(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210852621.7 (22)申请日 2022.07.20 (71)申请人 威海迪普 森生物科技有限公司 地址 264300 山东省威海市荣成市石岛牧 云西路 (72)发明人 牟海津　任昕淼　付晓丹　肖梦诗　 朱琳　 (74)专利代理 机构 南京求真专利代理事务所 (普通合伙) 32600 专利代理师 刘骐鸣 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 7/56(2006.01) C12P 7/40(2006.01) C12P 7/52(2006.01)C12P 7/54(2006.01) C12N 1/04(2006.01) A61K 31/702(2006.01) A61K 35/744(2015.01) A61P 1/00(2006.01) A23L 33/21(2016.01) C08B 37/00(2006.01) C12R 1/25(2006.01) C12R 1/245(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元 的制备方法 (57)摘要 本发明提供一种胞外多糖来源岩藻寡糖发 酵型合生元的制备方法， 还有合生元用乳酸菌的 筛选方法， 涉及生物发酵领域。 通过酸解岩藻胞 外多糖获得岩藻寡糖粗提液， 再利用乳酸菌选择 性发酵岩藻寡糖粗提液中不良的可消化性单糖， 获得含有益生菌乳酸菌和岩藻寡糖益生元的互 补型合生元产品。 寡糖粗提液中残 余高热值的可 消化性单糖， 不利于其作为益生元发挥作用， 但 这些单糖可以作为生产益生菌的原料。 乳酸菌通 过消耗岩藻寡糖粗提液中的可消化性单糖生长 增殖， 同时纯化岩藻寡糖粗提液， 获得仅含岩藻 糖和岩藻寡糖的优质寡糖益生元， 实现了酸解副 产物单糖的高值化利用。 发酵过程中产生有益代 谢产物短链脂肪酸， 提高了合生元产品的附加 值。 权利要求书1页 说明书11页 附图4页 CN 115058369 A 2022.09.16 CN 115058369 A 1.一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵 型合生元的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 第一步， 酸解岩 藻胞外多糖， 其中， 通过薄层色谱 （TLC） 对酸解产物进行半定量分析， 选 取酸解的最佳 条件； 第二步， 将第一步中获得的酸解液通过电渗析脱酸， 使得酸解液的pH大于3， 再加入缓 冲盐调pH中性， 制得岩藻寡糖粗 提液； 第三步， 向第二步中获得岩藻寡糖粗提液中接种活化后的乳酸菌， 岩藻寡糖粗提物中 的可消化性单糖被乳酸菌发酵并代谢脱除， 得到含有岩藻寡糖益生元和乳酸菌益生菌的发 酵液， 再向发酵液中加入灭菌后脱脂乳粉和甘油作为冻干保护剂， 真空冷冻干燥后得到固 体合生元制剂。 2.根据权利要求1所述的一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方法， 其特 征在于， 第一步中先对岩藻胞外多糖进行单糖组成测定， 岩藻胞外多糖包括岩藻糖、 葡萄 糖， 半乳糖组成的胞外多糖， 岩藻糖含量大于 30%。 3.根据权利要求2所述的一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方法， 其特 征在于， 电渗析脱酸包括如下过程， 岩藻胞外多糖溶液的电导值低于100 ‑500 mS/cm时停止 电渗析操作， 岩藻寡糖粗 提液终pH为3.0 ‑4.0。 4.根据权利要求3所述的一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方法， 其特 征在于， 乳酸菌发酵过程如下， 乳酸菌使用MRS培养基于35 ‑37 ℃活化6‑24 h后， 4‑10 ℃离 心1‑10 min获得菌体沉淀， 按照0.1 ‑1%的质量比向岩藻寡糖粗提液中接种活化后的乳酸 菌， 发酵条件为： 发酵温度3 5‑37 ℃， 转速10 0‑300 rpm， 发酵时间6 ‑36 h。 5.根据权利要求4所述的一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方法， 其特 征在于， 乳酸菌包括 植物乳杆菌、 干酪乳杆菌、 戊糖片球菌和乳酸乳球菌 。 6.根据权利要求1所述的一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方法， 其特 征在于， 所述岩藻寡糖益生元为充分脱除可消化性单糖的功能性岩藻寡糖， 分子量小于 5000 Da。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058369 A 2一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物发酵领域， 具体为一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制 备方法。 背景技术 [0002]岩藻寡糖具有特殊的益生活性， 是一种新型的寡糖益生元。 除了动植物来源的岩 藻寡糖， 微生物胞外多糖中也含有丰富的岩藻糖， 是岩藻寡糖的新型来源。 近几十年来， 通 过对不同细菌产生的EPS的组成、 结构和功能特性的研究， 人们发现了上百种富含岩藻糖的 细菌胞外多糖， 岩藻糖的含量超过30%以上， 是开发功能性岩藻寡糖益生元的良好原料， 受 到不少研究人员的关注。 细菌胞外多糖是典型的杂多糖， 岩藻糖通常与 葡萄糖、 半乳糖等共 同形成多糖， 与母乳 寡糖的结构相似， 具有优质的商业潜力。 [0003]益生元的制备主要为多糖降解和酶促合成， 由于缺少高效通用的岩藻多糖酸解 酶， 酸解是制备岩藻寡糖益生元最简单有效的方法。 但胞外多糖酸解会产生大量游离的葡 萄糖和半乳糖， 这些可消化性单糖热量高， 吸收快， 会迅速增加 体内血糖指数 （GI） ， 对人体 健康存在潜在不良风险。 益生元中残留过多的可消 化性单糖会增加 益生元的热量， 大幅降 低益生元的品质， 因此， 益 生元中可消化 性单糖的脱除是益 生元制备的重要品控点。 [0004]目前存在多种分离单糖和寡糖的技术， 如有机试剂 沉淀、 纳滤、 层析、 色谱等。 但由 于单糖和寡糖的性质相似， 即使醇沉、 纳滤、 色谱等分离技术已经广泛工业化应用， 但存在 试剂昂贵、 设备复杂和分离效率低的问题， 而且利用物化分离方法会导致岩藻二糖， 岩藻三 糖等小分子益生元 的大量损失。 因此， 开发简单高效， 针对性强的单糖脱除技术， 具有广阔 的应用前 景。 发明内容 [0005]本发明目的在于提供一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型合生元的制备方法， 以解 决目前的多种分离单糖和寡糖的技术， 存在试剂昂贵、 设备复杂和分离效率低的问题， 同时 解决现有方法利用物 化分离方式会导致岩藻二糖， 岩藻三糖等小分子益生元的大量损失的 问题。 [0006]为达成上述目的， 本发明提出如下技术方案： 一种胞外多糖来源岩藻寡糖发酵型 合生元的制备 方法， 包括如下步骤： 第一步， 酸解岩藻胞外多糖， 其中， 通过薄层色谱 （TLC） 对酸解寡糖产物进行半定 量分析， 选取酸 解的最佳 条件； 第二步， 将第一步中获得的酸解液通过电渗析脱酸， 使得酸解液的pH大于3， 再加 入缓冲盐调pH中性， 制得岩藻寡糖粗 提液； 第三步， 向第二步中获得岩藻寡糖粗提液中接种活化后的乳酸菌， 岩藻寡糖粗提 物中的可消化性单糖被乳酸菌发酵并代谢脱除， 得到含有岩藻寡糖益生元和乳酸菌益生菌 的发酵液， 再向发酵液中加入灭菌后脱脂乳粉和甘油作为冻干保护剂， 真空冷冻干燥后得说　明　书 1/11 页 3 CN 115058369 A 3