(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221081969 2.7 (22)申请日 2022.07.13 (71)申请人 天津农学院 地址 300392 天津市西青区津静公路 (72)发明人 张爱琳　祝培豪　何玉香　朱兆清　 樊秀花　苗颖　 (74)专利代理 机构 北京中创博腾知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11636 专利代理师 李梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/04(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育 方法 (57)摘要 本发明公开了一种能够有效降解PBST地膜 的菌株的选育方法， 该方法包括以下步骤： 配制 PBST筛选培养基和无机盐培养基； 膜片预处理： 将PBAT地膜剪成膜片， 然后依次浸泡于SDS和乙 醇中； PBST降解菌的分离纯化： 将土壤加入生理 盐水中 ， 制成土壤悬液 ， 取土壤悬液接于 30mlPBST筛选培养基中， 逐日观察， 待培养基出 现浑浊， 通过涂布稀释平板法在PBS T筛选培养基 分离纯化； PBS T地膜降解菌的鉴定： 16SrDNA序列 在RDP数据库上比对， 从中选择匹配度为95％以 上的细菌菌株。 本发明通过PBS T筛选培养基和无 机盐培养基相对照培养微生物菌群， 并进行降解 菌鉴定处， 从而能够准确筛选处降解PBST 地膜的 菌株。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115109826 A 2022.09.27 CN 115109826 A 1.一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选 育方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤一： 配制PBST筛 选培养基和无机盐培 养基； 步骤二： PBST地膜降解菌的筛 选 (1)膜片预处理： 将PBAT地膜剪成膜片， 然后依次浸泡于2％SDS、 75％乙醇和95％乙醇 中， 浸泡完毕后用无菌水冲洗直至冲洗 干净， 置于紫外灭菌灯下灭菌15mi n； (2)PBST降解菌的分离纯化： 将土壤加入生理盐水中， 制成浓度为10‑4土壤悬液， 取2ml 土壤悬液接于30mlPBST筛选培养基中置于28℃， 逐日观 察， 待培养基出现浑浊， 通过涂布稀 释平板法在PBST筛选培养基分离纯化； 同时将2ml制备的土壤稀释液接种到30mL的无机盐 培养基中作为对照品； 步骤三： PBST地膜降解菌的鉴定： 测定16SrRNA并且16SrDNA序列在RDP数据库上比对， 从中选择匹配度为95％以上的细菌 菌株。 2.根据权利要求1所述的能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法， 其特征在于， 所述 PBST筛选培养基包括以下组分： PBST、 K2HPO4·3H2O、 KH2PO4、 MgSO4·7H2O、 NH4NO3、 NaCl、 FeSO4·7H2O、 ZnSO4·7H2O和MnSO4·H2O； 其中， PBS T筛选培养基的PH值为7.2， 并在培养基中 添加琼脂粉。 3.根据权利要求1所述的能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法， 其特征在于， 所述 无机盐培养基包括以下组分： K2HPO4·3H2O、 KH2PO4、 MgSO4·7H2O、 NH4NO3、 NaCl、 FeSO4·7H2O、 ZnSO4·7H2O和MnSO4·H2O， 其中， 无机盐培 养基的PH值 为7.2， 并在培 养基中添加琼脂粉。 4.根据权利要求1所述的能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法， 其特征在于， 所述 膜片的尺寸 为2cm×1.5cm。 5.根据权利要求1所述的能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法， 其特征在于， 所述 膜片预处理中PBAT地膜在浸泡期间分别用数控超声波清洗仪和旋涡混匀仪振荡清洗 10min。 6.根据权利要求1所述的能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法， 其特征在于， 所述 对照品于温度28摄氏度以及转速15 0r/min的搅拌下培 养。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109826 A 2一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方 法 技术领域 [0001]本发明涉及菌株选育领域， 具体是一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方 法。 背景技术 [0002]地膜技术从最初的蔬菜种植， 目前已经推广到棉花、 玉米、 甜菜、 甘蔗、 番茄、 番薯、 甜瓜等20余种 作物。 然而， 地膜的广泛使用也带来了新的问题。 目前传统农用塑料地膜材料 主要是聚乙烯(P E)， 在自然环境条件 下难以降解， 加之缺乏有效的治理措施， 废旧地膜在农 田土壤中逐年增多， 污染持续加剧。 据统计， 我国农田每年会新增20 ‑30万吨不能降解的残 留地膜， 使土壤环境恶化， 土壤含水量下降， 板结且肥力下降， 最 终导致农作 物减产。 更有甚 者， 长久以来积聚的碎裂在土壤里的地膜碎片， 完全处于失控状态， 最 终将渗入地下水系统 或者悬浮在大气尘埃中， 而给人类带来持久毁灭性的灾害。 因此， 开 发可替代的全生物降解 地膜材料， 是迫在眉睫的事情。 [0003]PBST主要通过千吨以上聚酯装置聚合制备， 采用1， 4 ‑丁二酸、 对苯二甲酸、 1， 4 ‑丁 二醇为单体原料， 稀土化合物作为催化剂， 采用3釜或5釜流程， 通过 “双酯化、 预缩聚、 终塑 聚”工艺， 完成聚合。 聚合产物在经过必要的增粘处理， 进行吹膜， 就可以得到生物降解地 膜。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法， 以解决背 景技术中的问题。 [0005]为实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0006]一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选 育方法， 包括以下步骤： [0007]步骤一： 配制PBST筛 选培养基和无机盐培 养基； [0008]步骤二： PBST地膜降解菌的筛 选 [0009](1)膜片预处理： 将PBAT地膜剪成膜片， 然后依次浸泡于2％SDS、 75％乙醇和95％ 乙醇中， 浸泡完毕后用无菌水冲洗直至冲洗 干净， 置于紫外灭菌灯下灭菌15mi n； [0010](2)PBST降解菌的分离 纯化： 将土壤加入 生理盐水中， 制成浓度为10‑4土壤悬液， 取 2ml土壤悬液接于30mlPBST筛选培养基中置于28℃， 逐日观察， 待培养基出现浑浊， 通过涂 布稀释平板法在PBST筛选培养基分离纯化； 同时将2ml制备的土壤稀释液接种到30mL的无 机盐培养基中作为对照品； [0011]步骤三： PBST地膜降解菌的鉴定： 测定16SrRNA并且16SrDNA序列在RDP数据库上比 对， 从中选择匹配度为95％以上的细菌 菌株。 [0012]在上述技术方案的基础上， 本发明还提供以下 可选技术方案： [0013]在一种可选方案中： 所述PBST筛选培养基包括以下组分： PBST、 K2HPO4·3H2O、 KH2PO4、 MgSO4·7H2O、 NH4NO3、 NaCl、 FeSO4·7H2O、 ZnSO4·7H2O和MnSO4·H2O； 其中， PBST筛选说　明　书 1/5 页 3 CN 115109826 A 3