(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211031217.X (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 南京轩凯生物科技股份有限公司 地址 210008 江苏省南京市江北新区新锦 湖路3-1号中丹生命 科学产业园一期A 栋10楼 (72)发明人 冯小海　雷鹏　许宗奇　杨燕波　 徐虹　 (74)专利代理 机构 江苏圣典律师事务所 32 237 专利代理师 肖明芳 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) C12P 19/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种骆驼刺泛菌胞外多糖的提取方法 (57)摘要 本发明提供了一种骆驼刺泛菌胞外多糖提 取方法， 包括如下步骤： （1） 调节驼刺泛菌胞外多 糖的发酵液的pH至11~12； （2） 将 （1） 处理后得到 的发酵液在80~90℃加热下反应， 静置使菌体自 然沉降， 弃去沉降的菌体， 保留微微浑浊的上清 层； （3） 向 （2） 处理后得到的上清层中加入珍珠 岩， 搅拌均匀后通过板框压滤机过滤除去菌体， 得到澄清的滤液； （4） 向 （3） 处理后得到的滤液中 加入去离子水进行稀释， 搅拌均匀后， 使用陶瓷 膜过滤器进行脱盐脱色处理， 当透过液pH=6.5~ 7， 电导率≤9 00μs/cm后结束过滤， 保留浓缩液； （5） 将 （4） 处理后得到的浓缩液喷雾干燥， 即得纯 化的泛菌多糖。 本发明制备的泛菌多糖， 纯度≥ 92%， 分子量≥10 00 kDa， 多糖易溶解。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115232226 A 2022.10.25 CN 115232226 A 1.一种骆驼刺泛菌胞外多糖提取 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： （1） 调节驼刺泛菌胞外多糖的发酵 液的pH至11~12； （2） 将 （1） 处理后得到的发酵液在80~90℃加热下反应， 静置使菌体自然沉降， 弃去沉降 的菌体， 保留微 微浑浊的上清层； （3） 向 （2） 处理后得到的上清层中加入珍珠岩， 搅拌均匀后通过板框压滤机过滤除去 菌体， 得到澄清的滤 液； （4） 向 （3） 处理后得到的滤液中加入去离子水进行稀释， 搅拌均匀后， 使用陶瓷膜过滤 器进行脱盐脱色处 理， 当透过 液pH=6.5~7， 电导率≤900 μs/cm后结束过 滤， 保留浓 缩液； （5） 将 （4） 处 理后得到的浓 缩液喷雾 干燥， 即得 纯化的泛菌多糖。 2.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 步骤 （1） 所用骆 驼刺泛菌为Pantoea  alhagi XK‑11， 菌种保藏号为CGMCC  NO.15525， 发酵液中胞外多糖含 量≥2%， 分子量≥15 00 kDa。 3.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 反应 时间为60‑90min， 静置6h以上。 4.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中， 珍珠 岩的加入量 为上清液质量的1%~2%。 5.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 所述板框压滤机 使用滤布的规格为 400‑600目。 6.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 步骤 （4） 中， 加入 3~4倍体积的去离 子水进行稀释。 7.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 陶瓷膜孔径为 10000 Da。 8.根据权利要求1所述的骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述 驼刺泛菌胞外多糖的发酵 液通过如下步骤得到： 1） 将在固体平板上培养的菌种接种至新鲜的LB液体培养基中， 在37℃， 200  rpm条件下 培养10‑12 h， 获得种子液； 2） 种子液以1%~8%v/v的接种量转接至泛菌多糖 的发酵培养基中， 发酵温度为30  ℃， pH控制在6.6~7.2， 通气量为0.7  vvm， 搅拌转速为700 ‑800 rpm， 发酵24  h， 即获得骆驼刺泛 菌XK‑11胞外多糖的发酵 液。 