(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210609665.7 (22)申请日 2022.05.31 (71)申请人 黄凯奇 地址 256600 山东省滨州市黄河十二路919 号 (72)发明人 黄凯奇　于斐　韩亚文　曹菲　 高云雷　秦利国　郭翠芹　赵春海　 (74)专利代理 机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 专利代理师 井奉军 (51)Int.Cl. C12N 9/90(2006.01) C12P 19/12(2006.01) C12P 19/24(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12R 1/18(2006.01) (54)发明名称 一种蔗糖异构酶发酵生产异麦芽酮糖的方 法 (57)摘要 本发明属于蔗糖异构酶发酵方法技术领域， 具体涉及一种蔗糖异构酶发酵生产异麦芽酮糖 的方法。 该方法包括以下步骤:(1)将菌种经分离 培养基分离、 YPD液体培养基富集、 产酶筛选培基 筛选、 产酶发酵培养基发酵后， 制得蔗糖异构酶； (2)将步骤(1)制得的蔗糖异构酶加入到蔗糖溶 液中， 同时加入酵母膏以及生长因子， 反应得到 转化液； (3)将步骤(2)制得的转化液经浓缩、 离 心分离制得异麦芽酮糖。 本发明通过对分离获得 的蔗糖异构酶菌株发酵条件进行优化， 提高了蔗 糖异构酶的酶活力， 对蔗糖水解生产异麦芽酮糖 起到了促进作用。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115029338 A 2022.09.09 CN 115029338 A 1.一种蔗糖异构酶发酵生产异麦 芽酮糖的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将菌种经分离培养基分离、 YPD液体培养基富集、 产酶筛选培基筛选、 产酶发酵培养 基发酵后， 固液分离， 去固体后制得蔗糖异构酶； (2)将步骤(1)制得的蔗糖异构酶加入到质量分数为2.0％ ‑4％蔗糖溶液中， 同时加入 质量分数为1.0％ ‑5％酵母膏以及0.2g/L ‑0.5g/L生长因子， 在温度20～45℃下反应0.1～1 小时得到转 化液； (3)将步骤(2)制得的转 化液经浓缩、 离心分离制得异麦 芽酮糖。 2.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于， 所述步 骤(1)中菌种为大黄欧文氏菌， 来源于中国林业微生物保藏管理中心， 菌种编号CFCC   10808。 3.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于： 所述步 骤(1)中的菌种分离培养基组分为： 葡萄糖15 g/L‑30g/L， 蛋白胨20 g/L‑30g/L， 酵母粉10g/ L‑15g/L， 氯霉素0.1g/L ‑0.3g/L， 琼脂10g/L ‑20g/L， pH为中性， 反应条件为在100℃ ‑115℃ 下反应10mi n‑30min。 4.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于： 所述步 骤(1)中YPD液体培养基组分为： 葡萄糖20g/L ‑30g/L， 蛋白胨10g/L ‑20g/L， 酵母粉10g/L ‑ 15g/L， 反应条件为在1 15℃120℃下反应20mi n‑30min。 5.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于： 所述步 骤(1)中产酶筛选培养基组分为： 单宁20g/L ‑30g/L， 硝酸铵5g/L ‑10g/L， 琼脂2 0g/L‑30g/L， 溴酚蓝0.002g/L‑0.003g/L， 反应条件为在10 0‑120℃下反应20mi n‑30min。 6.