(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210995681.4 (22)申请日 2022.08.18 (71)申请人 仲恺农业工程学院 地址 510225 广东省广州市海珠区纺织路 东沙街24 号 (72)发明人 任文彬　郑文雄　汪薇　陈海光　 白卫东　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 薛梦 (51)Int.Cl. A23B 4/20(2006.01) C12P 21/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种细菌素抑菌组合物及其制备方法与应 用 (57)摘要 本发明涉及一种细菌素抑菌组合物及其制 备方法与应用， 所述细菌素抑菌组合物， 包括以 下质量份的组分： 0.2～2 份细菌素、 0.1～2 0份天 然抑菌剂； 所述天然抑菌剂为茶多酚、 柚子精油 中的至少一种。 所述细菌素抑菌组合物的制备方 法包括以下步骤： 将细菌素、 天然抑菌剂加入到 溶剂中， 搅拌均匀， 即得细菌 素抑菌组合物。 本发 明还提供了所述细菌素抑菌组合物在鸡肉保鲜 中的应用， 细菌素具有一定的抑菌活性， 但单独 使用时， 抑菌保鲜效果较差， 而通过复配后的细 菌素抑菌组合物具有更优的抑菌保鲜作用， 能够 较好的延长冷鲜鸡肉的保藏期。 权利要求书1页 说明书8页 附图6页 CN 115299489 A 2022.11.08 CN 115299489 A 1.一种细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 包括以下质量份的组分： 0.2～2份细菌素、 0.1 ～20份天然抑菌剂； 所述天然抑菌剂为茶多酚、 柚子精油中的至少一种。 2.根据权利要求1所述的细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 所述细菌素抑菌组合物包括 以下质量份的组分： 1.5份细菌素、 10份柚子精油。 3.根据权利要求1所述的细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 所述细菌素抑菌组合物包括 以下质量份的组分： 1.5份细菌素、 0.2份茶多酚。 4.根据权利要求1所述的细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 所述细菌素从乳酸菌中提 取， 所述细菌素的制备方法包括以下步骤： (1)将 乳酸菌接种于MRS肉汤 培养基中， 置于恒温 摇床培养箱中， 摇床振 荡培养， 取其发酵液； (2)将 菌种发酵液在4℃下， 离心， 取上清液； (3) 将上清液经60％～75％饱和硫酸铵进行沉淀， 离心， 取沉淀； (4)将沉淀用透析袋扎好， 置于 蒸馏水或纯 净水中搅拌过夜， 冷冻干燥得到细菌素。 5.根据权利要求4所述的细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 所述乳酸菌来源于海洋动 物， 将海洋动物用无菌水 处理， 取其胃肠道， 用无菌生理盐水浸泡， 均质后制得悬液， 取悬液 进行10‑1‑10‑5梯度稀释获得肠道微 生物原液； 所述海洋动物为金仓鱼、 鯆鱼、 石斑鱼、 小黄鱼、 马鲛鱼、 方斑东 风螺中的至少一种。 6.根据权利要求5所述的细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 所述乳酸菌的分离与鉴定方 法包括以下步骤： (1)选用含有不同溶解钙浓度的MRS培养基进行乳酸菌的分离： 取梯度稀释的菌悬液分 别涂布于含0.01～0.1％CaCO3的MRS培养基上培 养， 选取有溶钙圈的菌为分离目的菌； 所述MRS培养基的配方包括以下组分： 10～20g蛋白胨、 5～10g牛肉粉、 4～8g酵母粉、 2 ～4g葡萄糖、 1～2mL吐温80、 2～4g磷酸氢二钾、 5～10g乙酸钠、 2～4g柠檬酸三铵、 0.2～ 0.4g硫酸镁、 0.0 5～0.1g硫酸锰、 15～3 0g琼脂粉、 1～ 2L蒸馏水； (2)革兰氏染色为阳性； (3)过氧化氢酶反应： 取洁净玻片1张， 用接种环挑取细菌， 加1～6％H2O2， 立即观察结 果， 不产气泡 为阴性， 选取 阴性的菌； (4)发酵液的pH为3.9； (5)16S rRNA分子生物学鉴定； (6)从NCBI数据库对抗菌活性乳酸菌的16S  rRNA基因序列进行相似性搜索， 所述乳酸 菌属于明串珠菌属、 戊糖片球菌属、 魏氏斯菌属、 粪肠珠菌属中的至少一种。 