(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210728159.X (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310022 浙江省杭州市上城区德胜中 路298号 (72)发明人 林辉　马军伟　成琪璐　叶静　 俞巧钢　孙万春　王强　邹平　 陈照明　马进川　王峰　刘洋之　 (74)专利代理 机构 杭州恒翌专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33298 专利代理师 柯奇君 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C02F 11/02(2006.01) C12N 1/02(2006.01)C12N 1/36(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/085(2006.01) C12R 1/11(2006.01) (54)发明名称 一种耐高温抗生素降解混合菌剂及其制备 方法和应用 (57)摘要 本发明涉及环 境保护领域， 特别涉及一种耐 高温抗生素降解菌剂、 制备方法及其在畜禽粪污 抗生素去除中的应用。 一种耐高温抗生素降解混 合菌剂， 包括蜡样芽孢杆菌、 水原拉梅尔芽胞杆 菌、 巨大芽孢杆菌和解蛋白芽孢杆菌。 本发明的 抗生素降解 混合菌剂是一种耐高温菌剂， 且人工 筛选构建的混合菌剂较成分不完全明确的天然 混菌体系和单一菌株对污染物的生物降解优势 明显。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 114990024 A 2022.09.02 CN 114990024 A 1.一种耐高温抗生素降解混合菌剂， 其特征在于， 包括蜡样芽孢杆菌 （Bacillus   cereus）、 水原拉梅尔芽胞杆菌（Rummeliibacillus）、 巨大芽孢杆菌（Bacillus   megaterium） 和解蛋白芽孢杆菌 （Baci llus proteolyticus） 。 2.根据权利要求1所述的耐高温抗生素降解混合菌剂， 其特征在于由蜡样芽孢杆菌 （Bacillus  cereus） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformis） 、 水原拉梅尔 芽胞杆菌 （Rummeliibacillus） 、 巨大芽孢杆菌 （Bacillus  megaterium） 和解蛋白芽孢杆菌 （Bacillus proteolyticus） 组成。 3.根据权利要求2所述的耐高温抗生素降解混合菌剂， 其特征在于， 蜡样芽孢杆菌 （Bacillus  cereus） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformis） 、 水原拉梅尔 芽胞杆菌 （Rummeliibacillus） 、 巨大芽孢杆菌 （Bacillus  megaterium） 和解蛋白芽孢杆菌 （Bacillus proteolyticus） 从畜禽粪便中驯化、 筛 选得到。 4.根据权利要求2所述的耐高温抗生素降解混合菌剂， 其特征在于， 蜡样芽孢杆菌 （Bacillus  cereus） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformis） 、 水原拉梅尔 芽胞杆菌 （Rummeliibacillus） 、 巨大芽孢杆菌 （Bacillus  megaterium） 和解蛋白芽孢杆菌 （Bacillus proteolyticus） 从猪粪中驯化、 筛 选得到； 混合菌剂由各菌种等比例混合组成。 5.根据权利要求2所述的耐高温抗生素降解混合菌剂， 其特征在于， 蜡样芽孢杆菌 （Bacillus  cereus） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformis） 、 水原拉梅尔 芽胞杆菌 （Rummeliibacillus） 、 巨大芽孢杆菌 （Bacillus  megaterium） 和解蛋白芽孢杆菌 （Bacillus proteolyticus） 均具有经121℃湿热灭菌 30min后仍能复苏存活的高温 耐受性。 6.耐高温抗 生素降解混合菌剂的驯化和筛 选方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1） 称取冷藏猪粪于容器中， 加入无菌水室温振荡， 滤纸过 滤获得猪粪废水 悬液1， 灭菌； 2） 取冷藏猪粪与水混合， 室温振荡， 静置后取 上清， 获得猪粪悬 浊液2； 3） 取灭菌处 理的猪粪废水 悬液1， 加磺胺二甲嘧啶， 并加猪粪悬 浊液2， 避光震荡培 养； 4） 培养结束后， 取培养物涂布到含有磺胺二甲嘧啶的LB平板上， 挑取单菌落到含有磺 胺二甲嘧啶的LB培 养基中， 培 养若干天后测定抗 生素降解 率； 5） 选取可降解抗生素的菌种， 提取细菌总DNA， PCR扩增后， 进行测序、 同源性比对， 确定 降解菌的种属。 7.根据权利要求6所述的耐高温抗生素降解混合菌剂的驯化和筛选方法， 其特征在于， 还包括步骤6） ， 筛选获得的磺胺 二甲嘧啶降解菌， 制定菌剂组合方案； 将 菌剂组合接种到猪 粪废水悬液中， 避光震荡培养； 培养若干天后， 测定磺胺二甲嘧啶降解率； 通过对比磺胺二 甲嘧啶降解 率， 获得耐高温抗 生素降解混合菌剂。 8.根据权利要求6或7所述的耐高温抗生素降解混合菌剂的驯化和筛选方法， 其特征在 于， 步骤1） 中， 粪便： 水=1:9， v: v； 灭菌温度不低于120℃； 步骤2） 中， 冷藏猪 粪与水1:1混合； 步骤6） 中， 将菌剂组合按照1%接种到猪粪废水 悬液中。 9.根据权利要求7所述的耐高温抗生素降解混合菌剂的驯化和筛选方法， 其特征在于， 确定的降解菌包括蜡样芽孢杆菌（Bacillus  cereus）、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformi s） 、 水原拉梅尔芽 胞杆菌 （Rummeliibacillus） 、 巨大芽孢杆菌 （Bacillus  megaterium） 和解 蛋白芽孢杆菌 （Bacillus  proteolyticus） ； 步骤6） 中获得耐 高温抗生素降解混合菌剂如权利要求2所述。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114990024 A 210.如根据权利要求2所述的耐高温抗生素降解混合菌剂在畜禽粪污抗生素去除中的 应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114990024 A 3