(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210647842.0 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 四川剑南春 （集团） 有限责任公司 地址 618200 四川省德阳市绵竹市春溢街 (72)发明人 陶勇　徐占成　唐清兰　刘孟华　 何晓红　 (74)专利代理 机构 成都金英专利代理事务所 (普通合伙) 51218 专利代理师 徐立宁 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12G 3/02(2019.01) C12R 1/145(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种窖泥合成微 生物组及其制备与应用 (57)摘要 本发明公开了一种窖泥合 成微生物组、 制备 方法及其在酿酒窖池中的应用， 属于生物技术及 发酵技术领域。 所述微生物组包括： 瘤胃菌梭菌， 己酸杆菌、 毛螺旋菌、 楔 形梭菌、 甲烷八叠球菌和 甲酸甲烷杆菌。 本发明根据窖泥基质特性及其微 生态群落特点， 选取乳酸利用梭菌和产乙酸、 丁 酸和己酸等功能菌， 以及氢型和乙酸型甲烷菌等 多种微生物有机组合， 利用上述微生物之前的互 养代谢和相互作用， 构建一种合成微生物组。 该 微生物组经过扩 大培养后应用于窖泥制备、 改良 或恢复， 可快速提高窖泥中有益菌的丰度， 促进 窖泥微生态的优化及稳定， 提高白酒的品质。 权利要求书2页 说明书7页 CN 114933996 A 2022.08.23 CN 114933996 A 1.一种窖泥合成微 生物组， 其特 征在于： 所述 微生物组包括以下微 生物： 瘤胃梭菌 （Cl ostridium rumenum） ， 保藏 号为CGMCC No.9926； 己酸杆菌 （Capro ic acid bacilli） ， 保藏号为GDMCC No.60133； 毛螺旋菌 （Trichospirillum） ， 保藏 号为CGMCC No.9927； 楔形梭菌 （Cl ostridium sphenoides） ， 保藏 号为DSM No.632； 甲烷八叠球菌 （sarci na methanica） ， 保藏 号为DSM No.800； 甲酸甲烷杆菌 （Methan obacterium  formicicum） ， 保藏 号为DSM No.1535。 2.根据权利要求1所述的窖泥合成微生物组， 其特征在于： 所述微生物 组的细菌浓度为 107～109 CFU/mL。 3.根据权利要求1所述的窖泥合成微生物组， 其特征在于： 所述微生物的相对丰度为： 瘤胃梭菌： 30～50%； 己酸杆菌： 15～20%； 毛螺旋菌： 20～25%； 楔形梭菌： 10～15%； 甲烷八叠 球菌： 5～10%和甲酸甲烷杆菌： 3～5%。 4.如权利要求1～3任意一项所述的一种窖泥合成微生物组的制备方法， 其特征在于： 包括下述 步骤： S1： 将瘤胃梭菌、 己酸杆菌、 毛螺旋菌、 楔形梭菌接种到YRCM培养基中， 30～35℃厌氧3 ～5天后， 按等比例混合得到的产酸复合菌液； S2： 将产酸复合菌液连续传代10次， 即获得稳定的产酸复合菌液， 其中， 瘤胃梭菌 （CGMCC No.9926） ， 己酸杆菌 （GDMCC  No.60133） ， 乳酸利用梭菌 （CGMCC  No.9927） 、 楔形梭菌 （DSM No.632） 的丰度分别为 40～50%， 20～25%， 25～3 0%， 15～20%； S3： 将甲烷八叠球菌接种至Medium120， 接种量10～20%， 培养温度35℃， 培养时间3～5 天， OD600达到0.8～1.2； S4： 将甲酸甲烷杆菌接处至Medium119， 接种量10～20%， 培养温度35℃， 培养时间5～7 天， OD600达到0.5～0.7； S5： 按甲烷八叠球菌： 甲酸甲烷杆菌 =1:2～3比例混合， 得到甲烷菌复合菌液； S6： 将产酸复合菌液： 甲烷菌复合菌液=2 ～3:1比例混合即为窖泥合成微 生物组。 5.根据权利要求4所述的窖泥合成微生物组的制备方法， 其特征在于： 步骤S1中， YRCM 培养基 （1000mL） 的配方为： 蛋白胨  5～10g,葡萄糖5～10g,  酵母浸粉3～ 5g， 乙酸钠3～5g， NaCl 2～3g， 磷酸氢二钾0.3～ 0.5g， 磷酸二氢钾0.2～ 0.3g， 氯化铵0.2～ 0.5g， 硫酸镁  0.2 ～0.5g, L‑半胱氨酸0.5～0.7g,  黄水100mL， 复合微量元素溶液1mL， 刃天青 （0.1%w/v） 0.5mL， pH值5.5～7.0， 灭菌20分钟， 放置常温后， 添加1mL复合维生素 溶液。 