(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210839549.4 (22)申请日 2022.07.18 (71)申请人 齐鲁工业大学 地址 250353 山东省济南市长清区大 学路 3501号 (72)发明人 孙锐　周江伟　韩燕苓　 (74)专利代理 机构 济南鲁科专利代理有限公司 37214 专利代理师 滕慧 (51)Int.Cl. B01J 13/02(2006.01) A23L 2/02(2006.01) A23L 2/52(2006.01) A23L 33/135(2016.01) B01J 13/06(2006.01)B01J 13/20(2006.01) C12N 1/20(2006.01) (54)发明名称 乳杆菌在低pH值 果汁中微胶囊化包封方法 (57)摘要 本发明涉及微生物 技术领域， 尤其涉及乳杆 菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方法。 该包封方 法包括： (1)果胶制备、 (2)菌种活化与悬浮液制 备、 (3)微胶囊程序化、 (4)生物膜程序化、 (5)将 制备完成的微胶囊与无菌果汁混合混匀。 该包封 方法利用菌种自身形成的生物膜， 提高单次微胶 囊化对菌种的保护作用， 提高了益生菌在低酸碱 度果汁基质中的生存能力和稳定性。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115193350 A 2022.10.18 CN 115193350 A 1.乳杆菌在低pH值 果汁中微胶囊化包封方法， 其特 征在于， 包括如下操作步骤： (1)果胶制备 取干燥的鲜浆 果,提取制备果胶； (2)菌种活化与悬浮液制备 a活化乳酸菌种； b将步骤(1)的果胶溶解于0.1％蛋白胨水溶液中， 添加适量吐温 ‑80， 充分混匀后得果 胶溶液， 置于水浴灭菌， 冷却， 将乳酸菌沉淀物悬浮在果胶溶 液中， 混匀备用； (3)微胶囊程序化 将步骤(2)乳酸菌悬浮液使用微胶囊成型装置挤出至氯化钙溶液中， 以200 ‑250转/分 的速度搅拌； 所得微胶囊在室温下与氯化钙溶液接触30 ‑35min， 以确保完全固化； 倾析除去 氯化钙溶液， 过滤回收微胶囊； 然后利用无菌0.1％蛋白胨水溶液清洗数次， 去除多余钙离 子及未包被的细菌； 最后， 悬浮在Ri nger平衡盐溶 液中得微胶囊化乳杆菌， 备用； (4)生物膜程序化 在MRS肉汤培养基中添加3.5 ‑4.5％(W/V)氯化钙溶液， 充分灭菌混匀后， 将步骤(3)制 备好的微胶囊化乳杆菌转移至培养基中， 在37℃下连续培养18h； 倾析除去培养基后， 过滤 回收微胶囊， 并用无菌 0.1％蛋白胨溶 液清洗数次， 制备 得微胶囊； (5)将步骤(4)制备完成的微胶囊与无菌果 汁按1g/10mL进行混合混匀。 2.根据权利要求1所述的乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方法， 其特征在于， 步骤 (1)果胶的制备操作为： 将干燥的鲜浆果研磨后， 用调整至pH6的柠檬酸 ‑柠檬酸钠溶液混 合， 于65℃水浴2小时提取果胶； 于4000r/min条件下离心15 ‑25min， 去除上清液后， 用60％ 乙醇反复洗涤沉淀果胶2 ‑3次， 置于55‑65℃烘箱中12h， 收集至 干燥箱中备用。 3.根据权利要求2所述的乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方法， 其特征在于， 柠檬 酸‑柠檬酸钠溶 液的与鲜浆 果配比： 5 0:1(V:W)。 4.