(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210594589.7 (22)申请日 2022.05.27 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M 202 2056 2022.01.10 (71)申请人 中国计量大 学 地址 310000 浙江省杭州市钱塘区下沙高 教园区学源街258号 申请人 浙江海洋大学 (72)发明人 马正　林恒伊　韩涛　王骥腾　 俞晓平　 (74)专利代理 机构 北京恒泰铭睿知识产权代理 有限公司 1 1642 专利代理师 周成金 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C12N 9/52(2006.01) C12N 9/16(2006.01) A23K 10/12(2016.01) A23K 10/37(2016.01) C12R 1/38(2006.01) (54)发明名称 产蛋白酶及植酸酶的假单胞菌其应用和应 用方法 (57)摘要 本发明属于微生物 技术领域， 尤其涉及一种 假单胞菌， 并根据该假单胞菌提供其应用领域以 及能够具体实施的应用方法。 所述假单胞菌分类 命名为假单胞菌(Pseudomonas  sp.)PY‑4B， 保藏 中心保藏编号为： CCTCC  NO:2022056； 所述假单 胞菌PY‑4B在培养基上， 菌落为黄色， 表面光滑、 隆起， 边缘规则； 镜检结果为革兰氏阴性菌。 本发 明假单胞菌PY ‑4B解决了 人们长期渴望解决而始 终未能很好解决的固体饲料多方面问题， 尤其是 豆粕的营养利用率不高、 适口性差， 导致实际豆 粕饲喂效果较为有限的问题， 大大提高了动物对 豆粕的营养成分吸收利用效率， 能够有效减少豆 粕用量、 提高豆粕饲喂效果， 同步实现低成本化 和高收益 化改进。 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 CN 114921374 A 2022.08.19 CN 114921374 A 1.一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌， 其特 征在于， 所述假单胞菌分类命名为假单胞菌(Pseu domonas sp.)PY‑4B， 保藏单位为： CCTCC， 保 藏中心保藏编号 为： CCTCC NO:2022056， 保藏日期为： 202 2年1月10日； 所述假单胞菌PY‑4B形状及生理生 化特征包括： 形状： 在培 养基上， 菌落 为黄色， 表面 光滑， 隆起， 边 缘规则； 生理生化特征： 菌体镜检结果 为革兰氏阴性菌 。 2.根据权利要求1所述的一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌， 其特 征在于， 所述假单胞菌PY‑4B具有蛋白酶活性和植 酸酶活性。 3.根据权利要求2所述的一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌， 其特 征在于， 所述假单胞菌PY‑4B蛋白酶活性 为403.3±17.8U/mL； 所述假单胞菌PY‑4B植酸酶活性 为62.9±2.9U/mL。 4.一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌的应用， 其特 征在于， 所述假单胞菌PY‑4B用于发酵固体饲料。 5.一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌的应用方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 1)将所述假单胞菌PY ‑4B挑单菌落于培养基中， 于37 ±1℃条件下培养， 培养至培养基 中活菌数≥108CFU/mL； 2)将步骤1)培养所得菌液接种至固态发酵培养基中， 固态发酵培养基由固体饲料和水 配制， 在37 ±1℃条件下发酵培 养。 6.