(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210801036.4 (22)申请日 2022.07.08 (71)申请人 山东省农业科 学院家禽研究所 （山 东省无特定病原鸡研究中心） 地址 250100 山东省济南市工业北路202号 (72)发明人 赵增成　林树乾　黄中利　殷斌　 刘月月　杨世发　衣云鹏　 (74)专利代理 机构 济南诚智商标专利事务所有 限公司 3710 5 专利代理师 韩百翠 (51)Int.Cl. A01K 67/02(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种鸡湿热 下利证模型的构建方法 (57)摘要 本发明公开了一种鸡湿热下利证模型的构 建方法， 将大肠埃希菌菌株CVCC1558的培养液， 经泄殖腔注入SPF鸡直肠， 正常饲养， 可构建出鸡 湿热下利证模型， 模型构建成功的判断标准为： 模型鸡腹泻可达7天以上， 粪便色黄而臭秽， 排便 频繁， 有努责表现， 发热； 剖检， 肠内容物稀薄， 色 黄， 整个肠道粘膜出现卡他性或出血性肠炎， 无 大肠埃希菌全身感染所致肝周炎、 心包炎、 腹膜 炎、 气囊炎的病理变化。 该方法简单、 快速， 构建 的病证模型完全符合中兽医湿热下利证的病机 和证候特征， 临床症 状明显， 剖检特征 典型， 病程 时间长， 模型稳定， 重复性好， 适用于鸡湿热下利 证的中兽医防治研究， 为其防治药物的药效评价 奠定了基础。 权利要求书1页 说明书8页 附图5页 CN 115281146 A 2022.11.04 CN 115281146 A 1.一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 将大肠埃希菌菌株CVCC1558的培养 液， 经泄殖腔注入S PF鸡直肠， 正常饲养， 构建鸡湿热 下利证模型。 2.如权利要求1所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 所述模型构建成 功的判断标准为： 模 型鸡腹泻可达7天以上， 粪便 色黄而臭秽， 排便频繁， 有努 责表现， 发热； 剖检， 肠内容物稀薄， 色黄， 整个肠道粘膜出现卡他性或出血性肠炎， 无大肠埃希菌全身感 染所致肝周炎、 心包炎、 腹膜炎、 气囊炎的病理变化。 3.如权利要求2所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 所述发热的热势 不高， 平均升高不足0.5℃。 4.如权利要求2所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 模型鸡还具有肠 粘膜脱落， 肠壁变薄症状， 以及白细胞增 加症状。 5.如权利要求1 ‑4中任一项所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 制备 大肠埃希菌菌株CVCC 1558含量为(1.0 ‑2.0)×109个/ml的培养液， 经泄殖腔注入SPF鸡直肠 0.5‑1cm， 攻毒剂量 为2‑5ml/只， 正常饲养， 构建鸡湿热 下利证模型。 6.如权利要求5所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 所述培养液的制 备方法为： 将大肠埃希菌菌株CVCC1558接种于营养肉汤培养基中， 36 ‑38℃摇床培养18 ‑ 24h。 7.如权利要求6所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 所述大肠埃希菌 CVCC1558营养肉汤培 养液的攻毒剂量 为3ml/只， 菌液中细菌含量 为(1.0‑1.3)×109个/ml。 8.如权利要求5所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 所述经泄殖腔注 入SPF鸡直肠具体为： 使用注射器吸取新鲜的培养液， 拨去针头， 将SPF鸡倒置， 将注射器经 泄殖腔插 入直肠0.5 ‑1cm， 注入大肠埃希菌 CVCC1558。 9.如权利要求5所述的一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 所述SPF鸡选择 20‑32日龄的S PF雏鸡。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115281146 A 2一种鸡湿热下利证 模型的构建 方法 技术领域 [0001]本发明属于中兽医病证模型构建技术领域， 涉及 一种鸡湿热下利证模型的构建方 法。 背景技术 [0002]家禽腹泻是一种常见病， 既影响家禽的生产性能,又影响家禽的健康和环境卫生, 可导致饲料转化率低、 成活率下降， 成为制约家禽业生产效益的重要因素。 其发病原因复 杂， 细菌、 病毒、 球虫感染、 饲料霉变、 饲养环境等多种因素均可引起本病发生。 腹泻， 中兽医 称之为下利， 中兽医在腹泻的治疗中， 根据病因和症状的不同， 可分为许多不同的证型， 如 湿热下利、 寒湿下利、 脾虚泄泻、 食滞肠胃等。 腹泻的治疗， 必须要针对不同的病因、 证型， 灵 活选用不同治法和药物， 才能取得好的疗效。 在家 禽养殖生产中， 因湿热而引起的腹泻占比 最高， 危害也 最大。 [0003]湿热下利证是指大肠 湿热下注而引起的一种急性腹泻病证， 其临床特征为： 泄泻， 泻下急迫， 泻而不爽， 粪便色黄而臭秽。 还常常伴有身热不扬， 口渴， 舌苔黄腻， 脉滑数或濡 数等临床表现， 严重时湿热伤及肠中血络， 大便中可带脓血。 感受湿热邪气是本证的病因， 湿邪下注大肠， 则大便溏泄。 湿热互结于肠， 热性 急， 暴注下迫， 故泻下急迫； 湿性粘滞， 阻滞 大肠气机， 排出不畅， 则泻而不爽。 肠内湿热蕴积， 故粪便色黄而臭秽。 机体抗邪则发热， 因 热蕴湿中， 热不能完全发越于外， 故虽发热但 不是高热， 表现为身 热不扬。 舌苔黄腻、 脉濡数 均为湿热表现。 [0004]中医病证模型是评价药效及研究中医药作用机制的有效工具， 对研发有效的新型 中兽药产品， 促进中兽药现代化发展具有重要作用， 然而病证模型研究却 一直是中医药现 代化进程中的一个瓶颈。 在中医湿热下利病证模型 的构建上， 文献中多采用小鼠或大鼠使 用内毒素攻毒的方法， 但使用内毒素方法具有病程短、 药效不宜评价的弊端， 同时小鼠、 大 鼠与家禽类差异太大， 也不适合禽用药物的研究。 在家禽湿热下利证研究中， 有 人采用大肠 埃希菌腹腔注射 或肌肉注射的方法， 进 行了探讨， 但试验鸡多表现为高热、 全身败血症的病 理变化， 并不符合湿热下利证的中医特点； 也有 人采用点眼、 滴鼻或口腔灌服大肠埃希菌进 行人工感染的方法， 可能是 由于菌株选择不当或是胃液酸性环境的原因， 均未出现明显的 临床症状。 目前还没有发现家 禽湿热下利证模型成功构建的报道。 因此， 亟待成功构建出符 合中兽医特点的鸡湿热下利证模型， 对研究防治本类病证的中兽药新制剂， 并对其药效进 行客观评价， 具有重要意 义。 发明内容 [0005]本发明克服了上述现有技术的不足， 提供一种鸡湿热下利证模型的构建方法。 该 方法采用大肠埃希菌菌株CVCC1558的培养液经 泄殖腔灌肠感染的方式， 构建出典型的湿热 下利证模型， 可用于鸡湿热 下利证防治药物的药效评价， 为 新型中兽药的研发 奠定了基础。 [0006]本发明的技术方案是： 一种鸡湿热下利证模型的构建方法， 其特征是， 将大肠埃希说　明　书 1/8 页 3 CN 115281146 A 3