(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210633132.2 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 右江民族医学院 地址 533000 广西壮 族自治区百色 市右江 区城乡路98号 (72)发明人 黄衍强　黄赞松　覃春　廖丽娟　 黄干荣　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 唐循文 (51)Int.Cl. C12N 1/36(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A61K 39/02(2006.01) A61P 31/04(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 亚硒酸钠在降低幽门螺杆菌毒力因子中的 应用 (57)摘要 亚硒酸钠在降低幽门螺杆菌毒力因子中的 应用， 用浓度4μmol/L ‑16μmol/L亚硒酸钠的脑 心浸液培养基诱导幽门螺杆菌菌株， 诱导初始菌 液浓度为1 ×105CFU/mL， 诱导2 ‑3天为1周期； 将 换新培养基后重复诱导， 重复4 ‑5个周期后， 即可 降低幽门螺杆菌毒力因子CagA表达。 本发明制备 的幽门螺杆菌， 菌株毒力因子CagA和VacA明显减 弱， 受感染的GES ‑1细胞IL‑6、 IL‑8及TNF‑α炎症 因子表达明显降低， 对细胞的黏附能力明显减 弱， 在体内感 染对小鼠胃黏膜的损伤明显减轻。 权利要求书1页 说明书6页 序列表3页 附图5页 CN 114807000 A 2022.07.29 CN 114807000 A 1.亚硒酸钠 在制备降低幽门螺杆菌毒力因子 CagA表达产品中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述亚硒酸钠的浓度为4μmol/L ‑16μmol/ L。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于， 所述 亚硒酸钠的浓度为 4 μmol/L。 4.亚硒酸钠 在降低幽门螺杆菌毒力因子 CagA表达中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 步骤为： 用浓度4μmol/L ‑16μmol/L亚硒酸 钠的脑心浸液培养基诱导幽门螺杆菌菌株， 诱导初始菌液浓度为1 ×105CFU/mL， 诱导2 ‑3天 为1周期； 将换新培养基后重复诱导， 重复4 ‑5个周期后， 即可降低幽门螺杆菌毒力因子CagA 表达。 6.权利要求 4或5所述应用制得的Ca gA减毒菌株。 7.权利要求6所述Ca gA减毒菌株在制备抗幽门螺杆菌疫苗中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807000 A 2亚硒酸钠在降低幽门螺杆菌毒力因 子中的应用 技术领域 [0001]本发明属于医药领域， 具体涉及一种亚硒酸钠在降低幽门螺杆菌毒力因子中的应 用。 背景技术 [0002]幽门螺杆菌(Helicobacter  pylori， Hp)感染率高， 能持续定植于人类胃黏膜， 可 导致多种肠胃疾病。 199 4年世界卫生组织所属国际癌症研究中心(IARC)已将幽门螺杆菌列 为第一类生物致癌因子； 2022年1月美国首次将其确认为人类致癌物。 目前， 国内外推荐根 除治疗Hp， 根除的方法是新四联疗法， 即 “抑酸剂+铋剂+两种抗生素 ”。 该方法对首次接受抗 生素治疗的患者最高有效率是95％左右， 对耐药患者， 成功根除率明显降低， 而且近年来， 耐药率逐年升高， 2017年世界卫生组织已公布了对克拉霉素耐药的幽门螺杆菌急需研发新 型抗生素。 研发新型抗生素是提高根除率的有效方法之一， 但抗生素和耐药是不可避免的 矛盾， 要人类完全根除或消灭幽门螺杆菌不现实。 因此， 借鉴卡介苗的研发经验， 探索幽门 螺杆菌减毒的方法， 使幽门螺杆菌减毒后 成为“活疫苗”长期共存于体内而不致病， 这是一 种有效防治幽门螺杆菌的方法。 [0003]卡介苗的发明， 给我们提供了菌株连续传代某些特性会丢失的经验， 但如何找到 合适的传代培养方法让毒力快速减弱， 这对不同的微生物有不同的特性要求。 Hp有两个主 要毒力决定因素是空泡毒素A(VacA)和细胞毒性相关蛋白A(CagA)， 高毒力Hp菌株VacA和 CagA均为阳性。 邵世和、 段秀杰等发现硒与Hp有密切的关系， 硒能抑制Hp生长， 改变Hp的形 态及结构， 可抑制工程菌生长使重组V acA表达量减少， 但是并没有阐述硒能减少CagA的表 达量。 CagA是目前唯一明确的可以整合到宿主细胞的Hp致癌物。 邵世和与Tummuru认为： CagA与VacA是两个既有相关性， 又相互独立的蛋白质， Cac  A虽不能直接介导Vac  A活性， 但 可起到加 工运输的作用(邵世和.硒与幽门螺杆菌相关性的研究， 吉林大学， 2004)， 会影响 Vac A的分泌， 是更重要、 更关键的致病因子。 因此抑制关键致病因子、 控制致病物合成源 头， 这是制备减毒活疫苗的要点。 [0004]我们用亚硒酸钠配制富硒培养基， 在富硒环境中诱导高毒力Hp， 发现CagE等能量 基因在开始诱导后4天首先表达降低， 9天、 12天后毒力岛VacA、 CagA等关键毒力基因也相继 出现表达量降低； 另外亚硒酸钠诱导后， Hp菌株对细胞黏附能力下降， 在C57BL/6J小鼠胃黏 膜定植量增多、 炎症反应明显减轻， 这从细胞和动物层面证明了我们的方法能有效降低Hp 毒力。 [0005]本发明涉及富硒培养基制备和诱导Hp降低CagA减毒的方法， 未见有报道； 该减毒 方法快速、 稳定、 有效、 经济， 可用于防治幽门螺杆菌感染相关疾病， 其用途属于首次公开。 发明内容 [0006]解决的技术问题： 为有效降低幽门螺杆菌的毒性， 减少感染的发病率， 本发明提供 了一种亚硒酸钠在降低幽门螺杆菌毒力因子中的应用， 该应用能有效降低幽门螺杆菌的毒说　明　书 1/6 页 3 CN 114807000 A 3