6.根据权利要求4所述的窖泥合成微生物组的制备方法， 其特征在于： 步骤S3中， Medium120为： 磷酸氢二钾  0.35 g， 磷酸二氢钾  0.23 g， 氯化铵  0.50 g， 硫酸镁  0.50 g， 氯化钙 0.25 g， 氯化钠2.2 5 g， 硫酸亚铁 溶液 (0.1% w/v溶于0.1  N硫酸 ) 2.00 mL， 复合 微量元素溶1.00  mL， 酵母浸粉  2.00 g， 蛋白胨2.00  g， 乙酸钠  2.50 g， 刃天青  (0.1% w/ v) 0.50 mL， 碳酸氢钠  2.00 g， 复合维生素溶液  1.0 mL， 甲醇 10.00 mL， L‑半胱氨酸   0.30 g， 硫化钠  0.30 g。 7.根据权利要求4所述的窖泥合成微生物组的制备方法， 其特征在于： 步骤S4中， Medium119为： 磷酸二氢钾  0.50 g， 硫酸镁  0.40 g， 氯化钠  0.40 g， 氯化铵  0.40 g， 氯化 钙 0.05 g， 硫酸亚铁溶液  (0.1% w/v 溶于0.1 N硫酸 ) 2.00 mL， 复合微量元素溶  1.00 权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114933996 A 2mL， 酵母浸粉  1.00 g， 乙酸钠  1.00 g， 甲酸钠2.00  g， 脂肪酸混合液  (异丁酸2.3%， DL ‑甲 基丁酸2.7%， 戊酸2.7%，  异戊酸2.7%)  20.00 mL， 刃天青(0.1%  w/v) 0.50 mL， 碳酸氢钠   4.00 g， L‑半胱氨酸  0.50 g， 硫化钠  0.50 g。 8.根据权利要求5所述的窖泥合成微生物组 的制备方法， 其特征在于： 复合微量元素溶 液( 每L) ： FeCl2•4H2O 1.5g ； CoCl2•6H2O 0.19g ； MnCl2•4H2O 0.1g ； ZnCl2 0.07g ； NaMO4•2H2O 0.036g ； NiCl2•6H2O 0.024g ； H3BO3 0.006g ； CuCl2•2H2O 0.002g ； HCl(25％   solution)10mL； 复合维生素溶液(  每L)： p‑氨基苯甲酸0.04g  ； 生物素0.01g  ； 烟酸0.1g  ； B5 0.05g ； B6 0.15g ； B1 0.1g ； B12 0.05g ； D.L‑  硫辛酸0.03g ； B2 0.03g ； 叶酸0.01g。 9.如权利要求1～3任意一项所述的一种窖泥合成微生物 组用于制备窖泥的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 1） 配制窖泥营养液， 用水混匀备用； 2） 配制黄 土混合物； 3） 将窖泥合成微生物组： 窖泥营养液： 黄土混合物=0.1～0.2:0.4～0.5:1， 混合搅拌均 匀， 下窖、 密封， 3 0～35℃培养50～70天； 4） 把窖泥均匀地涂抹在窖壁表面， 堆入粮糟正常发酵。 10.根据权利要求9所述的窖泥合成微生物组的应用方法， 其特征在于： 步骤1） 所用的 窖泥营养液所用物质的体积占比为： 葡萄糖0.2～1%， 牛肉粉0.2～1%，  蛋白胨0.2～0.5%， 酵母粉0.2～0.5%， 氯化铵  0.02～0.05%， 磷酸氢二钾0.01～0.05%， 氯化钠0.1 ‑0.3%， 硫酸 镁0.01～0.0 5%， 半胱氨酸0.0 03～0.007%， 黄水10%， pH  5.0～6.5 。 11.根据权利要求9所述的一种窖泥合成微生物组用于制备窖泥的方法， 其特征在于： 所述黄土混合物的配比为： 黄 土： 曲粉： 酒糟： 麦粉： 豆粕： 酒尾=20:0.5:0.2:0.1:0.1:0.02。 12.如权利要求1～3任意一项所述的一种窖泥合成微生物组用于修复或恢 复窖泥的方 法， 其特征在于， 包括如下步骤： 将制备的窖泥合成微生物组活菌液、 窖泥营养液和新窖泥 （或退化的窖泥） 按1～3： 1： 30 （v/w） 比例， 混合搅拌均匀， 密封， 25～35℃培养15～20天， 进行窖泥生态改良或恢复， 把 改良或恢复的窖泥均匀地涂抹在窖壁表面。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114933996 A 3