(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211082318.X (22)申请日 2022.09.06 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M 202 21097 202 2.07.12 (71)申请人 云南省微 生物发酵工程研究中心有 限公司 地址 650000 云南省昆明市中国 （云南） 自 由贸易试验区昆明片区经开区昌宏路 49号 (72)发明人 杨润霞　赵崇钧　毛明林　郭绍青　 潘菲　彭嘉诚　周欢　李博　 (74)专利代理 机构 昆明鸿昊知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 53211 专利代理师 陈芃綦(51)Int.Cl. A01N 47/38(2006.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A01G 7/06(2006.01) A01G 22/45(2018.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种防治烟草赤星病的组合物、 制备方法和 应用 (57)摘要 本发明公开了一种防治烟草赤星病的组合 物、 制备方法和应用， 涉及农药领域， 解决了在防 治烟草赤星病时， 如何减少化学农药使用量的问 题。 本发明防治烟草赤星病的组合物， 包括生防 菌剂、 异菌脲和助剂， 其中， 生防菌剂为枯草芽孢 杆菌YWF‑21‑2103制得的发酵液， 并且生 防菌剂 与异菌脲的体积比为4∶1。 该组合物通过生防菌 剂和异菌脲共同防治烟草赤星病， 对烟草赤星病 病原菌有很强的抑制作用， 对烟草赤星病显示出 很好的防病效果， 而且还具有病菌不易产生抗药 性、 增效作用明显、 成本低、 效果好、 对环境友好 的优势； 另 一方面， 该组合物通过生防菌剂和异 菌脲共同防治烟草赤星病， 能够在很大程度上减 少化学农药的使用， 减少环境污染， 提高作物品 质和安全性。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115363043 A 2022.11.22 CN 115363043 A 1.一种防治烟草赤星病的组合物， 其特征在于， 包括生防菌剂、 异菌脲和助剂， 其中， 所 述生防菌剂为枯草芽孢杆菌YWF ‑21‑2103制得的发酵液， 并且所述生防菌剂与所述异菌脲 的体积比为 4∶ 1。 2.根据权利要求1所述的防治烟草赤星病的组合物， 其特征在于， 所述生防菌剂稀释倍 数为150～200倍， 所述异菌 脲稀释倍数为80 0～1000倍。 3.根据权利要求1或2所述的防治烟草赤星病的组合物， 其特征在于， 所述助剂为吐温 20， 所述助剂的质量 为所述生防菌剂和/或所述异菌 脲质量的0.5 ‰。 4.一种根据权利要求1至3中任一项防治烟草赤星病的组合物的制备方法， 其特征在 于， 包括如下步骤： 将枯草芽孢杆菌 YWF‑21‑2103菌种培养发酵制得生防菌剂； 将生防菌剂稀释后与助剂混合； 将异菌脲稀释后与生防菌剂混合， 生防菌剂与异菌 脲的体积比为 4∶ 1。 5.根据权利要求4所述的防治烟草赤星病的组合物的制备方法， 其特征在于， 将枯草芽 孢杆菌YWF‑21‑2103菌种培养发酵制得生防菌剂包括如下步骤： 步骤1， 菌种活化， 将 ‑80℃下保存的枯草芽孢杆菌YWF ‑21‑2103菌株在LB固体培养基上 活化18～ 24h， 得活化的枯 草芽孢杆菌 YWF‑21‑2103菌株； 步骤2， 种子液制备， 用无菌接种方法挑取步骤1中长势较优的枯草芽孢杆菌YWF ‑21‑ 2103菌株接种到50ml  LB液体培养基中， 在温度为35℃、 转速为180rpm/min条件下培养24h， 得枯草芽孢杆菌 YWF‑21‑2103种子液； 步骤3， 发酵液制备， 按照种子液、 培养液体积比为1∶10的比例将步骤2所得的枯草芽孢 杆菌YWF ‑21‑2103种子液接入到车间发酵料培养基中， 在温度为35℃条件下， 转速为 180rpm/min条件下培养28～35h， 得枯草芽孢杆菌YWF ‑21‑2103发酵液， 枯草芽孢杆菌YWF ‑ 21‑2103发酵液即为生防菌剂。 6.根据权利要求5所述的防治烟草赤星病的组合物的制备方法， 其特征在于， 枯草芽孢 杆菌YWF‑21‑2103发酵液的有效活菌数为2.0 ×109cfu/g以上。 