(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210939819.9 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 天康制药 （苏州） 有限公司 地址 215000 江苏省苏州市中国 （江苏） 自 由贸易试验区苏州片区苏州工业园区 现代大道88号6层6-013工位 （集群登 记） (72)发明人 贺笋　何海　候风　王钢　张飞　 王雨朦　 (74)专利代理 机构 北京聿宏知识产权代理有限 公司 11372 专利代理师 吴大建　邓树山 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12R 1/45(2006.01) (54)发明名称 一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基及其 发酵方法和应用 (57)摘要 本发明涉及一种表皮葡萄球菌高密度发酵 培养基， 包括以下组分： 胰蛋白胨， 大豆蛋白胨， 氯化钠， 酵母浸粉， 葡萄糖， 甘油和磷酸缓冲液。 还涉及一种表皮葡萄球菌的高密度发酵方法和 应用。 权利要求书2页 说明书9页 附图1页 CN 115261274 A 2022.11.01 CN 115261274 A 1.一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基， 其特征在于， 包括以下组分： 胰蛋白胨， 大豆 蛋白胨， 氯化钠， 酵母 浸粉， 葡萄糖， 甘油和磷酸缓冲液。 2.根据权利 要求1所述的培养基， 其特征在于， 所述胰蛋白胨的浓度为8 ‑20g/L， 优选为 15g/L； 所述大豆蛋白胨的浓度为3 ‑7g/L， 优选为5g/L； 所述氯化钠的浓度为4 ‑6g/L， 优选为 5g/L； 所述酵母浸粉的浓度为6 ‑10g/L， 优选为8g/L； 所述葡萄糖的浓度为3 ‑7g/L， 优选为 5g/L； 所述磷酸缓冲液的终浓度为60 ‑140mmol/L， 优选为100mmol/L； 所述甘油的用量为 160‑240ml/L， 优选为20 0ml/L。 3.一种表皮葡萄球菌的高密度发酵方法， 其特征在于， 包括： 将表皮葡萄球菌种液通过 间歇递增转速和压缩空气进气量进行发酵培 养。 4.根据权利要求3所述的发酵方法， 其特征在于， 所述方法具体包括： 将表皮葡萄球菌 种液随诱导剂同时接入表皮葡萄球菌高密度发酵培养基中， 间歇递增转速和压缩空气进气 量， 停止压缩空气进气后通入氧气， 培 养至发酵液不再消耗氨水或pH上升时终止发酵； 优选地， 所述转速的提升频率为每隔20min提升转速35 ‑65r， 优选为每隔20min提升转 速40‑60r， 更优选为每隔20min提升转速50r； 和/或， 所述压缩空气进气量的提升频率为每 隔20min提升进气量0.35 ‑0.65VVM， 优选为每隔20min提升进气量0.4 ‑0.6VVM， 更优选为每 隔20min提升进气量0.5V VM。 5.根据权利要求3或4所述的发酵 方法， 其特 征在于， 所述 诱导剂包括盐酸脱水四环素； 优选地， 所述诱导剂的终浓度为300 ‑800ng/mL， 优选为400 ‑600ng/mL， 更优选为500ng/ mL。 6.根据权利要求3 ‑5中任意一项所述的发酵方法， 其特征在于， 所述表皮葡萄球菌高密 度发酵培养基中随表皮葡萄球菌种 液和诱导剂同时加入抗生素； 优选地， 所述抗生素包括 红霉素； 优选地， 所述 抗生素的终浓度为2 ‑10 μg/mL， 优选为3 ‑7 μg/mL， 更优选为5 μg/mL。 7.根据权利要求3 ‑6中任意一项所述的发酵方法， 其特征在于， 所述表皮葡萄球菌的高 密度发酵方法采用如权利要求1或2所述的表皮葡萄球菌高密度发酵培养基发酵培养表皮 葡萄球菌 。 8.根据权利要求3 ‑7中任意一项所述的发酵 方法， 其特 征在于， 包括以下 具体步骤： S1： 将表皮葡萄球菌菌种接种于基础发酵培养基中进行发酵培养， 得到表皮葡萄球菌 种液； S2： 将表皮葡萄球菌种液随诱导剂和抗生素同时接入表皮葡萄球菌高密度发酵培养基 中进行发酵培养； 培养6 ‑8h后流加葡萄糖； 培养12 ‑14h后， 间歇递增转速和压缩空气进气 量， 待转速提升至1000r/min， 压缩空气进气量提升至6VVM时停止压缩空气进气， 再通入氧 气， 培养至发酵液不再消耗氨水或发酵 液的pH上升时终止发酵； 优选地， 所述葡萄糖的流加速率为0.5 ‑2g/L/h， 优选为0.8 ‑1.5g/L/h， 更优选为1g/L/ h； 和/或， 所述步骤S2中发酵培养的温度为36 ‑38℃； 发酵培养的pH值为6.8 ‑7.8， 优选为 7.0‑7.6， 更优选为7.4。 9.根据权利要求8所述的发酵方法， 其特征在于， 所述步骤S2中发酵培养的初始转速为 300‑400r/min； 初始压缩空气进气量为2VVM； 优选地， 所述步骤S2中转速提升至600r/min权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115261274 A 2后， 再在间歇递增转速的同时间歇递增压缩空气进气量； 和/或， 所述步骤S2中氧气进气量为1 ‑4VVM， 优选为2VVM， 且随DO值 的30％进行自动控 制保持。 10.一种如权利要求1或2所述的培养基或如权利要求3 ‑9任意一项所述的发酵方法在 表皮葡萄球菌的高密度发酵中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115261274 A 3