(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221097987 7.4 (22)申请日 2022.08.16 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.25224 2022.07.04 CGMCC No.25225 2022.07.04 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310022 浙江省杭州市上城区德胜中 路298号 (72)发明人 林辉　张锦　成琪璐　马军伟　 俞巧钢　孙万春　叶静　王强　 邹平　陈照明　马进川　王峰　 刘洋之　 (74)专利代理 机构 杭州恒翌专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33298 专利代理师 柯奇君(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C02F 11/02(2006.01) C02F 103/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/06(2006.01) C12N 1/36(2006.01) C12N 1/02(2006.01) (54)发明名称 一种磺胺二甲嘧啶降解菌剂及其制备方法 和应用 (57)摘要 本发明涉及环保领域。 一种磺胺 二甲氧嘧啶 混合菌剂， 包括原玻璃蝇节杆菌 （Arthrobacter   protophormiae） 和不动杆菌 （Acinetobacter   sp. ） 。 本发明的磺胺二甲氧 嘧啶混合菌剂 源于畜 禽粪便， 与粪便堆肥原生微生物菌群兼容性良 好。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115141782 A 2022.10.04 CN 115141782 A 1.一种磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂， 其特征在于， 包括原玻璃蝇节杆菌 （Arthrobacter   protophormiae）和不动杆菌（Acinetobacter  sp .）； 原玻璃蝇节杆菌 （Arthrobacterprotophormiae） 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC  No.25224； 不动杆菌 （Acinetobacter  sp. ） 保藏于 中国微生物菌种保藏 管理委员会 普通微生物中心， 保藏编号 为CGMCC No.25225。 2.根据权利要求1所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂， 其特征在于由原玻璃蝇节杆菌 （Arthrobacter  protophormiae） 、 不动杆菌 （A cinetobacter  sp. ） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus fusiformis） 和微杆菌 （Microbacterium  mitrae） 组成。 3.根据权利要求1所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂， 其特征在于原玻璃蝇节杆菌 （Arthrobacter  protophormiae） 、 不动杆菌 （A cinetobacter  sp. ） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformi s） 和微杆菌 （Microbacterium  mitrae） 从畜禽粪便中驯化、 筛 选得到。 4.根据权利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂， 其特征在于， 原玻璃蝇节杆菌 （Arthrobacter  protophormiae） 、 不动杆菌 （A cinetobacter  sp. ） 、 纺缍形赖氨酸芽孢杆菌 （Lysinibacillus  fusiformi s） 和微杆菌 （Microbacterium  mitrae） 从猪粪中驯化、 筛选得 到。 5.根据权利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂， 其特征在于， 混合菌剂由各菌种等 比例混合组成。 6.如权利要求1所述磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂的驯化和筛选方法， 其特征在于， 包括以 下步骤： 1） 称取冷藏猪粪样品于容器中， 加入无菌水 （粪便： 水=1:9， v:v） ， 室温振荡， 滤纸过滤 获得猪粪废水 悬液1， 灭菌处 理； 2） 取冷藏猪粪按照1:1与水混合， 室温振荡， 静置后取 上清， 获得猪粪悬 浊液2； 3） 取灭菌处 理的猪粪废水 悬液1， 加磺胺二甲嘧啶， 并加猪粪悬 浊液2， 避光震荡培 养； 4） 培养结束后， 取培养物涂布到含有磺胺二甲嘧啶的LB平板上， 挑取单菌落到含有磺 胺二甲嘧啶的LB培 养基中， 培 养若干天后测定抗 生素降解 率； 5） 选取可降解抗生素的菌种， 提取细菌总DNA， 用通用引 物进行PCR扩增后， 进行测序、 同源性比对， 确定降解菌的种属。 7.根据权利要求6所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂的驯化和筛选方法， 其特征在于， 还 包括步骤6） ， 筛选获得的磺胺 二甲嘧啶降解菌， 制定菌剂组合方案； 将 菌剂组合接种到猪粪 废水悬液中， 避光震荡培养后， 测定磺胺二甲嘧啶降解率； 通过对比磺胺二甲嘧啶降解率， 获得权利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂。 8.根据权利要求6或7所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂的驯化和筛选方法， 其特征在 于， 步骤1） 中， 粪便： 水=1:9， v: v； 灭菌温度不低于120℃； 步骤2） 中， 冷藏猪 粪与水1:1混合； 步骤6） 中， 将菌剂组合按照1%接种到猪粪废水 悬液中。 9.权利要求2所述的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂在畜禽粪污抗 生素去除中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141782 A 2一种磺胺二甲嘧啶降解菌剂及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及环 保领域， 特别涉及一种磺胺二甲嘧啶降解菌剂及 其制备方法及 其畜 禽粪污抗 生素去除中的应用。 背景技术 [0002]养殖业是抗生素应用的主要领域。 养殖粪污中抗生素残留普遍， 若未处理完全， 将 伴随废水、 粪便排放进入环境， 对人体及生态环 境造成危害。 如何有效去除畜禽粪污中抗生 素残留已成为当下亟 待解决的重要问题。 [0003]生物降解是解决抗生素环境残留的有效手段， 已引起国内外学者的广泛关注。 目 前， 磺胺类抗生素降解菌有较多报道， microbacterium， rhodococcus， achromobacter，   ralstonia， brevundimonas， pseudomonas， acinetobacter， variovorax， alcaligenes、   ochrobactrum、 类地杆菌、 假单 胞菌、 气单 胞菌、 产碱 菌等。 [0004]此外， 混合微生物群落比起单一微生物有很大的优势， 对环境的适应性更强， 多种 微生物菌种相互配合， 更能满足多种抗生素同时存在的复合污染现状， 因此混菌降解抗生 素的研究也很受关注。 特别是实验室人工筛选构建出 的混合菌剂， 较成分不完全明确的天 然混菌及单一菌株对污染物的生物降解优势明显。 此外， 由于人工构建的混合菌剂的菌种 成分明确， 因此更容易找到最佳、 最合理的生产工艺， 产品质量也更稳定， 在实际应用中这 类菌剂的针对性更强， 也更安全合理。 然而， 目前关于这类菌种明确的抗生素降解混合菌剂 的报道还很少。 [0005]由上可知， 为了满足日益扩大的抗生素污染的微生物修复需求， 能够根据主要抗 生素残留类型、 与介质原生微生物菌群兼容情况等具体应用情况选择不同的抗生素降解菌 种， 为混合菌剂 配制提供更多菌种资源， 筛选更多不同菌属以及针对不同抗生素的降解菌， 扩大抗生素降解 微生物菌种库必不可少。 发明内容 [0006]本发明的一个目的是提供一种来源于畜禽粪便， 与粪便堆肥原生微生物菌群 兼容 性良好， 磺胺二甲嘧啶降解率高的磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂。 发明另一个目的是提供上述 二甲氧嘧啶混合菌剂的驯化和筛 选方法以及 在畜禽粪污抗 生素去除中的应用。 [0007]本发明的具体技术方案为： 一种磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂， 包括原玻璃蝇节杆菌   (Arthrobacter  protophormiae)和不动杆菌(Acinetobacter  sp.)； 原玻璃蝇节杆菌   (Arthrobacter  protophormiae)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC  No. 25224， 保藏日期是2022年7月4日， 保藏单位地址是北京市朝阳区北 辰西路1号院3号； 不动 杆菌(Acinetobacter  sp.)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC  No. 25225， 保藏日期是2022年7月4  日， 保藏单位地址 是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 [0008]进一步的， 磺胺二甲氧嘧啶混合菌剂由原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter  说　明　书 1/6 页 3 CN 115141782 A 3