(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210790286.2 (22)申请日 2022.07.06 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO: M 202 2616 202 2.05.13 (71)申请人 福建生物工程职业 技术学院 地址 350007 福建省福州市仓山区建新 镇 劳光村中店42号 (72)发明人 吴伟斌　谢茹胜　林俊涵　孙丽娟　 陈秉梅　 (74)专利代理 机构 福州科扬专利事务所(普通 合伙) 35001 专利代理师 唐进喜 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 13/00(2006.01)C12P 7/42(2006.01) A23K 10/12(2016.01) A23K 10/16(2016.01) A23K 10/37(2016.01) A23K 20/142(2016.01) A23K 20/163(2016.01) A23K 20/20(2016.01) A23K 20/22(2016.01) C12R 1/245(2006.01) (54)发明名称 一种联产苯乳酸和γ-氨基丁酸的干酪乳杆 菌及其应用 (57)摘要 本发明公开一种联产共轭亚油酸和γ ‑氨基 丁酸的干酪乳杆菌及其应用， 该菌株于2022年5 月13日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏编 号为CCTCCM  2022616； 本发明通过采用常压室温 等离子体诱变技术， 经过筛选得到能够高效联产 苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的干酪乳杆菌MSG308， 将 此干酪乳杆菌MSG308接种至含有谷氨酸的培养 基中发酵72 h， 发酵液中苯乳酸含 量高达15.75g/ L， γ‑氨基丁酸的含 量高达180.45g/L， 大大降低 生产成本； 本发明的干酪乳杆菌MSG308属于食品 安全乳杆菌属， 可广泛应用于生物发酵饲料和饲 料添加剂领域， 具有巨大的应用价值和市场开发 潜力。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115074290 A 2022.09.20 CN 115074290 A 1.一种联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的干酪乳杆菌， 其特征在于： 保藏编号为CCTCC  M  2022616的干酪乳杆菌 MSG308。 2.如权利要求1所述的干酪乳杆菌在联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸中的应用。 3.一种联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的方法， 其特征在于： 采用 如权利要求1所述的干酪 乳杆菌MSG308依次经过活化培养、 种子培养、 发酵罐补料反馈培养高效联产苯乳酸和γ ‑氨 基丁酸。 4.如权利要求3所述的一种联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的方法， 其特征在于： 所述发酵 罐内液体培养基pH为6.0～6.5， 包括如下按质量百分比计的组份： 葡萄糖0.5％， 牛大骨蛋 白胨2％， 酵母粉2％， 七水硫酸镁0.03％， 一水硫酸锰0.01％， 吐温 ‑80 0.2％， 谷氨酸5％， 苯丙氨酸1％， 其 余为水。 5.如权利要求3所述的一种联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的方法， 其特征在于： 所述发酵 罐培养周期划分为两个阶段： (1)在发酵培养起始阶段， 初始葡萄糖的浓度控制在20g/L， 通过流加60％的葡萄糖控 制发酵体系中的残糖(以葡萄糖 计)为0.2 ‑0.5g/L； (2)在发酵罐内OD600达到20后， 通过流加苯丙氨酸和谷氨酸控制发酵体系中的苯丙氨 酸浓度保持在0.01 ‑0.1g/L和谷氨酸的浓度保持在1 ‑5g/L； 其中， 所述发酵 罐培养全过程控制溶解氧在5 ‑10％， pH为6.0 ‑6.5。 6.