(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210646219.3 (22)申请日 2022.06.08 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.1.12734 2020.07.20 (71)申请人 微康益生菌 （苏州） 股份有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济技 术 开发区龙桥路10 33号 (72)发明人 方曙光　杨恒飞　程文　严涛　 陈珂可　蒋大成　朱建国　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 赵颖 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01)C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂及其制 备方法和应用 (57)摘要 本发明涉及一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌 菌剂及其制备方法和应用， 所述高温稳定型鼠李 糖乳杆菌菌剂 包括鼠李糖乳杆菌和保护剂； 所述 保护剂包括海藻糖、 麦芽糊精、 甘油和酵母菌。 本 发明创造性地选择由海藻糖、 麦芽糊精、 甘油和 酵母菌组成的保护剂以及在制备菌剂过程中始 终维持体系的pH为5.7 ‑5.9， 能够明显提高鼠李 糖乳杆菌的高温储存 稳定性， 有利于鼠李糖乳杆 菌菌剂的贮存和功效维 持， 延长其货架期。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115093993 A 2022.09.23 CN 115093993 A 1.一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂， 其特征在于， 所述高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌 剂包括鼠李糖乳杆菌和保护剂； 所述保护剂包括海藻糖、 麦 芽糊精、 甘油和酵母菌 。 2.根据权利要求1所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂， 其特征在于， 所述保护剂以质 量份数计包括海藻糖10 0‑120份、 麦 芽糊精30‑60份、 甘油3 0‑50份和酵母菌80 ‑100份。 3.根据权利要求2所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂， 其特征在于， 所述保护剂以质 量份数计包括海藻糖1 10‑120份、 麦 芽糊精35‑45份、 甘油3 0‑40份和酵母菌90 ‑100份。 4.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂， 其特征在于， 所述 鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus  rhamnosus)LRa05菌株， 保藏编号为CGMCC   No.1.12734。 5.根据权利要求1 ‑4中任一项所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂的制备方法， 其特 征在于， 所述制备 方法包括： (1)将扩培后的鼠李糖乳杆菌 接种于种子 培养基中培 养； (2)将步骤(1)的培 养物接种于发酵培 养基中培 养； (3)将步骤(2)的培 养物降温后离心， 获得菌泥； (4)将菌泥与保护剂混合进行均质， 均质后冷冻干燥， 即得。 6.根据权利要求5所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述 种子培养基和发酵培养基的组分均包括： 蛋白胨、 牛肉浸粉、 葡萄糖、 乙酸钠、 酵母浸膏、 柠 檬酸氢二铵、 K2HPO4·3H2O、 MgSO4·7H2O、 MnSO4、 吐温‑80、 半胱氨酸盐酸盐； 优选地， 所述接种的接种量 为1‑5％。 7.根据权利要求5或6所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)所述培 养至OD600≥2.5； 优选地， 步骤(2)所述培 养至对数生长期后期； 优选地， 步骤(2)所述培 养在35‑37℃下进行， 培 养过程中控制体系pH为5.7 ‑5.9。 8.根据权利要求5 ‑7中任一项所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂的制备方法， 其特 征在于， 所述降温至25℃以下； 优选地， 所述降温过程中控制体系pH为5.7 ‑5.9。 9.根据权利要求5 ‑8中任一项所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂的制备方法， 其特 征在于， 所述保护剂包括海藻糖100 ‑120g/L、 麦芽糊精30 ‑60g/L、 甘油30 ‑50g/L、 酵母细胞 80‑100g/L、 水； 优选地， 所述保护剂的pH为7.8 ‑8.2； 优选地， 所述菌泥与保护剂的质量比为(0.5 ‑1.5):1。 10.根据权利要求1 ‑4中任一项所述的高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂在制备食 品、 保健 品或药品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115093993 A 2一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌 菌剂及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于益生菌菌剂技术领域， 涉及一种鼠李糖乳杆菌菌剂及其制备方法和应 用， 具体涉及一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌 菌剂及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]鼠李糖乳杆菌是人体正常菌群之一， 也是目前最受全球关注的益生菌之一。 该菌 能够耐受动物消 化道环境,肠道黏着率高， 定植能力强， 具有调节肠道菌群、 促进双 歧杆菌 和嗜酸乳杆菌生长的作用， 具有 预防和治疗腹泻、 预防呼吸道感染、 排出毒 素、 预防龋齿、 预 防过敏等作用。 [0003]菌粉便于存储和运输， 并有利于后期加工。 目前真空冷冻干燥是生产益生菌菌粉 最有效的干燥技术， 其可以很好的保持菌体的生理生化特性。 但冻干过程中， 大量水分的升 华流失， 必定会对细胞完整性和稳定性带来不可逆的损伤。 因此， 冻干时添加适当的保护剂 提高菌体的存活率是有必要的。 海藻糖、 脱脂 乳和蔗糖等是目前 经常被使用的冻干保护剂。 [0004]常规的发酵工艺和保护剂体系有可能提高鼠李糖乳杆菌冻干粉的活性， 但目前市 场上的鼠李糖乳杆菌菌粉在高温条件下的稳定性较差， 这对以其为原料生产的产品的存储 条件、 功效和货架期会有很大 的影响。 所以， 在保持鼠李糖乳杆菌高活性的基础上， 有效地 提高其在高温条件下的稳定性 就尤为重要。 发明内容 [0005]针对现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种鼠李糖乳杆菌菌剂及其制备方 法和应用， 具体提供一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌 菌剂及其制备 方法和应用。 [0006]为达到此发明目的， 本发明采用以下技 术方案： [0007]第一方面， 本发明提供一种高温稳定型鼠李糖乳杆菌菌剂， 所述高温稳定型鼠李 糖乳杆菌 菌剂包括鼠李糖乳杆菌和保护剂； [0008]所述保护剂包括海藻糖、 麦 芽糊精、 甘油和酵母菌 。 [0009]影响冻干菌剂细胞存活率及贮藏稳定性的主要因素包括菌种特性、 培养基、 培养 条件与收获期、 起始细胞浓度、 冻干 保护剂及其pH值、 冷冻过程、 干燥速度等， 其中冻干 保护 剂是最为复杂、 最难选择的关键因素。 本发明创造性地选择 由海藻糖、 麦芽糊精、 甘油和酵 母菌组成的保护剂能够明显提高鼠李糖乳杆菌的高温储存稳定性， 在初始活菌数6.0 × 1011CFU/g的情况下， 37℃储存2个月存活率达到23％以上， 有利于鼠李糖乳杆菌菌剂的贮存 和功效维持， 延长其货架期。 [0010]优选地， 所述保护 剂以质量份数计包括海 藻糖100‑120份、 麦芽糊精30 ‑60份、 甘油 30‑50份和酵母菌80 ‑100份。 [0011]当海藻糖、 麦芽糊精、 甘油和酵母菌以上述特定的质量配比进行组合时， 其在提高 鼠李糖乳杆菌的高温储 存稳定性上 更加显著。 [0012]所述海藻糖的质量份数可以选择100份、 105份、 110份、 115份、 120份等； 所述麦芽说　明　书 1/6 页 3 CN 115093993 A 3