(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210880793.5 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 南方海洋科学与工程广东省实验室 （广州） 地址 511400 广东省广州市南沙区南沙街 资讯科技园海 滨路1119号 申请人 中国科学院南海 海洋研究所 (72)发明人 胡云峰　徐湘薇　张云　 (74)专利代理 机构 北京华仁联合知识产权代理 有限公司 1 1588 专利代理师 王海霞 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 11/14(2006.01) C12N 11/089(2020.01)C02F 3/34(2006.01) C12R 1/11(2006.01) C02F 101/38(2006.01) (54)发明名称 一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的 巨大芽孢杆菌 (57)摘要 本发明涉及亚甲基蓝吸附技术领域， 尤其涉 及一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨 大芽孢杆菌。 其主要针对现有用于吸附亚甲基蓝 的细菌本身 易受温度、 pH、 盐度等条件的影响， 并 且存在反应时间较长、 去除作用不稳定等的问 题， 提出如下技术方案： 包括巨大芽孢杆菌 Bacillus  megaterium  LM‑44以及固定菌株的无 机载体固定化吸附剂和 固定菌株的有机载体固 定化吸附剂； 所述巨大芽孢杆菌Bacillus   megaterium  LM‑44分离于南海深海环境， 最大生 长耐盐度为8％， 可在含盐量为10％的环境中正 常吸附亚甲基蓝。 本发明中的脱色菌株具有易获 得、 易于培养、 生长周期短、 吸附容量大、 脱色效 果稳定、 菌株耐盐性较好的特点， 固定化后对环 境温度、 环境pH、 染料浓度稳定性显著提高。 权利要求书1页 说明书4页 附图4页 CN 115232769 A 2022.10.25 CN 115232769 A 1.一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其特征在于， 包括巨大芽 孢杆菌Bacillus  megaterium  LM‑44以及固定菌株的无机载体固定化吸附剂和固定菌株的 有机载体固定化吸附剂； 所述巨大芽孢杆菌Bacillus  megaterium  LM‑44分离于南海深海环境， 最大生长耐盐 度为8％， 可在含盐量 为10％的环境中正常吸附亚甲基蓝 。 2.根据权利要求1所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 所述巨大芽孢杆菌Bacillus  megaterium  LM‑44游离菌株的制备方法包括以下 步骤： 从固体LB培养基中挑取生长良好的单个菌株于液体LB培养基中， 室温下150rmp振荡培 养12h， 以1％接种量 转接至液体LB培 养基中， 37℃， 15 0rmp振荡培 养12h； 吸取菌液离心， 去除上清液， 加入无菌水清洗， 离心后去上清液， 获得湿菌体备用。 3.根据权利要求2所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 游离菌株Bacillus  megaterium  LM‑44在最适条件下对100mg/L亚甲基蓝去除率 为70％， 吸附5 00mg/L亚甲基蓝溶 液时， 吸附容 量为153mg/g。 4.根据权利要求2所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 固定菌株的无机载体固定化吸附剂的载体为无机载体硅胶， 固定方式为吸附， 固 定菌株为Baci llus megaterium LM‑44。 5.根据权利要求4所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 无机载体固定化吸附剂的固定条件为： 取部分湿菌体， 加入相同体积无菌水， 震 荡充分后加入10％载体， 振荡， 振荡速度为： 150rmp反应2h后抽滤， 用无菌生理盐水冲洗载 体表面， 放入5 0℃恒温箱 烘干1h。 6.根据权利要求5所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 无机载体固定化吸附剂最适条件下对100mg/L亚甲基蓝去除率为98％， 吸附 500mg/L亚甲基蓝时最大吸附容 量为192mg/g。 