如权利要求1所述的一种联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的干酪乳杆菌在饲料中的应用。 7.一种饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于： 以权利要求1所述的干酪乳杆菌作为发酵 菌株， 将发酵菌株种子液接种至固态发酵培养基中， 并于固态发酵池中通过固态发酵制备 富含苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的饲料 添加剂。 8.如权利要求7所述的一种饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于： 所述固态发酵培养基 包括如下按质量百分比计的组份： 黄豆饼粉20％， 麸皮10％， 玉米淀粉2.5％， 菜籽粕1％， 谷 氨酸5％， 苯丙氨 酸1％， 酵母提取物0.3％， 硫酸铵0.2％， 氯化钠1％， 其余为水； 所述固态发 酵培养基的pH为6.0～6.5 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074290 A 2一种联产苯乳酸和 γ‑氨基丁酸的干酪乳杆菌及其应用 技术领域 [0001]本发明具体涉及一种联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的干酪乳杆菌及其应用， 属于微 生物技术领域。 背景技术 [0002]近年来， 饲用抗生素滥用导致病原菌耐药性、 药物残留和环境污染等生物安全问 题得到了越来越多的关注， 开发无毒 无公害的新型微生物制剂来代替抗生素已经成为饲料 行业的研究热点。 微生态制剂具有能提高饲料的消化吸收率， 提高动物免疫力， 延长货架期 等功能， 利用益生菌微生物发酵生产的无毒无害、 无抗无残留的绿色饲料添加剂在国内外 饲料工业中应用不断增多。 [0003]乳酸菌是我国农业部公布的可直接饲喂动物且允许使用的饲料级益生菌菌种之 一， 其具备一系列优良的益生特性而广泛地应用于动物发酵饲料领域中， 诸如： 耐酸性、 耐 受胆汁酸、 防治疾病、 增强机体免疫力、 提高生长性能、 无毒副作用、 无耐药性、 无残留、 促进 生长、 增加体重等优点。 [0004]益生菌发酵饲料的研究和开发的关键问题在于优良菌株的分离、 筛选和发酵饲料 的制备工艺。 目前， 生物发酵饲料的应用情况并不理想， 应用效果欠佳， 主要是由以下原因 造成的： 1、 大多数的益生菌为不产芽孢的乳酸菌， 且多属于专性厌氧菌， 极易受到温度、 氧 气、 水分及酸碱等外界环 境因素的影响， 菌活性保持比较困难； 2、 生物发酵饲料由于未进 行 消毒灭菌(若对发酵饲料进 行消毒， 会破坏饲料中的营养成分， 造成其营养流 失)， 存在易变 质、 易霉变、 安全性差等问题， 因此， 需要通过在生物发酵饲料中额外添加防腐剂来解决上 述问题， 生产成本高； 3、 菌种本身的特性 不足， 抑菌能力差、 转 化效率不高及功能成分不足。 [0005]苯乳酸是一种广泛存在自然界中的小分子天然有机酸， 由部分乳酸菌分泌的一种 具有广谱抗菌性的新型抑菌剂， 能抑制食源性致病菌、 腐败菌， 特别能抑制真菌的污染。 研 究表明， 在饲料中添加苯乳酸可以促进动物生长、 调节畜禽免疫功能、 抑制致病菌生长， 起 到维持畜禽健康和提高生产性能的作用。 目前苯乳酸生产方法主要有化学合成和生物合 成。 化学合成存在技术条件复杂、 反应条件严苛、 环境污染比较大等。 生物合成苯乳酸是一 种新方法， 微生物在合成苯乳酸起到防腐效果的同时还能产生其它有机酸成分， 是目前普 遍认可的一种成本低、 效果 好、 使用安全的方法。 [0006]γ‑氨基丁酸是一种 非蛋白质天然氨基酸， 是哺乳动物中枢神经系统内最主要的 抑制性神经递质， 不仅对人类具有镇痛、 抗焦虑、 抗惊厥、 调节激素分泌和营养神经细胞等 作用， 对畜禽也有促进动物采食增重、 提高动物免疫力、 抗应激能力及促进生殖等作用。 近 年来， γ‑氨基丁酸被作为 一种饲料 添加剂在畜禽养殖业和饲料工业中广泛应用。 [0007]目前， 现有技术是在饲料中通过外添加的方式使其富含苯乳酸或者γ ‑氨基丁酸， 而天然或微生物合成的高纯苯乳酸或者γ ‑氨基丁酸成本高， 限制 了其在饲料添加剂 中的 规模化应用， 因此， 开 发高效联产苯乳酸和γ ‑氨基丁酸的乳酸菌应用于饲料发酵领域具有 重要意义说　明　书 1/6 页 3 CN 115074290 A 3