(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210901172.0 (22)申请日 2022.07.28 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.24516 202 2.03.11 (71)申请人 西北农林科技大 学 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区 邰 城路3号 (72)发明人 秦宝福　曹让　冯时蓉　任鹏　 王萍　 (74)专利代理 机构 西安鼎迈知识产权代理事务 所(普通合伙) 6126 3 专利代理师 刘喜保 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/22(2020.01)A01P 3/00(2006.01) A01G 13/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种贝莱斯芽孢杆菌及其发酵 方法与应用 (57)摘要 本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌JKsb3， 保藏编号为CGMCCNo.24516， 通过16SrDNA序列分 析结合形态学特征予以分类鉴定。 本发明还进一 步提供了所述贝莱斯芽孢杆菌JKsb3的分离方法 及发酵方法。 所述贝莱斯芽孢杆菌JKsb3及其发 酵产物对葡萄霜霉病、 灰霉病、 甜瓜白粉病表现 出良好的防治效果， 可制备成用于农业病害防治 的生物菌剂。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 115109731 A 2022.09.27 CN 115109731 A 1.一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  vezelensis)JKsb3， 其特征在于， 所述贝莱斯芽孢 杆菌在中国微 生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心的保藏编号 为CGMCC No.24516。 2.根据权利 要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌， 其特征在于， 所述贝莱斯芽孢杆菌16S  rDNA 片段PCR扩增所使用的引物为： 27F(5'‑AGAGTTTGATCCTGGCTCAG‑3')； 1492R(5'‑GGTTACCTTGTTACGACTT‑3')。 3.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌的发酵方法， 其特征在于， 活化所述贝莱斯芽孢杆 菌； 配制所述贝莱斯芽孢杆菌体悬浮液， 菌体悬浮液浓度控制在106个/mL数量级； 接种发 酵， 将菌体悬浮液以5％体积比例的接种量接入发酵培 养基中。 4.根据权利要求3所述的发酵方法， 其特征在于， 活化所述贝莱斯芽孢杆菌的培养基选 用PDA培养基， 活化条件为3 3℃、 培养1‑2d。 5.根据权利要求3所述的发酵方法， 其特征在于， 所述发酵培养基组成为： 可溶性淀粉 30.0g， 豆柏粉10.0g， 酵母膏10.0g， NaCl  2.5g， K2HPO45.0g， Mg2SO41.5g， CaCl21.0g， 蒸馏水 1000mL。 6.根据权利要求3所述的发酵方法， 其特征在于， 发酵所述贝莱斯芽孢杆菌的条件为33 ℃、 180rpm震荡培 养5d。 7.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌的分离方法， 其特征在于， 表面灭菌的锦葵茎段接种 于PDA培养基， 28℃恒温培 养3‑5d， 划线纯化得到单菌落。 8.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌在 农业病害防治中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述贝莱斯芽孢杆菌用于防治葡萄霜霉 病、 葡萄灰霉病 、 甜瓜白粉病。 10.一种农用组合物， 其特征在于， 所述农用组合物含有所述贝莱斯芽孢杆菌， 或含有 所述贝莱斯芽孢杆菌的发酵产物， 或含有所述贝莱斯芽孢杆菌及其发酵产物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109731 A 2一种贝莱斯芽孢杆菌及其发酵 方法与应用 技术领域 [0001]本发明属于生物工程技术领域， 涉及微生物发酵及其应用， 具体涉及一种贝莱斯 芽孢杆菌 菌株的分离、 发酵 方法以及其在 农业病害防治方面的应用。 背景技术 [0002]随着农业经济的发展， 农药日益成为农业生产中不可缺少的生产资料， 一方面， 农 药在粮食等作物的稳产、 高产和产品质量等方面起着极其重要的作用， 另一方面， 农药的使 用关系到农产品的安全问题， 特别是农药残留的问题。 随着人们环保意识的提高， 以及人类 可持续发展的不断深化， 积极开发、 推广应用生物农药成为全球共识。 [0003]葡萄灰霉病由灰葡萄孢菌侵染引起， 是葡萄生产及储运过程中的严重病害。 该病 害主要危害花序果 实， 有时也危害叶片和新梢。 果穗 染病初呈淡褐色水浸状， 很快变成暗褐 色， 整个果穗软腐， 此期若遇阴雨， 2 ‑3d后果穗长出一层淡灰色霉层。 成熟期染病， 初期果面 出现灰褐色斑点， 继而出现褐色凹陷斑， 很快腐烂， 其上长出鼠灰色霉层。 贮藏期如受病菌 侵染， 病斑部会溢出黄褐色粘液， 浆 果变色、 腐烂 。 [0004]葡萄霜霉病是一种高温高湿型病害， 主要危害葡萄叶片， 发病初期在叶面形成浅 黄色近圆形至多角形病斑， 容易并发角斑病， 空气潮湿时叶背产生霜状霉层， 有时可蔓延 到 叶面， 后期病斑枯死 连片， 呈黄褐色， 严重时全部 外叶枯黄死 亡。 [0005]白粉病俗称 “白毛病”、“粉霉病”， 是瓜类作物普遍发生的病害之一。 白粉病 在全国 各地瓜类种植区保护地、 露地均可发生， 且多发生在结瓜期及成熟期 。 随着甜瓜栽培面积的 逐年增加， 白粉病已逐渐成为我国甜瓜主要病害之一。 甜瓜白粉病发生初期主要危害叶片， 若未及时防治， 会迅速扩展， 后期蔓延至叶柄、 茎蔓甚至果实上， 最终导致叶片增厚老化而 植株早衰， 果实膨大受抑制而产量降低， 严重影响果实品质而失去市场价 值。 [0006]当前， 我国农林业对于葡萄霜霉病等病虫害防治的主要方式是化学防治， 但是长 期使用性质相对稳定的化学药剂， 不仅会增强害虫、 病原菌的抗药性， 降低其防治效果， 并 且还可能会污染农产品、 土壤和水资源， 进而危害人、 牲畜 的健康和安全， 同时也大大破坏 了人类赖以生存的生态环境。 因此， 开发及应用高效、 安全、 不易产生抗药性的药剂来防治 植物病虫害， 已成为农药及其制剂开发技 术领域的研究热点。 发明内容 [0007]为了解决现有技术中所存在的问题， 本 发明旨在提供一种安全、 无污 染， 不仅能防 治植物的病害， 而且对生态环境十分友好的生物菌剂， 具体为一种贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus  velezensi)， 经鉴定， 该菌归属芽孢杆菌属， 所述贝莱斯芽孢杆菌(以下简称 JKsb3)是本专利申请发明人于2 020年7月在陕西省秦岭野生锦葵(Malva  Sinensis Cavan) 中分离获得的。 其保藏信息如下。 [0008]菌株名称： JKsb3； [0009]保藏单位： 中国微 生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心；说　明　书 1/6 页 3 CN 115109731 A 3