ICS 11.100 C 23 团体标准 T/CACM 1027.105—2018 白及快速PCR鉴定 Quickly PCR identification of Rhizoma Bletillae 2018 - 11 - 19发布 2018 - 11 - 19实施 中 华 中 医 药 学 会 发布 T/CACM T/CACMT/CACM 1027.105— 2018 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 方案 ................................ ................................ ............... 2 5 仪器设备使用要求 ................................ ................................ ... 2 5.1 总体要求 ................................ ................................ ....... 2 5.2 仪器设备要求.................................................................... 2 6 试剂和溶液配制 ................................ ................................ ..... 3 6.1 总体要求........................................................................ 3 6.2 试剂和溶液配制要求.............................................................. 3 7 检验程序 ................................ ................................ ........... 4 7.1 要求..................... ....................................................... 4 7.1 程序............................................................................ 4 8 结果判定 ................................ ................................ ........... 6 9 结果报告 ................................ ................................ ........... 6 9.1 一般要求............... ......................................................... 6 9.2 鉴定报告........................................................................ 6 10 质量保证........................................................................... 7 11 废弃物处理.................. ....................................................... 7 附录A（资料性附录） 白及快速 PCR鉴定体系的建立 ................................ ........ 8 T/CACM T/CACMT/CACM 1027.105— 2018 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本标准由中华中医药学会提出并归口。 本标准主要起草单位：贵阳中医学院，中国中医科学院中药资源中心，广东省药品检验所。 本标准主要起草人：周涛，袁媛，黄璐琦，杨志业，赵丹，蒋超，赵玉洋，周骏辉。 T/CACM T/CACMT/CACM 1027.105— 2018 1 白及快速 PCR鉴定 1 范围 本标准规定了白及快速PCR鉴定的方案、仪器设备使用要求、试剂和溶液配制、检验程序、结果判 定、结果报告、质量保证和废弃物处理的要求。 本标准适用于 白及药材、 饮片、种子和种苗鉴定 。 2 规范性引用文件 下列文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 《中华人民共和国药典》（ 2015年版一部和四部） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 白及 Bletillae Rhizoma 兰科植物白及的干燥块茎（参见附录 A）。 3.2 检验样品 test sample 按一定规则取自某一整体， 能反映该整体的相关信息，可以作为判断该整体情况的一个或多个部 分。 3.3 DNA提取 DNA extraction 从样品中提取出DNA的方法。 3.4 DNA扩增 DNA amplification 通过一定技术使一段特定的 DNA片段拷贝数增加的过程。 注：可通过聚合酶链式反应技术实现 DNA扩增。 T/CACM T/CACMT/CACM 1027.105— 2018 2 3.5 聚合酶链式反应（ PCR） polymerase chain reaction 一种用于扩增特定DNA 片段的分子生物学技术，即DNA 片段的特异性体外扩增过程，其特异性依赖 于与目的DNA片段两端互补的寡核苷酸引物。 3.6 阳性对照 positive control 使用对照样品代替检验样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程，用于证明鉴定过程可获得 目标核酸片段的操作。 3.7 阴性对照 negative control 使用常见伪品药材代替检验样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程，用于 确认检测系统能 够满足白及鉴别的操作。 3.8 空白对照 blank control 以水代替检验样品同法 DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程，用以证明提取过程中没有核酸污染 的操作。 4 方案 白及快速PCR鉴定应采用抽取有代表性的检验样品与对照样品比较的验证方式，即依据白及特异性 DNA位点差异，使用SNP （单核苷酸多态性） 标记法进行鉴定。利用碱裂解法提取白及DNA ，以白及DNA 为模板进行PCR扩增，采用荧光检测或琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。 5 仪器设备使用要求 5.1 总体要求 所有制备样品使用的器具在使用前应进行灭菌处理。 5.2 仪器设备要求 5.2.1 PCR 仪 使用前应进行温度校准。 5.2.2 手持式紫外灯 能发出波长为365nm的紫外光。 T/CACM T/CACMT/CACM 1027.105— 2018 3 5.2.3 连续可调微量移液枪 应包括0.1µL～ 2.5µL、0.5µL～10.0µL、 10µL～100µL、100µL～1000µL规格，并包括配套 的一次性 吸头。 5.2.4 保温设备 应包含4℃与-20℃温区。 5.2.5 离心设备 能离心200µL PCR管与1.5m L离心管。 5.2.6 电泳仪 电源应为具有稳压器的直流电源，电压100V～ 500V。 5.2.7 凝胶成像系统 系统应包含密封暗箱、摄像头、白光和紫外光（UV） 254nm、302nm、365nm光源，UV保护挡板。 5.2.8 电子天平 最大称量值至少应为1 g，可读性精度至少应为1 mg。 5.2.9 pH计 测量范围至少应为0 ～14，精度至少应为±0.01。 5.2