(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210568810.1 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 中国海洋大学 地址 266100 山东省青岛市崂山区松岭路 238号 (72)发明人 朱嘉莹　王巧晗　凌滨峰　张静　 高旭　宫庆礼　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种适用 于葛仙米生长的混合营养培养方 法 (57)摘要 本发明公开了一种适用于葛仙米生长的混 合营养培养方法， 在BG11培养基调节pH后， 加入 一定量的葡萄糖使葡萄糖浓度为0.09 ‑0.11mol/ L后得到改良BG11培养基， 备用； 选择粒径3 ± 1mm， 富有弹性， 结构紧实， 颜色墨绿的葛仙米作 为藻种， 将藻种接种在改良BG11培养基上； 然后 将接种好藻种的改良BG11培养基在以下条件下 进行培养： 温度： 21 ‑23℃、 光照： 50μmol ·m‑2· s‑1、 光暗周期L： D=10h： 14h。 本发明方法操作简 单； 获得的改良培养基， 营养均衡， 在此理化条件 下， 可以提高葛仙米生长率和生物量积累量， 特 别有利于提高工厂化生产效率、 提升现有情况下 工厂化微藻培养的效率。 权利要求书1页 说明书3页 CN 115011511 A 2022.09.06 CN 115011511 A 1.一种适用于葛仙米营养生长的混合营养 培养方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： （1） 制备葛仙米培养基： 在BG11培养基调节pH后， 加入一定量的葡萄糖使葡萄糖浓度 为 0.09‑0.11mol/L后得到改良BG1 1培养基， 备用； （2） 接种藻种： 选择粒径3 ±1mm， 富有弹性， 结构紧实， 颜色墨绿的葛仙米作为藻种， 将 藻种接种在步骤 （1） 中的改良BG1 1培养基上； （3） 混合营养培养： 将步骤 （2） 中接种好藻种的改良BG11培养基在以下条件下进行培 养： 温度： 21 ‑23℃、 光照： 5 0 μmol·m‑2·s‑1、 光暗周期L： D=10 h： 14h。 2.根据权利 要求1所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述的BG11培养 基调节pH， 指的是将pH调至7.0 ‑7.2； 然后将其经过120℃高温100kpa高压灭菌20分钟得到 不完全培 养基， 冷却后加入葡萄糖使葡萄糖浓度为0.09 ‑0.11mol/L， 得到改良BG1 1培养基。 3.根据权利要求1所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 所述的葡萄糖浓度为 0.1mol/L。 4.根据权利要求1所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中， 所述的接种， 接 种密度为： 6.64 ‑6.70g藻/L培 养基。 5.根据权利要求4所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 所述的接种， 接种密度为： 6.67g藻/L培 养基。 6.根据权利要求1所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中， 混合营养培养的 条件优选为： 温度： 2 2℃、 光照： 5 0 μmol·m‑2·s‑1、 光暗周期L： D=10 h： 14h。 7.根据权利要求1所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 所述的葛仙米营养生长的混 合培养方法用于葛仙米规模化培 养。 8.根据权利要求1所述的混合营养培养方法， 其特征在于， 所述的葛仙米营养生长的混 合培养方法用于普通葛仙米或翡翠绿葛仙米规模化培 养。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011511 A 2一种适用于葛仙米生长的混合营养培养方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 一种适用于微藻生长的混合营养培养方法， 具体涉及一种适用于葛仙 米生长的混合营养 培养方法， 该 方法适用于 蓝细菌， 主 要适用于拟球念珠藻的规模化培 养。 背景技术 [0002]蓝藻又名蓝细菌， 是一类进化历史悠久、 革兰氏染色阴性、 无鞭毛、 含叶绿素a， 但 不含叶绿体(区别于真核生物的藻类)、 能进行产氧性光合作用的大型单细胞原核生物。 葛 仙米(Nostoc sphaeroi des)， 学名为拟球状念珠藻， 属蓝藻 门蓝藻纲念珠藻目念珠藻科念 珠藻属， 是我国传统出口的一种 珍贵野生的食药两用蓝藻。 根据 《本草纲目》 等记载葛仙米 有治疗夜盲症、 脱肛、 烫伤和兼具美容之功效。 据研究葛仙米不仅蛋白质含量高、 蛋白质质 量好、 营养价值高为优质蛋白质、 蛋白质中的氨基酸品种齐全， 结构合理基本符合FAO/WHO 专家委员会于1973年推普的人体必需氨基酸模式， 而且葛仙米还富含多糖和具有 特殊的保 健功能的维生素C、 B族维生素、 β ‑胡萝卜素、 微量元素等营养成分。 同时兼具固碳和固氮双 重生态价 值。 [0003]葛仙米主要栖息于我国湖 北省鹤峰县， 但近年来其野生资源量急速锐减， 农民不 施农家肥而改施化肥， 改变了土壤结构,  如碳铵等肥料改变了土壤的酸碱性； 大量使用除 草剂， 改变了葛仙米赖以生存的生长环境， 使野生葛仙米数量急剧下降。 葛仙米资源量恢复 方法研究和锐减原因分析受到了相关学者的广泛关注。 同为蓝菌门念珠藻目的一种藻类， 发状念珠藻 （ Nostoc flagelliforme ） ， 俗称发菜， 也因野生资源量锐减而被列为国家一级 重点保护野生 植物。 因此提高葛仙米的生物量是现在急需解决的问题之一。 [0004]葛仙米一般采用自养培养方式， 使用BG11培养基进行培养， 该方法已在实验室和 工厂化养殖中沿用多年， 且有在 葛仙米培养方面取得不错的效果。 但是， 此培养方法仍有不 足之处， 使得葛仙米产量 不高， 不能满足市场需要。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足， 而提供一种适用于葛 仙米营养生长的混合营养培养方法， 对传统葛仙米养殖方法进行改良， 可以有效提高葛仙 米的生物量。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： 一种适用于葛仙米营养生长的混合营养 培养方法， 包括以下步骤： （1） 制备葛仙米培养基： 在BG11培养基调节pH后， 加入一定量的葡萄糖使葡萄糖浓 度为0.09 ‑0.11mol/L后得到改良BG1 1培养基， 备用； （2） 接种藻种： 选择粒径3 ±1mm， 富有弹性， 结构紧实， 颜色墨绿的葛仙米作为藻 种， 将藻种接种在步骤 （1） 中的改良BG1 1培养基上； （3） 混合营养培养： 将步骤 （2） 中接种好藻种的改良BG11培养基在以下条件下进行 培养： 温度： 21 ‑23℃、 光照： 5 0 μmol·m‑2·s‑1、 光暗周期L： D=10 h： 14h。说　明　书 1/3 页 3 CN 115011511 A 3