(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221091216 6.5 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 天津鸿宇泰生物科技有限公司 地址 300451 天津市滨 海新区天津空港经 济区经二路225号中国民航科技产业 化基地一号厂房C区四层1-6跨西侧厂 房 (72)发明人 伍波　董晓宁　沈晨光　蒋宇珊　 尹美移　吴智广　李超辉　 (51)Int.Cl. C07K 14/35(2006.01) C12N 15/70(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种诱导培养基及利用该诱导培养基对 MPT64蛋白进行诱 导表达的方法 (57)摘要 本申请涉及蛋白表达的技术领域， 具体公开 了一种诱导培养基及利用该诱导培养基对MP T64 蛋白进行诱导表达的方法。 本申请提供的诱导培 养基包括以下浓度的组分： 胰蛋白胨35 ‑45mg/ mL； 酵母提取物18 ‑24mg/mL； 氯化钠32 ‑47mg/mL； 甘油25‑35mg/mL； 诱导剂0.4 ‑0.8mg/mL； 琥珀 酸 二辛酯磺酸酯钠 2‑8mg/mL； 所述诱导剂选自鼠李 糖、 阿拉伯糖、 乳糖中的一种或多种。 同时， 本申 请还提供了利用上述诱导培养基对MP T64蛋白在 宿主细胞中进行诱导表达的方法， 该方法能够有 效提高MPT64重组蛋白的产量。 权利要求书1页 说明书10页 CN 115197306 A 2022.10.18 CN 115197306 A 1.一种诱导培养基， 其特征在于， 包括以下浓度的组分： 胰蛋白胨35 ‑45mg/mL； 酵母提 取物18‑24mg/mL； 氯化钠32 ‑47mg/mL； 甘油25 ‑35mg/mL； 诱导剂0.4 ‑0.8mg/mL； 琥珀酸二辛 酯磺酸酯钠2 ‑8mg/mL； 所述 诱导剂选自鼠李糖、 阿拉伯糖、 乳糖中的一种或多种。 2.根据权利要求1所述的诱导培养基， 其特征在于， 所述诱导剂为鼠李糖和阿拉伯 糖； 所述鼠李糖和所述阿拉伯糖的浓度比为5： （0.8 ‑1.3） 。 3.如权利要求1 ‑2中任一项所述的诱 导培养基在蛋白诱 导表达领域的应用。 4.一种MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 利用权利要求1 ‑2中任 一项所述的诱 导培养基对所述MPT64蛋白进行诱 导表达。 5.根据权利要求4所述的MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 具体 包括以下步骤： S1： 根据所述MPT64蛋白的基因序列， 设计引物， 并以所述MPT64蛋白的基因组DNA为模 板， 进行PCR扩增反应， 得到所述MPT64蛋白的扩增片段； S2： 将所述MPT64蛋白的扩增片段插 入到表达载体中， 得到 重组质粒； S3： 将所述重组质粒转 化至宿主细胞中， 筛 选获得工程菌； S4： 挑取所述工程菌的单菌落， 接种于含抗生素的液体培养基中， 培养之后， 按接种比 例接种到所述诱导培养基中， 进 行诱导表达， 然后离心收集菌体、 并纯化， 获得MPT64重组蛋 白。 6.根据权利要求4所述的MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 所述 宿主细胞为大肠杆菌 。 7.根据权利要求5所述的MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 所述 接种时的光密度OD6 00值为0.4‑0.8。 8.根据权利要求5所述的MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 所述 含抗生素的液体培 养基中所述 抗生素的浓度为20 ‑30 μg/mL。 9.根据权利要求5所述的MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 所述 诱导温度20 ‑40℃。 10.根据权利要求5所述的MPT64蛋白在宿主细胞中的诱导表达方法， 其特征在于， 所述 诱导时间为 4‑6h。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115197306 A 2一种诱导培养基 及利用该 诱导培养基对MPT64蛋白进行诱导 表达的方 法 技术领域 [0001]本申请涉及蛋白表达的技术领域， 具体涉及一种诱导培养基及利用该诱导培养基 对MPT64蛋白进行诱 导表达的方法。 背景技术 [0002]结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的慢性传染性疾病， 它是一种由单一致病菌 引起死亡最多的疾病。 结核病严重威胁了人类健康， 是我国重点控制的重大传染性疾病之 一， 也是全球关注的卫生问题和社会问题。 由于缺乏足够的检测工具， 再加上结核病的严重 程度， 使得对结核菌的快速诊断至关重要。 [0003]目前， 研究人员一直在关注开发一种新的使用抗体的诊断方法， 从而可以快速和 准确地诊断感染的病原体， 如免疫层析检测方法。 但是， 抗体由于其对所需抗原的特异 性和 亲和力， 因此， 该检测方法需要寻找理想的抗原作为此项研究的基础。 [0004]MPT64是结核分枝杆菌(MTB)的主要分泌蛋白之一， 分子量约为24kDa， 它是一种特 异性蛋白， 可区分结核分枝杆菌复合物与结核分枝杆菌以外的分枝杆菌， 以上两组分枝杆 菌都能够表现出肺部感染的体征和症状。 因此， 制备高表达的MPT64重组蛋白， 并利用其抗 原特异性， 有利于快速诊断结核病。 发明内容 [0005]为了提供一种MPT64蛋白的诱导表达方法， 同时能够有效提高MPT64重组蛋白的产 量， 本申请提供一种诱 导培养基及利用该诱 导培养基对MPT64蛋白进行诱 导表达的方法。 [0006]第一方面， 本申请提供一种诱 导培养基， 采用如下的技 术方案： 一种诱导培养基， 包括以下浓度的组分： 胰蛋白胨35 ‑45mg/mL； 酵母提取物18 ‑ 24mg/mL； 氯化钠32 ‑47mg/mL； 甘油2 5‑35mg/mL； 诱导剂0.4 ‑0.8mg/mL； 琥珀酸二辛酯磺酸酯 钠2‑8mg/mL； 所述 诱导剂选自鼠李糖、 阿拉伯糖、 乳糖中的一种或多种。 [0007]本申请利用上述提供的诱导培养基用于MPT64蛋白的诱导表达方法中， 能够有效 提高MPT64重组蛋白的产量。 MPT64蛋白的诱导表达方法中宿主细胞为大肠杆菌， 大肠杆菌 培养过程中最常使用的碳源物质为葡萄糖， 但是培养基中葡萄糖在代谢过程中会产生乙酸 和其他短链酸类副产物， 这些副产物会降低RNA、 DNA、 蛋白质以及酯类的合成速率， 从而使 得宿主细胞的生长密度以及重组蛋白的产量降低。 因此， 本申请在诱导培养基中使用酵母 提取物作为碳源， 避免了乙酸的形成和蛋白的降解， 从而可以增加细菌的生长密度， 有利于 提高重组蛋白的产量。 [0008]琥珀酸二辛酯磺酸酯钠是一种阴离子型表面活性剂， 常用作香波、 清洁剂及牙膏 等的乳化剂和洗涤剂， 无毒性。 本申请发现将琥珀 酸二辛酯磺酸酯钠作为诱导培养基的组 分， 能够进一 步提高重组蛋白的产量。 [0009]相比于传统的诱导剂IPT G， 本申请使用较为廉价的鼠李糖、 阿拉伯糖、 乳糖作为诱说　明　书 1/10 页 3 CN 115197306 A 3