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于： 所述步 骤(1)中产酶发酵培养基组分为： 单宁酸10 g/L‑15g/L， 硝 酸铵10g/L ‑20g/L， 葡萄糖10 g/L‑ 20g/L， pH为3.0 ‑5.0， 反应条件为在10 0℃‑120℃下反应10mi n‑30min。 7.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于： 所述生 长因子为氨基酸、 嘌呤、 嘧啶、 维生素中的一种或者多种。 8.根据权利要求1所述的蔗糖异构 酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 其特征在于： 所述步 骤(2)蔗糖异构酶加入量按质量体积百分比为2％～5％， 单位g/ml。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115029338 A 2一种蔗糖异构酶发酵生产异麦芽酮糖的方 法 技术领域 [0001]本发明属于蔗糖异构酶发酵方法技术领域， 具体涉及一种蔗糖异构酶发酵生产异 麦芽酮糖的方法。 背景技术 [0002]异麦芽酮糖作为一种功能性糖， 作为食品添加剂广泛应用到糕点、 巧克力、 饮料中 等食品中， 蔗糖异构酶是体外水解蔗糖生产异麦 芽酮糖的高度特异性酶。 [0003]目前蔗糖异构酶生产的异麦 芽酮糖工艺普遍存在酶活低的问题。 发明内容 [0004]针对现有技术的上述不足， 本发明提供一种蔗糖异构酶发酵生产异麦芽酮糖的方 法。 本发明通过对分离获得的蔗糖异构酶菌株发酵条件进行优化， 提高了蔗糖异构酶的酶 活力， 对蔗糖水解 生产异麦 芽酮糖起到 了促进作用。 [0005]为实现上述作用， 本发明提供一种蔗糖异构酶发酵生产异麦芽酮糖的方法， 包括 以下步骤： [0006](1)将菌种经分离培养基分离、 YPD液体培养基富集、 产酶筛选培基筛选、 产酶发酵 培养基发酵后， 固液分离， 去固体后制得蔗糖异构酶； [0007](2)将步骤(1)制得的蔗糖异构酶加入到质量分数为2.0％ ‑4％蔗糖溶液中， 同时 加入质量分数为1.0％ ‑5％酵母膏以及0.2g/L ‑0.5g/L生长因子， 在温度20～45℃下反应 0.1～1小时得到转 化液； [0008](3)将步骤(2)制得的转 化液经浓缩、 离心分离制得异麦 芽酮糖。 [0009]本方案的进一步改进， 步骤(1)中菌种为大黄欧文氏菌， 来源于中国林业微生物保 藏管理中心， 菌种编号CFC C 10808。 [0010]本方案的进一步改进， 步骤(1)中的菌种分离培养基组分为： 葡萄糖 15g/L‑30g/L， 蛋白胨20g/L ‑30g/L， 酵母粉10g/L ‑15g/L， 氯霉素0.1g/L ‑0.3g/L， 琼脂10g/L ‑20g/L， 可加 入适量海水， pH为中性， 反应条件为在10 0℃‑115℃下反应10mi n‑30min。 [0011]本方案的进一步改进， 步骤(1)中YPD液体培养基组分为： 葡萄糖20g/L ‑30g/L， 蛋 白胨10g/L ‑20g/L， 酵母 粉10g/L‑15g/L， 反应条件为在1 15℃120℃下反应20mi n‑30min。 [0012]本方案的进一步改进， 步骤(1)中产酶筛选培养基组分为： 单宁20g/L ‑30g/L， 硝酸 铵5g/L‑10g/L， 琼脂20g/L ‑30g/L， 溴酚蓝0.002g/L ‑0.003g/L， 反应条件为在100 ‑120℃下 反应20mi n‑30min。 [0013]本方案的进一步改进， 步骤(1)中产酶发酵培养基组分为： 单宁酸10g/L ‑15g/L， 硝 酸铵10g/L ‑20g/L， 葡萄糖10g/L ‑20g/L， pH为3.0 ‑5.0， 反应条件为在100℃ ‑120℃下反应 10min‑30min。 [0014]本方案的进一 步改进， 生长因子为氨基酸、 嘌呤、 嘧啶、 维生素中的一种或者多种。 [0015]本方案的进一步改进， 步骤(2)蔗糖异构酶加入量按质量体积百分比为2％～5％，说　明　书 1/4 页 3 CN 115029338 A 3