(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210758713.9 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 中国烟草总公司辽宁省公司 地址 110000 辽宁省沈阳市沈河区东陵路 120号 (72)发明人 马欣　刘刚　寇宝实　李继博　 彭超　 (74)专利代理 机构 陕西铭一知识产权代理有限 公司 61287 专利代理师 李健 (51)Int.Cl. A01N 63/27(2020.01) A01N 43/16(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12N 1/38(2006.01) C12R 1/385(2006.01) (54)发明名称 一种防治烟草靶斑病的生防菌剂及其制备 方法和用途 (57)摘要 本发明涉及烟草病害防治 方法领域， 具体公 开了一种防治烟草靶斑病的生防菌剂及其制备 方法和用途， 所述生防菌剂由铜绿假单胞菌菌液 和壳聚糖混合而成， 所述铜绿假单胞菌菌液的活 性成分为铜绿假单胞菌LK ‑12， 所述铜绿假单胞 菌LK‑12的保藏编号是CGMCC  10966。 本发明中的 生防菌剂及其稀释液均能够抑制立枯丝核菌的 生长， 抑菌效果达到85.71 ％， 为立枯丝核菌侵染 产生的烟草靶斑病的防治提供了技术支撑和理 论依据。 权利要求书1页 说明书4页 CN 115039794 A 2022.09.13 CN 115039794 A 1.一种防治烟草靶斑病的生防菌剂， 其特征在于， 所述生防菌剂由铜绿假单胞菌菌液 和壳聚糖混合而成； 所述壳聚糖与所述铜绿假单 胞菌菌液用量比为0.8 ‑1g： 100mL； 所述铜绿假单 胞菌菌液的活性成分为铜绿假单 胞菌LK‑12； 所述铜绿假单 胞菌LK‑12的保藏编号是CGM CC 10966。 2.如权利要求1所述的生防菌剂， 其特征在于， 所述生防菌剂中铜绿假单胞菌的活菌数 为4‑6ⅹ107cfu/mL。 3.一种权利要求1所述的生防菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 具体包括如下步骤： S1， 种子液制备： 将铜绿假单胞菌LK ‑12菌株活化培养， 培养条件为32 ‑37℃、 140 ‑150r/ min、 20‑24h， 然后接种于液体培养基中， 于32 ‑37℃、 140 ‑150r/min培养20 ‑24h， 获得种子 液； S2， 生防菌剂制备： 将S1中制备得到的种子液按照接种量3 ‑4mL/100mL接种于新鲜的液 体培养基中， 于32 ‑37℃、 140 ‑150r/min下培养40 ‑48h， 获得铜绿假单胞菌菌液， 然后加入壳 聚糖混合均匀， 获得生防菌剂。 4.如权利要求3所述的生防菌剂的制备方法， 其特征在于， S1中， 所述铜绿假单胞菌的 培养条件为32 ‑37℃、 140 ‑150r/min、 20‑24h。 5.如权利要求3所述的生防菌剂的制备方法， 其特征在于， S1中， 活化所述铜绿假单胞 菌所用的培 养基为LB固体培 养基。 6.如权利要求3所述的生防菌剂的制备方法， 其特征在于， S2中， 所述壳聚糖与所述铜 绿假单胞菌菌液用量比为0.8 ‑1g： 100mL。 7.如权利要求3所述的生防菌剂的制备方法， 其特征在于， S2中， 所述生防菌剂中铜绿 假单胞菌的活菌数为 4‑6ⅹ107cfu/mL。 8.一种权利要求1所述的生防菌剂在 烟草靶斑病防治中的用途。 