7.根据权利要求6所述的细菌素抑菌组合物， 其特征在于， 所述乳酸菌的筛选方法包括 以下步骤： (1)按照1～4％的接种量将乳酸菌接入MRS肉汤培养基中， 振 荡培养， 0～48h取发 酵液； (2)将菌种发酵液离心， 取上清； (3)用牛津杯法测定发酵上清液对指示菌的抑菌活 性， 测定抑菌圈直径大小， 筛 选出产抑菌物质的菌株。 8.权利要求1～7任一所述的细菌素抑菌组合物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： 将细菌素、 天然抑菌剂加入到溶剂中， 搅拌均匀， 即得细菌素抑菌组合物。 9.权利要求1～8所述的任一项细菌素抑菌组合物在鸡肉保鲜中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115299489 A 2一种细菌素抑菌组合物及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于食品保鲜技术领域， 涉及一种细菌素抑菌组合物及其制备方法与应 用。 背景技术 [0002]当前， 我国主要的食品安全问题是食品本身的腐败变质， 食品加工过程中的致病 菌等微生物的控制已然成为急需解决的难题。 随着国民生活质量的不断改善， 食品添加剂 的使用变得更加 严苛， 因为传统的化学防腐剂具有一定的毒性， 而研究表明了细菌素是无 毒无害， 且具有不 易产生耐药性的特点， 故其可能成为未来 化学防腐剂的替代品。 [0003]细菌素是由细菌产生的抗生代谢产物， 是一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽。 近年来， 由于抗生素的滥用， 导致了细菌产生了耐药性等问题， 迫切需要寻找一种 无公害， 不易产生耐药性的天然抑菌物质， 而细菌素就具备了这样的特点， 因而成为了研究热门话 题。 Nisin是目前唯一运用在食品防腐方面的乳酸菌细菌素， 被广泛运用在食品加工和保 藏， 但其仅对部分革兰氏阳性菌有抑制作用， 抑菌谱较窄， 因而极大地限制了Nisin在食品 防腐保鲜中的应用。 且抑菌素单独使用时， 往往抑菌保鲜效果也较差。 此外， 鸡肉因其具有 营养价值高， 价格低廉的特点而受到了广大人民的追捧， 但又 因其营养丰富和含 水量高， 容 易受到腐败微 生物的污染， 导 致冷鲜鸡肉的保藏期非常 短。 发明内容 [0004]本发明的目的在于克服现有技术的不足， 提供一种具有更佳抑菌效果， 可以应用 于食品保鲜中的细菌素抑菌组合物及其制备 方法。 [0005]本发明的另一目的是提供 上述细菌素抑菌组合物在鸡肉保鲜中的应用。 [0006]为实现上述目的， 本 发明采取的技术方案为： 一种细 菌素抑菌组合物， 包括以下质 量份的组分： 0.2 ～2份细菌素、 0.1～ 20份天然抑菌剂； [0007]所述天然抑菌剂为茶多酚、 柚子精油中的至少一种。 [0008]化学防腐剂大多含有毒性， 容易危害人体健康， 并且可能产生其它品质方面的问 题， 而天然防腐剂来源于动植物或微生物体内， 通过提取或发酵加工制成， 添加天然防腐剂 的食品相对来说更具有安全性， 也更容易受消费者的青睐。 天然防腐物质主要通过抑制氧 化作用、 抑制微生物繁殖、 改进感官等来实现防腐目的， 目前天然防腐剂有很多， 常见 的有 植物精油、 茶多酚、 黄酮类化合物、 柠檬苦素类似物等， 此类物质均具有 纯天然无公害、 对特 定菌株有较好的抑菌效果 等优点。 本发明选用柚子精油、 茶多酚分别与细菌素复配。 [0009]更优选地， 所述细 菌素抑菌组合物， 包括以下质量份的组分： 1.5份细 菌素、 10份柚 子精油。 [0010]更优选地， 所述细菌素抑菌组合物， 包括以下质量份的组分： 1.5份细菌素、 0.2份 茶多酚。 [0011]更优选地， 所述细菌素从乳酸菌中提取， 所述细菌素的制备方法包括以下步骤：说　明　书 1/8 页 3 CN 115299489 A 3