(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210864479.8 (22)申请日 2022.07.21 (71)申请人 宜兴市天石饲料有限公司 地址 214258 江苏省无锡市宜兴 市官林镇 前城村 (72)发明人 杨文武　陈刚　陈冠雄　邹益东　 戴青　邹苏燕　 (74)专利代理 机构 无锡睿升知识产权代理事务 所(普通合伙) 32376 专利代理师 姬颖敏 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A61K 35/76(2015.01) A61K 49/00(2006.01) A61P 31/04(2006.01)C12R 1/145(2006.01) A61K 35/741(2015.01) (54)发明名称 一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂 研发方法 (57)摘要 本发明涉及生物 抗菌剂技术领域， 且公开了 一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发 方法， 包括以下步骤： S1： 活化培养， 把荚膜放线 杆菌从保存好的油管中转接于固体培养基平板 中， 于25‑30℃， 培养32 ‑42h， 进行活化处理； S2： 培养接种， 取培养好的固体培养基平板， 用接种 针挑单菌落接种于固体培养基试管中。 本发明能 够有效防治NE， 提高饲料转化率的生物抗菌制 剂， 通过与噬菌体cocktail的联用， 为动物的生 态健康养殖提供新的途径， 通过把培养基培养偶 的菌落放入密封罐中发酵， 并加入到液体发酵培 养基中， 控制发酵温度、 通气量、 转速和酸碱度， 能够提高培 养基的发酵速度大 大提高产量。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115094008 A 2022.09.23 CN 115094008 A 1.一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 活化培养， 把荚膜放线杆菌从保存好的油管中转接于固体培养基平板中， 于25 ‑30 ℃， 培养32‑42h， 进行活化处 理； S2： 培养接种， 取培养好的固体培养基平板， 用接种针挑单菌落接种于固体培养基试管 中， 于26‑38摄氏度， 培 养30‑45h； S3： 继续发酵， 把培养基培养偶的菌落放入密封罐中发酵， 按照接种量为2 ‑6％加入到 液体发酵培 养基中， 发酵温度为26 ‑32摄氏度； S4： 离心处理， 在培养基培养后对在培养基培养后对其进行离心处理， 离心时采用微滤 加超滤的纯化浓缩膜过滤， 然后收集菌体， 收集菌体剩下的离心液回收， 然后当做培养基原 料备用； S5： 制备悬浮液， 把离心后的菌体加入混合罐中， 然后加入保护剂， 制备悬浮液， 加入菌 体后置于70 ‑80℃， 浓度为2 ‑6％的碱溶液中， 然后用去离子水和酸溶液反复冲洗， 然后置于 打浆机内， 形成乳浊 液； 然后置 于离心机内， 获得 悬浮液； S6： 比对分析， 通过宏基因组分析禽NE的病原菌群数据信息， 分析家禽养殖中Cp菌群特 征及致病特性， 建立噬菌体cocktai l及益生菌制剂的动物模型， 进行临床试验及评估； S7： 分装， 把制备的悬浮液进行分装， 分装时对 包装瓶进行紫外线杀菌处 理； S8： 储存， 把分装后的物料放入冷冻室内冷冻干燥储 存。 2.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S3中密封罐中的装料系数为0.5 ‑0.65， 在发酵时进行通气， 通气量为每小时1 ‑ 4m3。 3.根据权利要求2所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S3中在发酵时带动密封罐转动， 转速为60 ‑125r/min， 并进行间歇转动， 间歇时间 为2‑7min。 4.根据权利要求3所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S3中在发酵时调节pH， pH值 为6‑8。 5.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S3中在发酵后再次放入发酵 罐中二次发酵。 6.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S5中针对病原特征获得Cp特异性噬菌体及益生菌， 研发能够对抗Cp中主要致病 型别的噬菌体cocktai l及益生菌保健制剂。 7.根据权利要求6所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S5中建立噬菌体cocktail及益生菌制剂的动物模 型， 进行临床试验及评估， 将噬 菌体cocktail及益生菌制剂联合应用于规模化禽养殖场NE的预防和治疗， 评价其抗菌效果 及防治NE的保护性效果。 8.根据权利要求1所述的一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 其特征 在于， 所述S7中在分装时进行检测， 检测时进行抽检， 抽检后称重分装。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115094008 A 2一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物抗菌剂技术领域， 具体为一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制 剂研发方法。 背景技术 [0002]抗菌剂是指能够在一定时间内， 使某些微生物(细菌、 真菌、 酵母菌、 藻类及病毒 等)的生长或繁殖保持在必 要水平以下的化学物质， 细菌耐药是全球大健康下的关注热点， 如何减少抗 生素， 有效控制细菌病都将势在 必行。 [0003]目前具有芽孢难根除的Cp， 获得了噬菌体 的有效应用， 且噬菌体因病原的存在而 生存， 即病原完全杀死， 噬菌体才会逐渐消减， 直到病原完全清除， 这与传统抗生素随时间 出现衰减不同， 从而有力的证实了噬菌体在针对此类难根除病原的高效性和持久性， 是任 何一种抗菌物质无法比拟的， 但是目前此类的研发还不够成熟， 不能满足人们的要求， 因此 提出一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法。 发明内容 [0004](一)解决的技 术问题 [0005]针对现有技术的不足， 本发明提供了一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研 发方法， 通过与益生菌联用建立雏鸡肠道微生物屏障， 获得能够有效防治NE， 提高饲料转化 率的生物抗菌制剂。 [0006](二)技术方案 [0007]为实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0008]一种防治禽产气荚膜梭菌的生物抗菌制剂研发方法， 包括以下步骤： [0009]S1： 活化培养， 把荚膜放线杆菌从保存好的油管中转接于固体培养基平板中， 于 25‑30℃， 培养32‑42h， 进行活化处 理； [0010]S2： 培养接种， 取培养好的固体培养基平板， 用接种针挑单菌落接种于固体培养基 试管中， 于26 ‑38摄氏度， 培 养30‑45h； [0011]S3： 继续发酵， 把培养基培养偶的菌落放入密封罐中发酵， 按照接种量为2 ‑6％加 入到液体发酵培 养基中， 发酵温度为26 ‑32摄氏度； [0012]S4： 离心处理， 在培养基培养后对在培养基培养后对其进行离心处理， 离心时采用 微滤加超 滤的纯化浓缩膜过滤， 然后收集菌体， 收集菌体剩下的离心液回收， 然后当做培养 基原料备用； [0013]S5： 制备悬浮液， 把离心后的菌体加入混合罐中， 然后加入保护 剂， 制备悬浮液， 加 入菌体后置于70 ‑80℃， 浓度为2 ‑6％的碱溶液中， 然后用去离子水和酸溶液反复冲洗， 然后 置于打浆机内， 形成乳浊 液； 然后置 于离心机内， 获得 悬浮液； [0014]S6： 比对分析， 通过宏基因组分析禽NE的病原菌群数据信息， 分析家禽养殖中Cp菌 群特征及致病特性， 建立噬菌体cocktai l及益生菌制剂的动物模型， 进行临床试验及评估；说　明　书 1/4 页 3 CN 115094008 A 3