(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211130604.9 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 西安石油大 学 地址 710065 陕西省西安市电子二路18号 申请人 西安清科智联环境实验室有限公司 (72)发明人 孙妩娟　柯从玉　翟文　王嗣昌　 孙蕊　张群正　秦芳玲　 (74)专利代理 机构 西安瀚汇 专利代理事务所 (普通合伙) 61279 专利代理师 章冬霞 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01) C09K 17/14(2006.01) B09C 1/10(2006.01)C12R 1/385(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/74(2006.01) (54)发明名称 一种高效复合降解菌剂及对含油土壤生物 修复工艺 (57)摘要 本发明涉及土壤修复领域， 公开了一种高效 复合降解菌剂， 包括铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝酵母菌。 本发明所构建 出的高效微生物菌群能够以石油烃为唯一碳源 代谢生物表 面活性剂， 能够大幅度降低含油污泥 (土壤)中的石油类物质的含量， 同时具有降解周 期短， 成本低和不造成二次污染等优点。 本发明 公开的高效微生物菌群具有良好的共生关系， 对 石油烃降解具有明显的协同效应。 本发明修复工 艺在含油污泥堆土下方设置了良好的通风环境， 而表面覆盖的材料具有良好的保湿和透气效果， 不仅有效增加了微生物处理效果， 大大缩短处理 时间， 而且能有效降低处 理成本。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115537353 A 2022.12.30 CN 115537353 A 1.一种高效复合降解菌剂， 其特征在于， 包括铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆 菌和热带假丝酵母菌 。 2.根据权利要求1所述的高效 复合降解菌剂， 其特 征在于， 其制备 方法包括以下步骤： 1)将铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝酵母菌分别接种到肉汤培 养基中进 行摇瓶培养， 分别获得铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝酵母 菌种子液； 2)将步骤1)得到的铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝酵母菌种子 液， 混合， 然后加入到种子 培养基中进行放大发酵培 养， 得到复合降解菌剂。 3.根据权利要求2所述的高效复合降解菌剂， 其特征在于， 所述铜绿假单胞菌、 洪城红 球菌、 枯草芽孢杆菌和热 带假丝酵母菌种子液， 按体积比2:2:1:4混合。 4.根据权利要求2所述的高效复合降解菌剂， 其特征在于， 混合的种子液， 按5wt％ ‑ 10wt％的接种量加入到种子培养基中进行放大发酵培养， 当活菌数>109CFU/mL时停止发 酵。 5.根据权利要求2所述的高效复合降解菌剂， 其特征在于， 种子培养基的组成为： 葡萄 糖10g/L、 尿素2g/L、 酵母膏0.5g/L、 K2HPO40.5g/L、 KH2PO40.5g/L、 MgSO4·7H2O 0.2g/L、 CaCl2·2H2O 0.2g/L、 柠檬酸钠0.1g/L， pH＝6～8。 6.权利要求1～5任一项所述的高效 复合降解菌剂应用于含油土壤修复。 7.根据权利要求6所述的高效复合降解菌剂应用于含油土壤修复， 其特征在于， 含油土 壤修复工艺包括： 将含油土壤经过机械粉碎后， 添加氮肥、 磷 肥、 膨松剂和复合降解菌剂， 再 翻搅均匀， 所述膨松剂的添加量为土壤总质量的2％～5％， 复合降解菌剂的添加量为土壤 总质量的5％。 8.根据权利要求7所述的高效复合降解菌剂应用于含油土壤修复， 其特征在于， 所述膨 松剂包括锯末、 粉碎的秸秆和粉碎的稻草中的任意一项及两项以上 的组合； 控制待修复的 含油土壤中C:N: P＝90:5:1。 9.