9.如权利要求8所述的生防菌剂在烟草靶斑病防治中的用途， 其特征在于， 所述烟草靶 斑病是由立 枯丝核菌浸染 发生的。 10.一种权利要求1所述的铜绿假单 胞菌在烟草靶斑病防治中的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115039794 A 2一种防治烟草靶斑病的生防菌剂及其制备方 法和用途 技术领域 [0001]本发明涉及烟草病害防治方法领域， 具体涉及一种防治烟草靶斑病的生防菌剂及 其制备方法和用途。 背景技术 [0002]烟草是一年生或有限多年生草本， 全体被腺毛， 根粗壮， 茎高0.7 ‑2米， 基部稍木质 化。 叶矩圆状披针形、 披针形、 矩圆形或卵形， 顶端渐尖， 基部渐狭至茎成耳状而半抱茎， 长 10‑30(‑70)厘米， 宽8 ‑15(‑30)厘米， 柄不明显或成翅状柄。 花序顶生， 圆锥状， 多花； 花梗长 5‑20毫米。 花萼筒状或筒状钟形， 长20 ‑25毫米， 裂片三角状披针形， 长短不等； 花冠漏斗状， 淡红色， 筒部色更淡， 稍弓曲， 长3.5 ‑5厘米， 檐部宽1 ‑1.5厘米， 裂片急尖； 雄蕊中1枚显著较 其余4枚短， 不伸出花冠喉部， 花丝基部有毛。 蒴果卵状或矩圆状， 长约等于宿存萼。 种子圆 形或宽矩圆形， 径约0.5毫米， 褐色。 夏秋 季开花结果。 [0003]烟草除能制成卷烟、 旱烟、 斗烟、 雪茄烟等供人吸食外， 尚有多种医疗用途。 烟草喜 温暖、 向阳的环境及肥沃疏松的土壤， 耐旱， 不耐寒。 喜温暖、 向阳环境， 不耐寒， 较耐热。 烟 草栽培过程中容易产生多种病害， 如花叶病、 角斑病等。 近年来， 烟草出现了一种新病害— 烟草靶斑病。 [0004]烟草靶斑病主要危害烟草叶片， 最初表现为小的圆形水渍状斑点， 然后迅速扩大， 病斑不规则， 直径可达2 ‑10cm， 病斑内的组织浅褐色， 常有同心轮纹， 病斑的坏死部分易碎 脱落形成穿孔， 形似枪弹射击后留在靶子上的空洞， 因此， 称之为靶斑病， 经鉴定发现烟草 靶斑病主 要是由立 枯丝核菌 侵染导致， 立枯丝核菌属于无 胞菌目， 丝核菌属。 [0005]目前对于烟草靶斑病的防治分为化学药剂防治和生物防治， 化学药剂防治中现有 技术有记载的药剂有嘧菌酯、 代森锰锌和氟啶胺 等； 但是长期使用化学药剂， 容易对环境造 成二次污染， 同时也会使得病原菌产生抗药性； 因此， 生物防治成为优选的方法， 但是目前 对于烟草靶斑病具 备防治效果的微 生物种类单一， 防治效果的稳定性 也不高。 发明内容 [0006]为解决上述技术问题， 本发明提供了一种防治烟草靶斑病的生防菌剂及其制备方 法和用途， 所述生防菌剂由铜绿假单胞菌菌液和壳聚糖混合而成， 所述铜绿假单胞菌菌的 保藏编号是CGMCC  10966， 该生防菌剂能够抑制立枯丝核菌的生长， 抑菌效果达到85.71％， 为立枯丝核菌 侵染产生的烟草靶斑病的防治提供了技 术支撑和理论依据。 [0007]本发明的第一个目的是提供一种防治烟草靶斑病的生防菌剂， [0008]所述生防菌剂由铜绿假单 胞菌菌液和壳聚糖混合而成； [0009]所述壳聚糖与所述铜绿假单 胞菌菌液用量比为0.8 ‑1g： 100mL； [0010]所述铜绿假单 胞菌菌液的活性成分为铜绿假单 胞菌LK‑12； [0011]所述铜绿假单 胞菌LK‑12的保藏编号是CGM CC 10966。 [0012]进一步地， 所述生防菌剂中铜绿假单 胞菌的活菌数为 4‑6ⅹ107cfu/mL。说　明　书 1/4 页 3 CN 115039794 A 3