ICS65.020.20 CCSB31 团体标准 T/YNYY001—2021 苹果矮化自根砧木组培快繁技术规程 Technicalregulationsfor tissuecultureandrapidpropagationofAppleDwarfRootstock 2021-10-12发布 2021-10-13实施 云南省园艺学会 发布 全国团体标准信息平台 T/YNYY001—2021 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省农业科学院园艺作物研究所提出。 本文件由云南省园艺学会归口。 本文件起草单位：云南省农业科学院园艺作物研究所、云南大学、云南农业职业技术学院、昭通市 苹果产业发展中心。 本文件主要起草人：黄文静、杨光柱、刘丹丹、马钧、赵俊伟、丁仁展、苏俊、鲁兴凯、马勉娣。 全国团体标准信息平台 T/YNYY001—2021 1苹果矮化自根砧木组培快繁技术规程 1范围 本文件规定了苹果（Malusspp.）砧木组织培养繁育生产过程中的设备、试剂及规划、培养基制备、 组培室消毒灭菌、砧木组培苗生产、组培苗质量及包装、标签和运输等技术内容。 本文件适用于苹果砧木(JM系列、CG系列、M系列、青砧系列)组织培养繁育苗木。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T1085苹果苗木繁育技术规程 NY/T2719苹果苗木脱毒技术规范 NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程 3术语和定义 NY/T2036、NY/T2719、NY/T1085等界定的术语和定义适用于本文件。 4设备、试剂及规划 设备、试剂按NY/T2306的规定执行。 组培苗繁育实验室或组培生产工厂规划应包括培养基制备灭菌室、清洗室、接种室、培养室、储 存室（仓库）、温室或大棚等。 5培养基制备 配方 5.1.1基本培养基 基本培养基采用MS培养基、LS培养基、QL培养基（顺序和附录相符），具体成分、配制母液浓度 分别见附录A和附录B、附录C。 5.1.2外植体初代培养基 5.1.2.1矮化自根砧JM系列 LS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）3.0mg/L～4.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.2.2矮化自根砧CG系列 全国团体标准信息平台 T/YNYY001—2021 2QL+6-苄基腺嘌呤（6-BA）0.5mg/L～1.0mg/L+吲哚乙酸（IAA）0.1mg/L～0.2mg/L+萘乙酸 （NAA）0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.2.3矮化中间砧M系列 MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～2.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.025mg/L～0.05mg/L+吲哚 丁酸（IBA）0.2mg/L～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.2.4半矮化自根砧青砧系列 MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）4.0mg/L～5.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.2mg/L～0.3mg/L+蔗糖30g/L +琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.3增殖培养基 5.1.3.1矮化自根砧JM系列 LS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）2.0mg/L～2.5mg/L+萘乙酸（NAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.3.2矮化自根砧CG系列 QL+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～1.5mg/L+玉米素（ZT）0.1mg/L～0.2mg/L+萘乙酸（NAA） 0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.3.3矮化中间砧M系列 MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～1.5mg/L+萘乙酸（NAA）0.05mg/L～0.1mg/L+吲哚丁 酸（IBA）0.2mg/L～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.3.4半矮化自根砧青砧系列 MS+6-苄基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L～2.0mg/L+吲哚乙酸（IAA）0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖20g/L +琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.4生根培养基 5.1.4.1矮化自根砧JM系列 1/2LS+萘乙酸（NAA）0.3mg/L～0.5mg/L+吲哚乙酸（IAA）0.5mg/L～1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼 脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.4.2矮化自根砧CG系列 1/2QL+萘乙酸（NAA）0.3mg/L～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 5.1.4.3半矮化自根砧青砧系列、M系列 1/2MS+吲哚乙酸（IAA）0.5mg/L～1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉7g/L～9g/L，pH5.8~pH6.0。 培养基母液 培养基母液配制应符合以下要求： 全国团体标准信息平台 T/YNYY001—2021 3a)选用化学纯以上纯度的化学试剂，使用去离子水配制； b)根据附录A、附录B和附录C的基本培养基配方成分分组和浓度扩大倍数，分别配制大量元 素（20倍）母液、钙元素（20倍）母液、微量元素（200倍)母液、铁元素（100倍）母液和 有机物（100倍）母液； c)植物生长调节物质配制成单一成分母液，浓度宜为1mg/ml； d)有机物母液、铁元素母液和植物生长调节物质母液应储存在棕色试剂瓶中，试剂瓶分别贴上 标签，标注母液名称、配制倍数、配制日期和有效期、配制人，置于冰箱冷藏保存。 培养基配制 按以下步骤进行培养基配制： a)根据培养基配方与培养基配制数量，计算各种母液的用量及配方中其它成分的用量，并记录； b)按照计算结果称量琼脂粉与蔗糖（或白砂糖），加入去离子水中，去离子水的量以培养基配 制体积的1/2～2/3为宜，不断搅拌； c)加入相应母液，加去离子水定容，充分搅拌均匀； d)用1.0mol/L盐酸或1.0mol/L氢氧化钠调节pH值至5.8~6.0。 e)将培养基分装到培养瓶中，用封口膜、封口盖或棉塞加牛皮纸封口； f)将培养基放入高压蒸汽灭菌器内灭菌。灭菌温度121℃为宜，灭菌时间15min~20min； g)灭菌后的培养基在干净、阴凉的室内常温平放保存，保存时间不宜超过2周。 6组培苗生产 组培室消毒灭菌 见附件D 无菌接种前的准备 超净工作台提前20min开机及紫外灯，接种前关闭紫外灯，用75%的酒精擦拭工作台台面及内壁。 接种工具用酒精擦拭或浸泡，再用电热接种工具灭菌器（280℃~320℃）灼烧灭菌后，置物架上冷却至 常温使用，消毒瓶、灭菌水备用。 外植体初代培养 6.3.1外植体的采集及处理 在母本采穗圃中选择性状稳定、生长健壮、无病虫危害和机械损伤的植株。在春季采集由叶芽萌 发长出几片小幼叶的幼嫩新梢、未木质化或半木质化新梢，去除新梢上展开的叶片，未展开的小幼叶可 不去除。亦可选用一年生枝，将基部浸于水中室内催芽，待叶芽萌动长出幼嫩新梢后及时采集。外植体 表面用洗洁精清洗干净，新梢剪成5cm长段，置于瓶中。 6.3.2外植体消毒 在无菌瓶中使用75%酒精消毒，时间0.5min~1min，无菌水清洗3遍，用0.1%氯化汞溶液，消毒 时间6min~15min，无菌水清洗4遍~6遍。消毒时间可根据材料的幼嫩程度、洁净程度适当调整。消毒 期间多次摇动消毒瓶，使外植体与消毒剂充分接触。使用过的氯化汞废液禁止随意倾倒，应妥善收集保 存，交由当地环保部门处理。 6.3.3外植体的切块及接种 长度1cm以下的幼嫩新梢去掉外围叶片，基部切去接触消毒液的部分，接入初代培养基。较长的 新梢切带腋芽的单节茎段，节位密集时，亦可切双节或多节茎段接种。每瓶接1个~4个外植体，接种 分布均匀，插入培养基0.5-1cm，保持腋芽露出培养基表面。封好培养瓶口，注明品种编号、接种人员、 接种日期、培养基编号等信息，放至培养箱或培养室培养。外植体出现褐化时要频繁多次转接。 全国团体标准信息平台 T/YNYY001—2021 4 增殖培养 增殖培养符合以下要求： a)将初代培养材料，去除基部愈伤组织、老化组织、褐化组织，切分成0.5cm~1.5cm大小的丛梢 或茎段，接入继代培养基，置于培养箱或培养室培养； b)材料摆布匀称，间距1.0cm~2.0cm； c)培养4周~6周左右进行一次增殖转接，转接后继续培养； d)增殖阶段，苗发生“玻璃化”，可在增殖培养基中添加1.0g/L~2.5g/L聚乙烯醇（PVA）。 e)每代增殖系数达5-6，增殖代数不应超过12代。 生根培养 增殖培养8代~12代，切取高度大于2cm的粗壮嫩梢，转入生根培养基，每瓶接种4苗~5苗，进行生 根培养。 培养条件 外植体初代培养、增殖培养、生根培养各阶段的接种材料均放至培养箱或培养室进行，温度 （24±1）℃，光照强度1500Lx~2000Lx，10h~12h光照。 瓶苗移栽 6.7.1移栽条件 宜在温室（或大棚）进行炼苗，温度