(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210985127.8 (22)申请日 2022.08.17 (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 23560 2021.10.1 1 (71)申请人 江苏省农业科 学院 地址 210014 江苏省南京市玄武区钟灵街 50号 (72)发明人 明亮　刘凤权　赵延存　谷春艳　 (74)专利代理 机构 江苏圣典律师事务所 32 237 专利代理师 杨文晰 (51)Int.Cl. A01N 63/22(2020.01) A01N 25/26(2006.01) A01N 25/24(2006.01) A01P 21/00(2006.01)A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C05G 3/00(2020.01) C05G 3/40(2020.01) C05G 3/50(2020.01) C05G 3/60(2020.01) A01C 1/06(2006.01) A01C 1/08(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂及其 制备方法和用途 (57)摘要 本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌水稻生物 种衣剂及其制备方法和用途， 该水稻生物种衣剂 以保藏号为CGMCC  No.23560 的贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus  velezensis)ZXC ‑1发酵液为活性成 分， 包含卵磷脂、 高级脂肪酸酯， 聚天冬胺酸 (PASP)、 亚磷酸钾、 警戒色、 成膜剂、 增稠剂、 防腐 剂； 本发明提供的水稻生物种衣剂， 不仅具有常 规种衣剂 的特点， 还具有特殊的脂质体结构， 能 够形成囊泡结构， 包裹生防菌， 达到缓释效果； 不 仅能够防治水稻恶苗病、 白叶枯和细菌性条斑 病， 还可以促进水稻发芽和生长。 能有效减少化 学农药的施用量， 保证粮食安全。 权利要求书1页 说明书9页 附图3页 CN 115152794 A 2022.10.11 CN 115152794 A 1.一种贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂， 其特征在于， 所述贝莱斯芽孢杆菌水稻生物 种衣剂由如下成分组成， 以质量百分比计， 卵磷脂5%~15%， 高级脂肪酸酯5%~20%， 聚天冬胺 酸5%~20%， 亚磷酸钾5%~20%， 乳化剂1%~5%， 警戒色0.5%~2%， 成膜剂5% ‑10%， 增稠剂0.1%~ 0.5%， 防腐剂0.2 %~0.5%， 贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus velezensis ） ZXC‑1发酵液补足余 量； 所述贝莱斯芽孢杆菌ZXC ‑1发酵液的含菌量≥108cfu/ml； 所述贝莱斯芽孢杆菌ZXC ‑1保藏号为CGMCC No. 23560。 2.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种 衣剂， 其特征在于， 所述贝莱斯芽 孢杆菌水稻生物种衣剂中， 以质量百分比计， 卵磷脂5%， 高级脂肪酸酯15%， 聚天冬胺 酸10%， 亚磷酸钾10%， 乳化剂1%， 警戒色1%， 成膜剂5%1%， 增 稠剂0.2%， 防腐剂0.2%， 贝莱斯芽孢杆菌 发酵液补足100%。 3.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种 衣剂， 其特征在于， 所述卵磷脂为 磷脂酰胆碱 。 4.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种 衣剂， 其特征在于， 所述高级脂肪 酸为油酸甲酯。 5.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种 衣剂， 其特征在于， 所述成膜剂为 苯丙乳液。 6.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种 衣剂， 其特征在于， 所述增稠剂为 纳米纤维素。 7.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂， ， 其特征在于， 所述防腐剂 为卡松。 8.