9.根据权利要求8所述的提取骆驼刺泛菌胞外多糖的方法， 其特征在于， 所述发酵培养 基组成如下： 蔗糖  60 g/L、 蛋白胨  10 g/L、 NaCl  10 g/L、 磷酸氢二钠  1.9 g/L和磷酸二氢 钠 0.792 g/L， pH调至7.1。 10.根据权利要求8所述的提取骆驼刺泛菌胞外多糖的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 反应时间为60 ‑90min， 静置6 ‑8h， 珍珠岩的加 入量为上清液质量的1%~2%； 板框压滤机使用 滤布的规格为 400‑600目； 陶瓷膜孔径为10 000 Da。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232226 A 2一种骆驼刺泛菌胞外多糖的提取方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物分离 工程技术领域， 具体涉及发酵多糖的提取 方法。 背景技术 [0002]多糖是一类结构复杂的高分子聚合物， 其不仅参与生命体的组成， 还具备抗氧化、 抗疲劳、 抗辐射、 抗肿瘤、 降血脂、 抑制炎症和调节免疫等功能效应， 对富含多糖的健康营养 食品需求也 随之增多。 时下科学技术发展迅速， 已有越来越多的功能性多糖被逐步开发与 利用。 自然界中的多糖主要来自植物、 动物和微生物。 近年来， 微生物多糖具备多种优点且 可以通过生物技术途径从廉价的可再生原料中制备， 在 食品和、 医疗、 医美等领域开 发潜力 巨大， 因而受到大家的密切关注。 微生物多糖包括胞外多糖、 胞壁多糖和胞内多糖。 其中， 微 生物胞外多糖因无毒安全、 生产周期短等特点研究较多， 逐渐成为植物和动物等多糖产品 的有效替代品。 但由于多糖分子量大， 提取过程黏度高， 因此其分离纯化长期以来一直是困 扰工业生产的一大难题。 醇沉法是目前提取各种多糖的主流工艺， 但醇沉法会破坏有些种 类多糖的其溶解 性能和高维构效， 针对不同种类的多糖需要开发具有针对性的提取 方法。 [0003]骆 驼 刺 泛 菌 胞 外 多 糖 是 一 种 新 型 的 微 生 物 多 糖 资 源 ，其 在 农 业 (CN201810815380.2)， 日化领域已表现出较好的应用前景， 但其纯化过程需要消耗大量的 乙醇(CN202010738964.1)， 导致其下游分离成本过高， 价格昂贵， 严重限制了其在食品、 日 化等领域的应用。 发明内容 [0004]发明目的： 针对骆驼刺泛菌胞外多糖分离纯化中因有机试剂用量大导致的生产成 本过高的技术问题， 本申请提供了一种骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 通过优化条件， 不仅 节省了有机试剂， 同时制备的泛菌多糖溶解 性能更佳。 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明公开了一种骆驼刺泛菌胞外多糖提取方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： [0006](1)调节驼刺泛菌胞外多糖的发酵 液的pH至11～12； [0007](2)将(1)处理后得到的发酵液在80～90℃加热下反应， 静置使菌体自然沉降， 弃 去沉降的菌体， 保留微 微浑浊的上清层； [0008](3)向(2)处理后得到的上清层中加入珍珠岩， 搅拌均匀后通过板框压滤机过滤除 去菌体， 得到澄清的滤 液； [0009](4)向(3)处理后得到的滤液中加入去离子水进行稀释， 搅拌均匀后， 使用陶瓷膜 过滤器进行脱盐脱色处理， 当透过液pH＝6.5～7， 电导率≤900 μs/cm后结束 过滤， 保留浓缩 液； [0010](5)将(4)处 理后得到的浓 缩液喷雾 干燥， 即得 纯化的泛菌多糖。 [0011]其中， 步骤(1)所用骆驼刺泛菌为Pantoea  alhagi XK‑11， 菌种保藏号为CGMCC   NO.15525， 发酵 液中胞外多糖含量≥2％， 分子量≥15 00kDa。说　明　书 1/5 页 3 CN 115232226 A 3