根据权利要求5所述的一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌的应用方法， 其特 征在于， 步骤1)所述培 养的过程中控制摇床转速为16 0～200r/min； 步骤1)所述培 养的过程持续≥24h 。 7.根据权利要求5所述的一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌的应用方法， 其特 征在于， 步骤2)所述菌液以8～1 1％(v/v)的比例接种至固态发酵培 养基中。 8.根据权利要求5或7所述的一种产蛋白酶及植酸酶的假单胞菌的应用方法， 其特征在 于， 所述发酵培 养时间为1～5d。 9.根据权利要求5所述的一种产蛋白酶及植 酸酶的假单 胞菌的应用方法， 其特 征在于， 所述固态发酵培 养基中， 固体饲料和水的用量比为1g： (0.8～1.1)mL。 10.根据权利要求5或9所述的一种产蛋白酶及植酸酶的假单胞菌的应用方法， 其特征 在于， 所述固体饲料为豆粕。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921374 A 2产蛋白酶及植酸酶的假单胞菌其应用和应用方 法 技术领域 [0001]本发明属于微生物技术领域， 尤其涉及一种产 蛋白酶及植酸酶的假单胞菌， 并根 据该假单 胞菌提供其应用领域以及能够具体实施的应用方法。 背景技术 [0002]随着我国水产养殖业的迅速发展， 传统水产饲料的需求量急剧上升， 考虑到养殖 业的可持续发展， 寻找可以替代鱼粉的优质蛋白源已成为人们关注的热点。 豆粕中富含高 质量的植物源蛋白质、 微量矿物元素和维生素， 且价格低廉， 来源稳定， 目前已经成为代替 鱼粉的主 要植物源蛋白质。 [0003]豆粕中存在多种抗营养因子如抗原蛋白和植酸等。 在抗原蛋白组成和含量中， 大 豆球蛋白和β ‑大豆伴球蛋白是其主要成分， 分别占抗原 蛋白的52％和 35％。 抗原 蛋白的存 在对动物体内某些消化酶起抑制作用， 是导致动物过敏反应引起腹泻和生长受阻的主要成 分， 也是豆粕代替鱼粉后鱼类消化率和肠道吸收率不高的主要原因。 植酸中的磷难以被单 胃动物消 化利用， 是植物性蛋白源的主要抗营养因子之一。 它 可与多种矿物质的阳离子螯 合， 也可与蛋白质等形成不溶性复合物， 降低微量元素和氨基酸的利用率， 也会影响蛋白 质、 淀粉、 脂类物质的消化利用， 限制了豆粕在饲料中的应用。 同时， 不同的抗营养因子之间 存在复杂的协同抗营养作用， 能够进一步抑制水产养殖动物的生长性能并降低动物对植物 蛋白中营养物质的消 化吸收利用能力。 因此， 目前 的研究重点是如何有效消除或降低豆粕 中的多种抗营养因子， 提高动物对豆粕的消化利用能力， 增加豆粕的适口性， 让其 发挥最佳 的饲用价 值。 [0004]目前消除豆粕中抗营养因子 的主要方法包括微生物发酵法、 酶制剂处理法、 化学 处理法、 热 处理法以及育种法。 其中微生物发酵法安全、 健康、 高效， 在适当的发酵条件下有 效降解豆粕中的抗营养因子。 相关研究表明， 经发酵 处理后的豆粕与普通豆粕相比， 难消化 的抗原蛋白降解为小分子蛋白质、 游离氨基酸以及一些生长因子， 提高了豆粕中磷的利用 率、 减轻对环 境的污染， 还 可产生乳酸、 维生素、 益生菌等活性物质改善营养质量。 已有 大量 研究表明， 自然界中的部 分霉菌、 细菌及酵母菌等菌种， 对豆粕中的抗营养因子具有一定的 降解能力， 有些菌株还具有同时降解豆粕中的植酸和 抗原蛋白等多种抗营养因子的能力。 任志青等以粗壮脉纹孢菌发酵豆粕为研究对象， 豆粕粗蛋白含量从50.39g/100g上升至 61.19g/100g,植酸含量从6.9 0g/100g减少至1.36g/100g， 有效改善豆粕营养成分和降低抗 营养因子含量。 任志青,邓泽元,宋沥 文,等.通过粗壮脉纹孢菌发酵改善豆粕营养结构的研 究.食品工业科技,2016,37(12):2 22‑225+249。 但在具体的应用上仍存在一定的局限性。 发明内容 [0005]为解决现有的豆粕中抗营养因子过高， 蛋白分子大、 溶解难度高， 且含有大量植酸 难以降解， 不利于豆粕的营养成分被 吸收利用等问题， 本发明提供了一种产蛋白酶及植酸 酶的假单 胞菌， 且基于该假单 胞菌提供了应用和及其具体方法。说　明　书 1/10 页 3 CN 114921374 A 3