7.根据权利要求2所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 固定菌株的有机载体固定化 吸附剂载体为有机载体大孔树脂750S， 固定方式为 吸附， 固定 菌株为Baci llus megaterium LM‑44。 8.根据权利要求7所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 有机载体固定化吸附剂还包括固定条件， 所述固定条件为： 取部分湿菌体， 加入 相同体积无菌水， 震 荡充分后加入10％载体， 振 荡， 振荡速度为： 150rmp反应2h后抽滤， 用无 菌生理盐水冲洗载体表面， 放入5 0℃恒温箱 烘干1h。 9.根据权利要求8所述的一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 其 特征在于， 有机载体固定化吸附剂对100mg/L亚甲基蓝去除率为98％， 吸附500mg/L亚甲基 蓝时最大吸附容 量为192mg/g， 在25℃ ‑45℃问吸附率波动不超过1％。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232769 A 2一种耐盐且对亚 甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌 技术领域 [0001]本发明涉及 亚甲基蓝吸附技术领域， 尤其涉及一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附 容量的巨大芽孢杆菌 。 背景技术 [0002]染料废水的处理已经是现代工农业发展中急需解决的重大问题之一， 由于染料颜 色鲜艳并且具有较高的吸收波长， 会直接影响水中生物的光合作用， 危害 水体环境， 并且对 人类和动物的的生命安全也构成了极大 的威胁。 偶氮染料是染料中使用最广泛的一种， 在 生产和使用过程中会产生大量高盐、 高碱度的染料废水， 排放到水体中会造成水体色度污 染， 降低水体溶解氧含量与透光度， 干扰水体生物正常生命活动， 破坏水体生态平衡， 另外 其降解产 物对生物 也有毒害作用。 亚甲基蓝是典型的偶氮染料， 含有难以降解的偶氮键， 微 量溶于水中就可 呈现明显 蓝色。 [0003]目前， 亚甲基蓝染料废水的处理方法包括化学法、 物理法和生物 法， 其中微生物吸 附法具有来源丰富、 品种多样、 成本低廉、 对环境干扰小、 实地操作性 强、 无毒害副物质等优 点， 在污染治理方面具有显著优越性。 从真菌、 藻类、 细菌中都发现了可以吸 附染料的微生 物， 如白腐真菌、 芽孢杆菌等。 [0004]其中细菌具有生长周期短、 生长速率高、 环境适应性强、 易于获取等特点， 非常适 用偶氮脱色； 但细菌其本身易受温度、 pH、 盐度等条件的影响， 并且存在反应时间较长、 去除 作用不稳定等局限性， 因此我们提出一种耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢 杆 菌。 发明内容 [0005]本发明的目的是针对背景技术中存在的现有用于吸附亚甲基蓝的细菌本身易受 温度、 pH、 盐度等条件的影响， 并且存在反应时间较长、 去除作用不稳定等的问题， 提出一种 耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容 量的巨大芽孢杆菌 。 [0006]本发明的技术方案： 一种 耐盐且对亚甲基蓝具有强吸附容量的巨大芽孢杆菌， 包 括巨大芽孢杆菌Bacillus  megaterium  LM‑44以及固定菌株的无机载体固定化吸附剂和固 定菌株的有机载体固定化吸附剂； [0007]所述巨大芽孢杆菌Bacillus  megaterium  LM‑44分离于南海深海环境， 最大生长 耐盐度为8％， 可在含盐量 为10％的环境中正常吸附亚甲基蓝 。 [0008]优选的， 所述巨大芽孢杆菌Bacillus  megaterium  LM‑44游离菌株的制备方法包 括以下步骤： [0009]从固体LB培养基中挑 取生长良好的单个菌株于液体LB培养基中， 室温下150rmp振 荡培养12h， 以1％接种量 转接至液体LB培 养基中， 37℃， 15 0rmp振荡培 养12h； [0010]吸取菌液离心， 去除上清液， 加入无菌水清洗， 离心后去上清液， 获得湿菌体备用。 [0011]优选的， 游离菌株Bacillus  megaterium  LM‑44在最适条件下对100 mg/L亚甲基蓝说　明　书 1/4 页 3 CN 115232769 A 3