(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211120675.0 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 中南大学湘雅医院 地址 410008 湖南省长 沙市湘雅路87号 (72)发明人 谢辉　胡新月　祝晟　王振兴　 (74)专利代理 机构 长沙轩荣专利代理有限公司 43235 专利代理师 汪金连 (51)Int.Cl. A61K 35/741(2015.01) A23L 33/135(2016.01) C12N 1/20(2006.01) A61P 11/06(2006.01) A61P 37/08(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气 管哮喘制剂中的应用 (57)摘要 本发明属于益生菌转化应用技术领域， 具体 涉及一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气 管哮喘制剂中的应用。 本发明从嗜黏蛋白阿克曼 菌(Akk菌)的培养上清液中经密度梯度离心、 过 滤、 浓缩和外泌体提取试剂层析提取嗜黏蛋白阿 克曼菌外膜囊泡(Akk ‑OMV)， 并通过构建哮喘小 鼠模型， 并利用Akk菌/Akk ‑OMV进行干预， 通过对 干预处理后小鼠相关生理特征的检测， 证实了 Akk菌及其Akk ‑OMV对抑制气道和肺组织炎症、 减 少气道粘液的分泌以及具备免疫调节功能的作 用， 可作为现有药物的替代物或协助治疗药物， 用于改善急性和慢性哮喘的药物、 食品和保健 品。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115518079 A 2022.12.27 CN 115518079 A 1.一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用， 其特征在于， 所述 益生菌为嗜黏蛋白阿克 曼菌。 2.根据权利要求1所述的益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用， 其特征在于， 所述哮喘的类型包括： 过敏性哮喘、 运动性哮喘、 变异性哮喘、 月经性哮喘、 药 物性哮喘、 肺源性哮喘、 儿童哮喘、 职业 性哮喘、 混合型哮喘。 3.根据权利要求1所述的益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用， 其特征在于， 所述 益生菌外膜囊泡的制备 方法具体包括： 将嗜黏蛋白阿克曼菌进行传代培养活化后加入培养基中， 在37℃厌氧状态下以60rpm 速率摇晃4 天培养后离心取上清液过滤， 滤液经浓缩获得浓缩 液用外泌体提取试剂提取， 获 取沉淀即为外膜囊泡； 所述培养基为将BHI培 养基加水高温消毒、 冷却后加入L ‑半胱氨酸、 刃天青； 所述外泌体提取试剂为ExoQuick ‑TC外泌体提取试剂， 用量为浓缩液的1/5； 提取的条 件为： 4℃环境下反应12小时后， 15 00×g， 4℃离心3 0分钟。 4.根据权利要求3所述的益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用， 其特征在于， 所述离心过程的工艺条件为： 12,000 ×g， 4℃离心15分钟； 所述过滤过程的工 艺条件为： 将上清液用0.22μm孔径的过滤器过滤； 所述浓缩过程的工艺条件为： 用孔径为 100KD的超滤 管将滤液浓缩300‑500倍。 5.一种防治支气管哮喘制 剂， 其特征在于， 所述制 剂包括嗜黏蛋白阿克曼菌、 嗜黏蛋白 阿克曼菌外膜囊泡中的任意 一种或组合。 6.根据权利要求5所述的防治支气管哮喘制 剂， 其特征在于， 所述制剂至少包含一种药 学、 食品学或保健品学 上可接受辅料； 所述辅料为载体、 赋形剂、 稀释剂、 润滑剂、 润湿剂、 乳化剂、 悬浮液稳定剂、 防腐剂、 甜 味剂以及香料中的一种或多种。 7.根据权利要求5所述的防治支气管哮喘制剂， 其特征在于， 所述制剂的剂型为注射 液、 口服液、 胶囊剂、 片 剂、 喷雾剂或软膏剂中的任意 一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115518079 A 2一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治 支气管哮喘制剂中的 应用 技术领域 [0001]本发明属于益生菌转化应用技术领域， 具体涉及 一种益生菌及 其外膜囊泡在制备 防治支气管哮喘制剂中的应用。 背景技术 [0002]支气管哮喘(简称哮喘)是一种以咳嗽、 胸闷、 喘息和气促等呼吸道症状为主要临 床表现的异质性疾病， 该病反复发作且缠绵难愈。 目前， 吸入性糖 皮质激素、 β 肾上腺受体激 动剂、 白三烯受体拮抗剂和茶碱等常用哮喘治疗药物只能控制症状， 并不能预防或根治哮 喘。 上述药物的长期使用具有一定的副作用， 导致依从性不佳， 并且存在部 分患者对这一些 药物不敏感。 因此， 急需探寻防治哮喘的新制剂。 [0003]当前， 生活方式、 饮食、 体重、 环境和微生物组的改变都与过敏和哮喘等慢性炎症 疾病的患病风险和严重程度有关， 然而， 这些因素与宿主免疫调节过程之间复杂的相互作 用仍然知之甚少 。 人体和动物肠道内存在数量庞大 的微生物群， 能够调节宿主的健康和稳 态。 微生物群的组成和代谢产物 能够激活机体黏膜组织的生物屏障功 能和免疫效应功能， 亦是过敏和哮喘领域的研究热点和重点。 [0004]嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansiamuciniphila， Akk)是2004年首次分离提出的一 种人类肠道的正常粘蛋白分解细菌， 是一种革兰氏阴性、 严格厌 氧且定植在肠道的益生菌， 约占正常人体肠道微生物群落总 数的3％‑5％， 且因其在维持宿主健康方面的综合作用备 受关注， 被认 为是预防或治疗代谢性疾病的 “下一代有益微生物 ”。 在乳制品、 保健品和药品 中添加益生菌用以改善胃肠道功能、 治疗消化系统疾病的做法已被人们所熟悉和广泛应 用。 肠道微生物细胞外膜囊泡(outermembranevesicles， OMV)是介导其与机体靶器官之间 相互作用和生物信号的关键成分， 可以穿过粘液层 并通过循环转移到外周组织发挥作用。 但关于益 生菌及其外膜囊泡对哮喘 疾病的预防和治疗效果尚未 见报道。 发明内容 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明通过构建急性和慢性哮喘模型， 并利用嗜黏蛋白 阿克曼菌或/和嗜黏蛋白阿克曼菌外膜囊泡进行干预， 通过对干预处理后小鼠相关生理特 征的检测， 对抑制气道和肺组织炎症、 减少气道粘 液分泌的以及具备免疫调节功能的作用； 本发明提供的Akk菌及A kk‑OMV可作为现有 药物的替代物或协助治疗 药物， 用于改善急性和 慢性哮喘的药物、 食品和保健品， 拓 宽了益生菌治疗哮喘的应用领域。 [0006]为了达到上述目的， 本发明实施例提供了一种益生菌及 其外膜囊泡在制备防治支 气管哮喘制剂中的应用， 所述 益生菌为嗜黏蛋白阿克 曼菌。 [0007]进一步的， 所述嗜黏蛋白阿克 曼菌为ATC CBAA‑835菌株。 [0008]进一步的， 所述哮喘的类型包括： 过敏性哮喘、 运动性哮喘、 变异性哮喘、 月经性哮 喘、 药物性哮喘、 肺源性哮喘、 儿童哮喘、 职业 性哮喘、 混合型哮喘。说　明　书 1/5 页 3 CN 115518079 A 3