(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211048160.4 (22)申请日 2022.08.30 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.25432 202 2.07.29 (71)申请人 河北农业大 学 地址 071001 河北省保定市南市区乐凯南 大街2596号 申请人 中国农业大 学 (72)发明人 田洪涛　宋菲　李晨　黄昆仑　 李东尧　贺晓云　张娜　闫子茹　 周杨坪　 (74)专利代理 机构 北京诚呈知识产权代理事务 所(普通合伙) 11883 专利代理师 杨凌波(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23B 7/155(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 克劳氏碱性卤杆菌PA 21菌剂及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了属于生物技术领域的一种克 劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂， 包括保藏编号为 CGMCC NO.25432的克劳氏碱性卤杆菌PA21菌株、 高岭土及羧甲基纤维素钠。 克劳氏碱性卤杆菌 PA21菌剂具有高效降解龙葵 素的作用， 通过载体 和稳定剂的筛选和比例优化， 高岭土的添加比例 为菌体匀浆的3％(m/v)， 羧甲基纤维素钠的添加 比例为菌体匀浆的0.5％(m/v)制备的克劳氏碱 性卤杆菌PA21菌剂活性高， 能够广泛应用的降解 菌剂， 为今后改降解菌的产业化生产和应用提供 重要基础。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115261284 A 2022.11.01 CN 115261284 A 1.一种克劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂， 其特征在于， 包括保藏编号为CGMCC  NO.25432的 克劳氏碱性卤杆菌PA 21菌株、 高岭土及羧甲基纤维素钠。 2.权利要求1所述的克劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂的制备方法， 其特征在于， 按照如下步 骤进行： 1)增殖培养： 将权利要求1所述的克劳氏碱性卤杆菌PA21菌株经LB液体培养基活化后 以1％接种量接入发酵培养基中， 在37℃， 200rpm培养16 ‑18h获得菌株PA21的高浓度培养 物； 2)制备成菌体匀浆： 将步骤1)所述 的菌株PA21高浓度培养物常温下5000g离心20min， 弃去大部分上清液， 将沉淀与残留的上清液混合均匀后， 制备成菌体匀浆待用； 3)PA21菌剂的制备： 向菌体匀浆中添加载体高岭土及稳定剂羧甲基纤维素钠后， 将菌 体匀浆在5 0℃电热鼓风干燥箱中烘干， 粉碎。 3.根据权利 要求2所述的克劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂的制备方法， 其特征在于， 步骤1) 中所述LB液体培养基的制备方法为称取蛋白胨10g、 牛肉膏3g、 NaCl  5g， 调节pH7.5， 用蒸馏 水定容至1L， 121℃高压灭菌20min； 所述发酵培养基的制备方法为在LB液体培养基的基础 上， 加入10g/L乳糖， 调节pH7.5， 121℃高压灭菌20mi n。 4.根据权利 要求2所述的克劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂的制备方法， 其特征在于， 步骤3) 中所述高岭土的添加比例为菌体匀浆的3％(m/v)， 羧甲基纤维素钠的添加比例为菌体匀浆 的0.5％(m/v)。 5.权利要求1所述克劳氏碱性卤杆菌PA 21菌剂在马铃薯贮藏中的应用。 6.根据权利要求5所述克劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂在马铃薯贮藏中的应用， 其特征在 于， 将制得的菌剂均匀涂抹于马铃薯 表面。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261284 A 2克劳氏碱性卤杆菌PA21菌剂及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物领域， 具体涉及克劳氏碱性卤杆菌PA 21菌剂及其制备 方法。 背景技术 [0002]马铃薯是一年生茄科植物， 在世界各地广泛种植。 马铃薯是继水稻、 小麦和玉米之 后的第四大粮食作物， 是一种粮、 菜、 饲和工业原料兼用型经济作物。 相比与其他作物在气 候、 水肥条件 上的制约， 马铃薯 不仅产量高而且栽培适应性更广、 耐寒、 耐干旱和耐贫瘠。 在 贮藏和运输过程中， 不仅温度、 湿度和光照等因素会引起马铃薯 块茎发芽， 而且还会产生机 械损伤。 这些都可导致块茎中龙葵素含量 急剧上升。 龙葵素对 所有的哺乳动物都有毒性， 而 且人类对龙葵素 的毒性更加敏感。 因此， 控制马铃薯收获后的龙葵素含量是保 障马铃薯产 业化发展和粮食安全的迫切问题。 [0003]控制马铃薯收获后龙葵素含量的措施有化学试剂调控和物理方法控制， 前者包括 氯苯胺灵、 樟脑、 乙醇等试剂处理， 同时过量使用会带来一定的食品安全问题。 在贮藏、 运输 及加工过程中， 合理调控温度、 湿度、 CO2浓度以及避免光照是防止马铃薯块茎龙葵素含量 上升的重要方式。 但是 此方法有使用局限性， 以及增 加储藏成本 。 [0004]微生物降解方法具有安全性， 但菌株发酵液不易储存、 运输， 以及使用步骤复杂， 从而阻碍 了降解菌株在马铃薯龙葵素降解中的大规模推广和应用。 发明内容 [0005]本发明旨在解决上述问题， 提供一种克劳氏碱性卤杆菌(Alkalihalobacillus   clausii)PA21  菌剂， 包括保藏编号为CGMCC  NO .25432的克劳氏碱性卤杆菌 (Alkalihalobacillus clausii) PA21菌株、 高岭土及羧甲基纤维素钠。 [0006]本发明还提供了克劳氏碱性卤杆菌PA 21菌剂的制备 方法， 按照如下步骤进行： [0007]1)增殖培养： 将权利要求1所述 的克劳氏碱性卤杆菌PA21菌株经LB液体培养基活 化后以1％接种量接入发酵培养基中， 在37℃， 200rpm培养16 ‑18h获得菌株PA21的高浓度培 养物； [0008]2)制备成菌体匀 浆： 将步骤1)所述的菌株PA21高浓度培养物常温下5000g离心20   min， 弃去大部分上清液， 将沉淀与残留的上清液混合均匀后， 制备成菌体匀浆待用； [0009]3)PA21菌剂的制备： 向菌体匀浆中添加载体高岭土及稳定剂羧 甲基纤维素钠后， 将菌体匀浆在5 0℃电热鼓风干燥箱中烘干， 粉碎。 [0010]步骤1)中所述LB液体培养基的制备方法为称取蛋白胨10g、 牛肉膏3g、 NaCl  5g， 调 节pH7.5， 用蒸馏水定容至1L， 121℃高压灭菌20min； 所述发酵培养基的制备方法为在  LB液 体培养基的基础上， 加入10g/L乳糖， 调节pH7.5， 121℃高压灭菌20mi n。 [0011]步骤3)中所述高岭土的添加比例为菌体匀浆的3％(m/v)， 羧甲基纤维素钠的添加 比例为菌体匀浆的0.5％(m/v)。 [0012]本发明还提供了克劳氏碱性卤杆菌PA 21菌剂在马铃薯贮藏中的应用。说　明　书 1/4 页 3 CN 115261284 A 3