根据权利要求1所述的乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方法， 其特征在于， 步骤 (2)中a活化菌种过程为： 挑取乳酸菌种， 在MRS固体培养基预培养， 挑取菌种至新鲜MRS液体 培养基预活化， 37℃培养18h， 同条件下活化2次； 然后 在4000r/min条件下离心15 ‑25min， 倾 去培养基后添加生理盐水继续离心 2‑3次， 收集 沉淀物备用。 5.根据权利要求1所述的乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方法， 其特征在于， 步骤 (2)b的水浴灭菌采用95℃下水浴15min灭菌； 乳酸菌沉淀物悬浮在果胶溶液中后， 通过微涡 旋混匀备用。 6.根据权利要求1所述的乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方法， 其特征在于， 步骤 (3)微胶囊成型装置的挤出孔0.4 ‑0.5mm、 氮气压力0.3 ‑0.5bar； 挤出速率 通过注射泵控制。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115193350 A 2乳杆菌在低p H值果汁中微胶囊化包封方 法 技术领域 [0001]本发明涉及微生物技术领域， 尤其涉及乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方 法。 背景技术 [0002]除乳制品外， 含有益生菌的替代功能性食品， 尤其是果汁， 具有潜在的吸引力。 益 生菌在储存于许多酸碱度在4.0至5.0之间的发酵乳中时会丧 失生存能力。 提高果汁酸碱度 的一个可能方法是将其与牛奶成分混合， 从而 改变其感官特性， 但消费者乳糖不耐受和奶 制品胆固醇含量高也是与乳制品成分相关的两个现实问题。 微生物的微囊化经常用于保护 免受环境因素的影响， 并且活性益生菌细胞以微囊化形式的递送最近受到越来越多的关 注。 微囊化可为细菌提供一个特别合适的微环境， 使其能够在加工和储存过程中存活， 直至 在胃肠道的适当位置释放。 然而， 现有微胶 囊化方法对菌种的保护功能有限， 尤其当其处于 低酸碱度的环境下时， 其生存能力和稳定性是特别需要注意的， 鉴于此， 亟需研发一种更有 效的微胶囊 包封方法。 发明内容 [0003]本发明为了弥补现有技术的不足， 提供了乳杆菌在低pH值果汁中微胶囊化包封方 法， 利用菌种自身 形成的生物膜， 提高单次微胶囊化对菌种的保护作用， 提高了益生菌在低 酸碱度果 汁基质中的生存能力和稳定性， 解决了现有技 术中存在的问题。 [0004]为实现上述发明目的， 本发明采用的技 术方案是： [0005]乳杆菌在低pH值 果汁中微胶囊化包封方法， 包括如下操作步骤： [0006](1)果胶制备 [0007]取干燥的鲜浆 果,提取制备果胶； [0008](2)菌种活化与悬浮液制备 [0009]a活化乳酸菌种； [0010]b将步骤(1)的果胶溶解于0.1％蛋白胨水溶液中， 添加适量吐温 ‑80， 充分混匀后 得果胶溶 液， 置于水浴灭菌， 冷却， 将乳酸菌沉淀物悬浮在果胶溶 液中， 混匀备用； [0011](3)微胶囊程序化 [0012]将步骤(2)乳酸菌悬浮液使用微胶囊成型装置挤出， 挤出速率2 ‑5mL/min； 挤出到 200‑300mL、 3.5 ‑4.5％(W/V)氯化钙溶液中， 以200 ‑250转/分的速度搅拌； 所得微胶囊在室 温下与氯化钙溶液接触30 ‑35min， 以确保完全固化； 倾析除去氯化钙溶液， 通过玻璃过滤漏 斗重力过滤回收微胶 囊； 然后利用无菌0.1％蛋白胨水溶液清洗数次， 去除多余钙 离子及未 包被的细菌； 最后， 悬浮在Ri nger平衡盐溶 液中得微胶囊化乳杆菌， 备用； [0013](4)生物膜程序化 [0014]在MRS肉汤培养基中添加3.5 ‑4.5％(W/V)氯化钙溶液， 充分灭菌混匀后， 将步骤 (3)制备好的微胶 囊化乳杆菌转移至培养基中， 在37℃下连续培养18 h； 倾析除去培养基后，说　明　书 1/6 页 3 CN 115193350 A 3