ICS 65.120 B 46 T/SDAQI 团体标准 T/SDAQI 040—2021 饲料中甜菜碱的测定 高效液相色谱法 Determination of betaine in feeds-High performance liquid chromatography 2021-09-25发布 2021-10-25 实施 山东质量检验协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 040—2021 I 版权说明 本文件系由山东质量检验协会（简称“协会”）组织创制的团体标准文本（含制定过程中的草案）， 协会拥有本文件的著作权，受《中华人民共和国著作权法》保护。除法律所允许的情形或事先得到协会 书面许可外，任何组织和个人不得以任何理由进行复制、销售、传播本文件，或抄袭、歪曲本文件等侵 权行为，否则，行为人应承 担相应的民事、行政责任，构成犯罪的，将依法追究其刑事责任。其他文件 引用本文件，不属侵权行为。 凡利用本文件进行或支持贸易、认证等商业活动，应事先购买正式文本或得到协会书面 授权。购买 本文件或获得授权，请与协会联系。 欢迎社会各界举报侵权盗版行为，协会将依法严格保护举报人信息。 联系人：范红梅 联系电话：0531-89701986 15668365153 联系邮箱：[email protected] 协会对本版权声明拥有最终解释权。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 040—2021 II 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东质量检验协会 提出并归口。 本文件起草单位：山东省产品质量检验研究院、滨州市食品药品检验检测中心。 本文件主要起草人：周莉莉、李大为、王梅、王亭亭、侯广月、刘宁、徐正、孔蒙、孙全胜、冯文 君、高伟、郭宇鹏、李艳明、卞英芳、杜营。 本文件的所有权和 解释权归山东质量检验协会。 如果您在本文件使用中发现错误或技术内容有不当之处，请及时与协会秘书处联系，将意见发送到 [email protected] 。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 040—2021 1 饲料中甜菜碱的测定高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了高效液相色谱法测定配合饲料、浓缩饲料、预混饲料、饲料添加剂甜菜碱 （或盐酸盐） 和复合甜菜碱中甜菜碱（或盐酸盐）的方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、预混饲料、饲料添加剂甜菜碱 （或盐酸盐）和复合甜菜碱中甜 菜碱（或盐酸盐）含量的测定。 本文件定量限为0.2 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的甜菜碱经水超声提取，溶液经过液-液萃取后，将提取液稀释到合适浓度后用高效液相色 谱法测定，外标法定量。 5 试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 水。 5.2 三氯甲烷。 5.3 乙腈：色谱纯。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 040—2021 2 5.4 甜菜碱（CAS：107-43-7）：纯度≥99.0 %，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.5 流动相：乙腈+水=75+25（体积比）。 5.6 甜菜碱标准储备液（4.0 mg/mL）：称取甜菜碱标准品100 mg(精确至0.01 mg)于25 mL棕色容量 瓶中，用水溶解定容。置4 ℃冰箱避光保存。有效期为3个月。 5.7 甜菜碱标准系列溶液：精确移取适量标准储备液(5.6) 于10 mL 棕色容量瓶中，用流动相（5.5） 稀释定容配成标准系列溶液，浓度分别为: 0.02 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、 1.0 mg/mL、2.0 mg/mL。现用现配。 5.8 水相微孔滤膜：0.22 µm。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：配有示差折光检测器。 6.2 电子天平：感量为0.1 mg和0.01 mg。 6.3 超声波振荡器。 6.4 离心机：转速≥6000 r/min。 7 试验步骤 按GB/T 20195制备试样，若试样1.0 mm孔径分析筛100 %通过，且混合均匀度较好，则无需粉碎； 反之粉碎过1.0 mm孔径分析筛，混匀，装入密闭容器中，避光2～8 ℃保存备用。 8 试验步骤 8.1 试液制备 饲料样品：称取饲料样品2～5 g(准确至0.1 mg)，置于50 mL离心管中，加30 mL水，摇匀，在超声 波提取器中超声提取20 min，6000 r/min离心5 min后转移至 50 mL容量瓶定容，取上清液5 mL，加入5 mL 三氯甲烷，剧烈振摇后静置，6000 r/min离心5 min。将上层过0.22 µm微孔滤膜，上机测定。 甜菜碱（或盐酸盐）和复合甜菜碱样品：称取混合均匀试样 1.0 g（精确至0.1 mg）置于50 mL离心 管中，加30 mL水，摇匀，在超声波提取器中超声提取20 min，6000 r/min离心5 min后转移至 50 mL容 量瓶定容，提取液用水稀释到适当浓度后过0.22 µm微孔滤膜，上机测定。 8.2 仪器参考条件 8.2.1 色谱柱： Atlantis® HILIC Silica柱，柱长250 mm，内径4.6 mm，粒径5 µm，或同等性能的 色谱柱。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 040—2021 3 8.2.2 流动相：乙腈+水=75+25（体积比）。 8.2.3 流速：1.0 mL/min。 8.2.4 柱温：35 ℃。 8.2.5 进样体积：10 μL。 8.2.6 示差折光检测器条件：温度35 ℃。 8.3 定量测定 按照8.2给出的色谱参考条件，分别上机测定标准系列溶液和试样溶液。试样溶液与标准溶液中甜 菜碱的保留时间相对偏差在±2.5 ％之内，甜菜碱标准溶液图谱参见附录A。以甜菜碱的浓度为横坐标， 以其响应值（峰面积）为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线相关系数不低于0.999。 9 分析结果的表述 试样中甜菜碱的含量按式（1）计算： mVcXn´´= .......................(1) 式中： X—试样中甜菜碱的含量，单位为克每千克（g/kg）； c —由标准曲线查得的试样测定液中甜菜碱的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V —定容体积，单位为毫升（mL）； n —试样的稀释倍数； m —试样质量，单位为克（g）。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果平的算数平均值表示，保留三位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10 %。 11 检测方法的灵敏度、准确度 11.1 灵敏度 本方法的定量限为0.2 g/kg。 11.2 准确度 本方法在0.2 g/kg～20 g/kg 添加浓度水平上的回收率为 95.6 %-104.1 %。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 040—2021 4 A 附录 A （资料性） 甜菜碱标准溶液的高效液相色谱图 图A. 甜菜碱标准溶液色谱图（浓度为 0.5 mg/mL） A 全国团体标准信息平台