓缩器中于70℃浓缩至干（或用N，吹或自然挥干），再加100pL乙醇溶 解，供分析用。 7.1.3分析条件参考值 色谱柱：玻璃柱内径3mm、长2.0m 检测器：火焰离子化检测器（FID） 固定液及担体：3%0V-17涂于80~100目Chrom0sorbWHP上。 温度： 柱温：210℃ 检测器温：260℃ 汽化室温：260℃ 气体流速： 载气：N 1.5kg/cm² 燃气：H2 0.5kg/cm 空气： 0.5kg/cm* 空气与氢气比应按各厂家仪器选择最佳条件。 7.1.4检测方法 7.1.4.1进样 将各种检材提取浓缩液及空白对照提取浓缩液1～3μL注入上述条件色谱仪中，每个样品进样2~ 3次，并注入单一药物标准品使用液及等量内标物标准使用液。 7.1.4.2记录 分别记录各检材中内标物及药物的保留（RT）值，填入GC定性分析结果表中（见通用标准），并记 录添加于检材中内标物及等量内标物标准使用液在相同条件下的蜂面积值。 7.1.4.3计算 计算各药物标准品及检材中各药物保留时间（RT)平均值，以内标RT值为1，计算各药物RRT平 均值，填入上述表中。 计算内标物的回收率 检材中内标物峰面积平均值 内标物回收率(%)= 7.1.5检测方法二一一衍生化方法 7.1.5.1衍生化操作过程 0.1mL硫酸二甲酯衔生化试剂，充分混合，并在70水浴中加热15秒，振摇，再加热使二液层消失，取 出放冷，于各管中加入100L四氯化碳，充分振摇后离心或静置使其分层（此时巴比要类药物衍生物已 转入四氯化碳中），吸取上层绝大部分水液弃去，留下CCL层。 7.1.5.2进样 各取检材提取液及混合药物标准使用液的衍生物四氟化碳液1μL，按7.1.3分析巴比要类药物的 3 GA/T102-1995 GC条件进行分析，各进样2～3次。 7.1.5.3记录及计算 分别记录各检材中内标物及药物保留时间值（RT）值，填入记录表中。并以烯丙异丙巴比要RT值 为1，计算各种药物的RRT值。 巴比妥类各种药物及甲基衍生物的色谱图及RT值、RRT值见附录A。 7.2定量分析 7.2.1提取 以相对应的空白组织样品一份，放在100mL具塞三角烧瓶中，向其中添加待测药物各50~100μg（根据 含量定），作定量标准对照。向检材及空白添加样品中各加入内标物标准使用液100μL。以下按7.1.1 “各加入5mL无水乙醇”起依次操作。 7.2.2净化及浓缩 按7.1.2项依次操作。 7.2.3分析条件 按7.1.3项条件进行。 7.2.4测定方法 7.2.4.1进样 将两份检材提取浓缩液及一份添加标准品提取浓缩液分别进样，根据其含量每种检材进样1~ 3μL，各进样2~3次。 7.2.4.2记录 检材中内标物及药物的平均峰面积值。 7.2.5计算分析结果 7.2.5.1计算相对校正因子于 添加于空白中待测药物进样量（ug）×内标物蜂面积平均值 7.2.5.2计算检材中药物含量 检材中内标峰面积平均值×检材重量（g）×1000 7.2.5.3计算相对相差 1×100 x 式中：X,，X，为两份检材平行定量测定的数值。 8结果评价 8.1定性分析结果评价 8.1.1如果添加于检材中的内标物烯丙异丙巴比妥回收率在60%以上，检材未出现相应的巴比妥类 药物色谱峰，可认为检材中不含巴比要类药物，阴性结果可靠。如果内标物回收率在60%以下，检材未 出现相应巴比妥类药物的色谱蜂，属操作有误，阴性结果不可靠，应重新实验。 8.1.2检材中若出现相应的巴比妥类药物色谱蜂，可根据RT和RRT值并重选分析条件，结果均一致 时，可以判断检材中含有某种巴比妥类药物。 8.1.3如果空白胜器经提取后未出现巴比妥类相应的色谱峰，则检材有相应色谐峰时，说明空白无干 扰，阳性