如权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂的制备方法， 其特征在于， 具体步 骤如下： （1） 制备贝莱斯芽孢杆菌ZXC ‑1发酵液 将贝莱斯芽孢杆菌ZXC ‑1菌种， 划线接种至NA固体平板上， 在26℃～30℃条件下培养 24h~36h； 然后挑取NA固体平板上一个单菌落接种NB培养基中， 26℃ ～30℃下振荡培养16h~ 24h， 获得种子液； 再将种子液以体积比1%~5%的比例接种到NB培养基中进行发酵， 发酵温度 27℃~30℃， 获得含菌量≥108cfu/ml的贝莱斯芽孢杆菌ZXC ‑1发酵液， 备用； 将卵磷脂和高级脂肪酸混合并搅拌至澄清， 再加入乳化剂， 搅拌成为油相， 备用； 将聚天冬胺酸亚磷酸钾加入到步骤 （1） 获得的贝莱斯芽孢杆菌ZXC ‑1发酵液中， 获得水 相生防菌发酵 液， 备用； 将水相生防菌发酵液逐滴加入步骤 （2） 获得的油相中， 以800rpm搅拌， 至粘稠后， 再以 1200rpm速率搅拌至达到转相点， 继续搅拌30min； 然后加入警戒色、 成膜剂、 增稠剂、 防腐 剂， 再以15 00rpm速率搅拌均匀， 即得 所述贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂。 9.如权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种 衣剂在防治水稻恶苗病和细菌性条斑 病中的应用。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述应用是指将所述水稻生物种衣剂与水 稻种子以重量比为 1:30‑50进行包衣， 常温阴干后， 直接播种育苗， 即实现对 水稻恶苗病、 细 菌性条斑病和白叶枯病的防治。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115152794 A 2一种贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂及其制备方 法和用途 技术领域 [0001]本发明涉及 一种生物农药制剂， 特别是一种贝莱斯芽孢杆菌水稻生物种衣剂及其 制备方法和用途。 背景技术 [0002]水稻是我国重要的粮食作物之一， 其种植面积占全国粮食作物面积的30％， 产量 则占粮食总 产量的40％。 随着种植面积的增加， 水稻病虫害 呈逐年上升趋势， 导致水稻产量 损失严重。 特别是近几年来， 水稻恶苗病、 白叶枯病和细菌性条斑病成为水稻病害中难以防 治的病害， 作为种传病害， 一旦 发病将造成不可估量的损失， 常规的杀菌剂和使用方法很难 达到满意的防治效果。 特别是大量化学药剂的使用， 不仅没有达到满意效果， 还造成病害抗 药性升高， 农药残留超标。 [0003]种衣剂可以将防治时期提前， 在早期防治病害的发生， 成为恶苗病和细菌性条斑 病防治的新型模式。 种衣剂是由杀虫剂、 杀菌剂、 复合肥料、 微量元素、 植物生长调节剂、 缓 释剂和成膜剂等经过先进工艺加工制成的， 可直接或经稀释后包裹于种子表面， 形成具有 一定强度和通透性保护膜的农药制剂。 种衣剂播种 前使用， 可综合防治苗期病虫害， 省药、 省时、 省工、 省 钱、 有利于环境保护， 包衣后又能促进作 物生长， 使其根系强大、 抗逆性 强， 可 保产、 增产， 经济、 生态效益显著。 [0004]现有生物型种衣剂是以活体微生物(有益或拮抗)或微生物代谢产物为活性成分， 辅以一些助剂配方(如营养元素、 成膜剂、 防冻剂和分散剂等)， 通过发酵、 剂型加工等步骤 制备。 生物种衣剂能在种子表面形成具有一定强度和 通透性的生物保护层膜， 生物型种衣 剂中的微生物能随着种子的萌发在其表面和内部定殖， 并随着植株的生长在根系和土壤中 扩展和定殖， 从而达到防病杀虫的目的。 浙江省种子公司在1997年研制出了以芽孢杆菌为 生物活性物质的生物种衣剂， 该生物种衣剂能防治纹枯病、 立枯病、 疫霉病等， 此外， 该生物 种衣剂还具有促进植物 生长的作用。 商晗武等研究表明， ZSB生物种衣剂能用于防治 水稻细 菌性条斑病、 白叶枯病、 纹枯病、 稻瘟病、 早稻苗期立枯、 烂秧、 恶苗病等， 还能促进作物的生 长和增强其抗逆能力。 赵夏初等采用不同浓度的生物种衣剂处理稻麦种子， 结果表明， 所有 处理均能提高种子发芽峰值、 发芽指数和种子活力指数， 且对植株有促生作用， 增加了根长 和苗高。 梁建红用生物种衣剂处理杂交水稻种子， 结果表明， 该种衣剂能提高秧苗素质、 促 进植株生长、 防治植物病害。 郭建胜研究表明， 水稻种子使用生物种衣剂包衣后， 苗期无烂 秧， 生物种衣剂可以降低恶苗病、 青枯病、 立枯病的发病率。 冯斌根据室内生物活性测定和 盆栽试验结果， 筛选得到了几株枯草芽孢杆菌， 这些菌株对水稻 纹枯病菌和棉花立枯病菌 均有较好的防治效果， 经过助剂等的筛选， 制备出了以YZ和BS ‑208菌株原粉为活性物质的 生物型种衣剂。 [0005]但这些传统的种衣剂生产采用湿法超微粉碎工艺， 将有效成分、 分散剂、 润湿剂、 防腐剂、 警戒色、 成膜剂、 消泡剂、 防冻剂、 水等， 经过剪切釜或剪切泵剪切均匀， 经过砂磨 机 二级砂磨后， 经过激光粒度分布仪百特BT ‑9300H粒径检测， DV90不大于5um为合格， 检测合说　明　书 1/9 页 3 CN 115152794 A 3