根据权利要求7所述的高效复合降解菌剂应用于含油土壤修复， 其特征在于， 在地面 铺上防渗布， 防渗布的四周高于地面8～10cm， 在防渗布上面摆放一排直径4～6cm 的钢管， 钢管间的距离为20～30c m， 在钢管上面放上不锈钢或铁丝支撑网， 网眼孔径2～3cm， 然后在 支撑网上将翻搅均匀的含油土壤堆放至8 0～120cm厚， 在含油土壤表面覆盖一层厚度为2～ 4cm的膨松剂进 行保温及防止水分快速蒸发， 当土壤含水率低于20％时需要补 充水分， 水分 补充方式为在锯末上方喷洒水使 水分均匀渗透到土壤中， 直到总体含水率为20％ ‑30％， 在 自然条件下发酵处理45～60天， 处理过程中不需要翻耕透气操作， 同时， 在处理过程中不要 把土壤压实。 10.根据权利要求9所述的高效复合降解菌剂应用于含油土壤修复， 其特征在于， 在发 酵处理过程中， 每隔5 ‑7天补充一次水分， 补充水分的方式为从含油污泥上分喷洒； 当所处 理的含油土壤含油量大于5％时需要每隔15～20天补加一次复合降解菌剂， 补加量为土壤 总质量的2％～5％， 补加方式为从含油污泥上方喷洒； 每隔一周监测一次菌浓和含油率变 化， 取样方式为： 从含油污泥表面以下5～10cm处取样， 选择5个样点采集等量样 品， 将五个 样点样品合并一个样品， 然后分别采用平板计数法和红外测油仪对菌浓和含油率进行测 定， 当土壤中的含油率达 到3000mg/kg以下时处 理结束。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537353 A 2一种高效复合降解菌剂及对含油土壤生物修复工艺 技术领域 [0001]本发明涉及土壤修复领域， 具体是涉及一种高效复合降解菌剂及对含油土壤生物 修复工艺。 背景技术 [0002]在石油开采、 运输、 储存及炼制过程中都不可避免地出现原油泄露问题， 当其洒落 到地面上后会造成土壤的污染。 一方面， 石油中含有大量胶质、 沥青质以及苯系物、 蒽、 酚、 芘等有毒有害物质， 甚至还含有放射性物质和重金属， 其中很多物质具有 “三致”效应(如多 环芳烃(PAHs))， 若处理不当会对周围生态环境和人类健康造成严重威胁。 另一方面， 当泄 漏的石油渗入到土壤中的量超过土壤的自净容量后， 积累的油类物质将长期残留其中， 破 坏土壤结构， 影响土壤通透性， 同时还会损害植物根部， 阻碍根的呼吸与吸收， 最终导致植 物死亡， 严重影响土壤生产力和农作物产量。 [0003]目前， 含油 土壤修复技术可以分为传统的物理修复、 化学修复和新兴的生物修复 这三大方法。 其中物理化学法研究时间较长， 而且相对比较成熟， 但成本较高， 而且处理不 彻底， 容易造成二次污染。 生物修复法的原理是将石油烃类作为微生物新陈代谢的碳源， 利 用微生物的代谢活动 将含油污泥中的有害物质进 行同化降解， 使其最终完全转化为无害的 CO2和H2O等物质， 实现对含油土壤的无害化处理， 同时， 处理过程中能够增加土壤腐殖质含 量。 国外在石油污染土壤微生物修复方面的研究起步较早， 目前已经开始推广应用， 并且技 术日趋成熟。 我国在该方面的研究起步较晚， 到90年代末才开始对微生物修复含油土壤技 术进行研究， 对该技术的研究普遍停留在高效降解菌种的筛选和室内评价基础上， 现场试 验较少， 而且 存在现场应用规模较小、 实施工艺繁琐以及处 理时间长等问题。 发明内容 [0004]为了克服现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种高效复合降解菌剂及对含 油土壤修复工艺。 本发明复合降解菌剂对石油烃具有良好的降解效果， 采用本发明提供 的 处理工艺可以有效提高微 生物修复含油土壤效果， 缩短修复时间。 [0005]为实现以上目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]一种高效复合降解菌剂， 包括铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假 丝酵母菌 。 [0007]所述高效 复合降解菌剂的制备 方法， 包括以下步骤： [0008]1)将铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝酵母菌分别接种到肉 汤培养基中进 行摇瓶培养， 分别获得铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝 酵母菌种子液； [0009]2)将步骤1)得到的铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和 热带假丝酵母菌 种子液， 混合， 然后加入到种子 培养基中进行放大发酵培 养， 得到复合降解菌剂。 [0010]优选的， 所述铜绿假单胞菌、 洪城红球菌、 枯草芽孢杆菌和热带假丝酵母菌种子说　明　书 1/5 页 3 CN 115537353 A 3