7.根据权利要求5所述的防治烟草赤星病的组合物的制备方法， 其特征在于， 步骤1中， LB固体培养基的组成为： 细菌学蛋 白胨10g/L， 酵母提取粉5g/L， 氯化钠5g/L， 水1L， 琼脂粉 20g/L。 8.根据权利要求5所述的防治烟草赤星病的组合物的制备方法， 其特征在于， 步骤3 中， 以质量计， 车间发酵料培养基的组成为： 葡萄糖2.5～3.0％、 玉米淀粉0.8～1.2 ％、 豆粕粉 2.2～2.8％、 蛋白胨0.5～0.8％、 磷酸氢二钾0.08～0.12％、 硫酸镁0.03～0.06％、 余量为 水， 并且车间发酵 料培养基的pH为6.8～7.5 。 9.权利要求1至 3中任一项防治烟草赤星病的组合物在 烟草种植中的应用。 10.根据权利要求9所述的防治烟草赤星病的组合物在烟草种植中的应用， 其特征在 于， 所述组合物采用喷雾的方法施用于烟叶 叶片的正 面和反面。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115363043 A 2一种防治烟草赤星病的组合物、 制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及农药技术领域， 尤其涉及一种防治烟草赤星病的组合物、 制 备方法和 应用。 背景技术 [0002]烟草(学名： Nicotiana  tabacum)属于茄科， 一年生草本植物。 烟草赤星病是由链 格孢属真菌(Alternaria  alternate(Fr)Kei ssler)引起的病害， 又称褐斑斑病、 赤斑病。 烟 草赤星病具有潜 育期短、 暴 发快、 流行广、 危害 大等特点， 在烟叶近成熟时危害叶片， 发病初 期为褐色小斑点， 以后逐渐扩大为1～2cm  的深褐色至赤褐色病斑， 为圆形或不规则圆形， 扩展中的病斑周围有淡黄色晕圈， 病斑具有多重同心轮纹， 病斑质脆易破， 病害严重时， 许 多病斑相互连接合并成大斑块枯焦。 烟草 赤星病导致可供烘烤的烟叶损失过多， 不利于优 质烟叶生产， 但至今除了化学农药外， 尚无有效的防治手段。 [0003]赤星病于1916年在北京首次发现， 1964年在河南、 山东烟区大肆传播，  1990年后 迅速在全国各烟区发展传播， 赤星病造成的病害损失居第2位。 赤星病的烟田发病率为5％ ～10％， 重病田可达20％甚至50％以上。 据近年统计， 赤星病对烟叶产值的负 影响远大于对 产量的影响， 烟叶产量损失率 最高为 28.56％， 产值损失率 最高可达89.67％。 [0004]烟草是叶用经济作物， 对烟叶的外观和内在质量有特殊的要求， 农药残留、 病原菌 抗药性以及 对卷烟安全的影响， 限制了农药的大规模利用， 同时也不利于烟叶的出口。 近年 来， 随着烟草生产及烟草制品逐渐 向生态、 安全、 优质方向发展， 以及人们对自身健康和生 存环境的日益重视， 人们逐渐意识到对烟草病害进 行安全、 无污染、 无公害绿色防控的重要 性。 [0005]因此， 在防治烟草赤星病时， 如何减少化学农药的使用量， 以减少环境污染， 提高 作物安全性， 已成为本领域 技术人员亟 待解决的技 术问题。 发明内容 [0006]本发明的目的是提出一种防治烟草赤星病的组合物、 制 备方法和应用， 解决了在 防治烟草 赤星病时， 如何减少化学农药使用量的技术问题。 本发明优选技术方案所能产生 的诸多技 术效果详见 下文阐述。 [0007]为实现上述目的， 本发明提供了以下技 术方案： [0008]本发明防治烟草赤星病的组合物， 包括生防菌剂、 异菌脲和助剂， 其中， 所述生防 菌剂为枯草芽孢杆菌YWF ‑21‑2103制得的发酵液， 并且所述生防菌剂与所述异菌脲的体积 比为4∶ 1。 [0009]本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)， 其编号为YWF ‑21‑2103， 保藏登记 号为CCTCC  NO： M 20221097， 保藏日期2022年07月12日， 保藏单位： 中国典型培养物保藏中 心， 保藏地址： 中国.武汉.武汉大 学(湖北省武汉市武昌区八一路2 99号)。 [0010]根据一个优选实施方式， 所述生防菌剂稀释倍数为150～200倍， 所述异菌脲稀释说　明　书 1/7 页 3 CN 115363043 A 3