(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211083770.8 (22)申请日 2022.09.06 (71)申请人 福建益昕葆生物制药有限公司 地址 363000 福建省漳州市芗城区兴亭路9 号 申请人 金华傲农生物科技有限公司 　 福建傲农生物科技 集团股份有限公 司 (72)发明人 张志榕　王小芬　郑甜力　田雷　 覃智斌　蔡冬　张敬学　吴有林　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 郭莲梅 (51)Int.Cl. C12N 1/36(2006.01)C12N 1/20(2006.01) B01D 1/18(2006.01) B01J 13/04(2006.01) C12R 1/25(2006.01) (54)发明名称 一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法及植物 乳杆菌粉剂的制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种耐高温植物乳杆菌的驯 化方法及植物乳杆菌粉剂的制备方法。 本发明通 过对植物乳杆菌进行驯化， 可以促进驯化后的植 物乳杆菌的耐热能力得以提升， 使得喷雾干燥后 的存活率得到明显提升。 同时该方法不影响其菌 量。 本发明提供的驯化方法简单易行， 菌株不易 退化， 适合于大部分工厂进行生产， 对植物乳杆 菌的大规模生产应用具有较大的推动作用。 权利要求书2页 说明书9页 附图1页 CN 115261298 A 2022.11.01 CN 115261298 A 1.一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法， 其特 征在于， 其包括如下步骤： 第一阶段驯化： 将待驯化的植物乳杆菌接种于培养基中在36 ‑38℃培养23 ‑25h； 然后将 培养后的菌液与保护剂混合， 置于59 ‑61℃下水浴， 计算水浴后的植物乳杆菌的存活率； 接 种水浴后的菌液至新的含培养基的培养容器中； 重复第一阶段驯化至少2次， 直至存活率≥ 90％， 结束第一阶段驯化； 第二阶段驯化： 将第一阶段驯化完成的菌液接种于含培养基的新的培养容器中， 于36 ～38℃， 培养23 ‑25h； 然后将保护剂与培养后的菌液进行混合， 于64 ‑66℃下水浴， 计算水浴 后的植物乳杆菌的存活率； 接种 水浴后的菌液至含培养基的新的培养容器中； 重复第二阶 段驯化至少3次， 直至存活率≥85％， 结束第二阶段驯化； 第三阶段驯化： 将第二阶段驯化完成的菌液接种于含培养基的新的培养容器中， 于36 ～38℃， 培养23 ‑25h； 然后将保护剂与培养后的菌液进行混合， 于69 ‑71℃下水浴， 计算水浴 后的植物乳杆菌的存活率； 接种 水浴后的菌液至含培养基的新的培养容器中； 重复第三阶 段驯化至少4次， 直至存活率≥80％， 结束第三阶段驯化； 在所述菌液中， 所述保护剂包括如下重量百分比计的原料： 海藻酸钠1.5 ‑2％、 氯化钙 1‑1.2％、 壳聚糖1.5 ‑2％、 酵母细胞壁2.5％ ‑3％、 葡萄糖酸 ‑δ‑内酯0.2‑0.4％、 脱脂奶粉3 ‑ 4％和硬脂酸钠1 ‑1.2％； 存活率＝(水浴后菌量/水浴前菌量)*10 0％。 2.根据权利要求1所述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法， 其特征在于， 第 一阶段中水浴 的时间为10 ‑12min； 第二阶段中水浴的时间为10 ‑12min； 第三阶段中水浴的时间为10 ‑ 12min； 优选地， 重复第 一阶段驯化至少3次， 重复第二阶段驯化至少4次， 重复第三阶段驯化至 少6次。 3.根据权利要求1所述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法， 其特征在于， 所述第 一阶段驯 化前还包括对待驯化的菌株进 行驯化前的复壮， 所述复壮包括将植物乳杆菌接种到培养基 中， 在36～38℃， 静置 培养23～25h； 然后将复壮后的植物乳杆菌用于所述第一阶段驯化。 4.根据权利要求3所述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法， 其特征在于， 所述培养基包括 如下的原料： 蛋白胨8 ‑10g/L， 酵母粉4 ‑5g/L， 葡萄糖10 ‑12g/L， 乙酸钠4 ‑5g/L， 柠檬酸二铵 2‑2.2g/L， 磷酸氢二钾2 ‑2.2g/L和水。 5.根据权利要求1所述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法， 其特征在于， 所述第 一阶段驯 化、 第二阶段驯化和第三阶段驯化的菌液接种量均为1 ‑1.2％。 6.根据权利要求1所述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法， 其特征在于， 所述第 一阶段驯 化、 第二阶段驯化和第三阶段驯化的培 养均为静置 培养。 7.一种植物乳杆菌粉剂的制备方法， 其特征在于， 其包括如下步骤： 将通过权利要求1 ‑ 6任一项所述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法获得的驯化菌株接种至培养基中制备种子 液， 然后将种子液接种至发酵罐中进 行培养， 再将培养后的菌液与保护剂混合， 经喷雾干燥 获得菌粉。 8.根据权利要求7所述的植物乳杆菌粉剂的制备方法， 其特征在于， 所述发酵罐中的培 养基包括如下原料： 蛋白胨10 ‑12g/L， 酵母粉10 ‑12g/L， 玉米粉10 ‑12g/L， 葡萄糖20 ‑24g/L， 乙酸钠4‑5g/L， 柠檬酸二铵2 ‑2.2g/L， 磷酸氢二钾 2‑2.2g/L， 一水硫酸镁0.2 ‑0.3g/L， 一水权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115261298 A 2硫酸锰0.2 ‑0.3g/L和水； 优选地， 在发酵 罐中的培 养温度为3 6～38℃， 静置 培养30～32小时； 优选地， 所述喷雾 干燥时的出风温度为70℃ ±3℃。 9.根据权利要求7所述的植物乳杆菌粉剂的制备方法， 其特征在于， 所述种子液的培养 基包括如下的原料： 蛋白胨8 ‑10g/L， 酵母粉4 ‑5g/L， 葡萄糖10 ‑12g/L， 乙酸钠4 ‑5g/L， 柠檬 酸二铵2‑2.2g/L， 磷酸氢二钾2 ‑2.2g/L和水。 10.如权利要求7 ‑9任一项所述的植物乳杆菌粉剂的制备 方法制得的植物乳杆菌粉剂。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115261298 A 3