ICS 07.140 CCS C 06 34 安徽省 地方 标准 DB34/T 4340—2022 法医物证鉴定 线粒体DNA种属鉴定技术 规范 Forensic biology identification Specification of mitochondrial DNA for species identification 2022 - 12 - 29发布 2023 - 01 - 29实施 安徽省市场 监督管理局 发布 DB34/T 4340 —2022 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由安徽省司法 厅提出并归口。 本文件起草单位： 安徽新莱蒂克司法鉴定中心 、安徽省司法鉴定协会、 安徽仁吉康生物技术有限责 任公司。 本文件主要起草人： 张黎黎、鲍加琪、赵莎莎 、王晓闵、 张林杰、 徐龙、孔东辉、王陈成 、余春晓、 王彪、许云斐、刘慧 、彭苗苗。 DB34/T 4340 —2022 1 法医物证鉴定 线粒体DNA种属鉴定技术规范 1 范围 本文件规定了 法医物证鉴定 线粒体DNA种属鉴定的 基本要求、检验程序和鉴定 意见书。 本文件适用于安徽省法医 DNA实验室通过线粒体 DNA测序的方法对动物源生物检材（包括但不限于 血液、肌肉、毛发、骨骼、牙齿 ）的种属来源进行确认，确认范围为人 和高等脊椎动物。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GA/T 383 -2014 法庭科学 DNA实验室检验规范 SF/Z JD0105008 -2018 法医物证鉴定线粒体 DNA检验规范 CNAS-CL08-A002:2018 司法鉴定 /法庭科学机构能力认可准则在法医物证 DNA 鉴定领域的应用说 明 《司法鉴定文书规范 》 司发通〔2016〕112号 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 法医物证鉴定 forensic biology identification 鉴定人运用法医物证学的科学技术或 者专门知 识，对各类生物检材进行鉴别和判断并提供鉴定意 见的活动。 种属鉴定 species identification 广义上的种属鉴定包括动植物的类属确定，狭义的种属鉴定指的是动物的生物检材的种属来源鉴 定，即确定检材是否属于人体所有，有时还要确定检材属于何种动物。 线粒体DNA mitochondrial DNA, mtDNA 位于线粒体中的 DNA，呈双链环状结构。 序列比对 alignment 为确定两个或多个序列之间的相似性和同源性，将 它们按照一定的规律进行排列。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CO I:细胞色素 c氧化酶亚基Ⅰ（cytochrome c oxidase subunit I ） DB34/T 4340 —2022 2 DNA:脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid ） PCR:聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction ） 12SrRNA:12S核糖体核糖核酸 （12S ribosomal RNA ） 5 基本要求 应符合SF/Z JD0105008 -2018中4.1～4.3的要求。 6 检验程序 样本采集 6.1.1 含有DNA的生物检材（包括但不限于血液、肌肉、毛发、骨骼、牙齿）均可采集。 6.1.2 样本应分别包装，注明编号、采样日期、采样地点等信息。 6.1.3 样本采集后应及时进行实验。 DNA 提取和纯化 按照GA/T 383 -2014中附录A的方法执行。 PCR 扩增与产物测序 6.3.1 PCR 扩增 根据需要， 宜选择通用引物 或自行设计引物进行 PCR扩增。 本文件提供了两 个线粒体DNA片段通用引物示例 供参考： 示例1：12SrRNA 引物对 F：5′-AAACTGGGATTAGATACCCCACTAT -3′ R：5′-GAGGGTGACGGGCGGTGTGT -3′ 示例2：CO I引物对 F：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG -3′ R：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA -3′ 6.3.2 PCR扩增产物测序 宜采用纯化试剂盒或其他同行公认的纯化方法对 PCR 扩增产物进行纯化；宜采用商品化测序试剂 盒进行测序 PCR反应及毛细管测序电泳 ，获得DNA序列信息 。 6.3.3 质量控制 从事DNA种属鉴定的实验室至少应该包括以下质量控制措施： a) 对照设置 ：每次实验需严格设置阳性（已知的 DNA样品）和阴性（不加 DNA的空白）对照 ； b) 重复检验 ：为避免潜在的异质性影响和保证结果的可靠性，宜进行正、反链双向测序或单向二 次测序； c) 污染防控 ：实验室应采取 措施以防止污染，并符合 CNAS-CL08-A002:2018 中7.4.4要求。 序列比对鉴定