(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210950393.7 (22)申请日 2022.08.09 (71)申请人 广州市巴菲巴健康产业有限公司 地址 510000 广东省广州市白云区鹤龙街 鹤边鹤北 大田一横路3号四楼409室 (72)发明人 王冠　张法权　 (74)专利代理 机构 广州科沃园专利代理有限公 司 44416 专利代理师 王亚琳 (51)Int.Cl. C12N 1/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A23L 33/105(2016.01) A23L 33/125(2016.01) A23L 33/15(2016.01)A23L 33/135(2016.01) C12R 1/225(2006.01) C12R 1/23(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种益生菌冻干片及其制备方法 (57)摘要 本发明属于微生物制备技术领域， 具体涉及 一种益生菌冻干片及其制备方法。 本发明提供的 益生菌冻干片 包括如下组分及其重量份数： 复合 益生菌剂2 0~40份， 低聚半乳糖10~20份， 燕麦β ‑ 葡聚糖8~12份、 冻干保护剂10~20份， 银杏提取物 5~8份， 怀山药提取物2~5份， 维生素C  0.5~2份， 维生素E 0.8~1.8份， 甜菊糖苷1.2~2.5份。 本发 明提供的益生菌冻干片具有优异的抗冷冻性和 贮藏稳定性， 能更加有效抵御在冷冻干燥过程时 由冻干工艺而引起的益生菌失活或死亡， 有效提 高冻干片的活菌存活率， 同时还 可以提高益生菌 冻干片的耐胃酸 性。 权利要求书1页 说明书8页 CN 115197847 A 2022.10.18 CN 115197847 A 1.一种益 生菌冻干片， 其特 征在于， 包括如下组分及其重量份数： 复合益生菌剂20~40份， 低聚半乳糖10~20份， 燕麦β ‑葡聚糖8~12份， 冻干保护剂10~20 份， 银杏提取物5~8份， 怀山药提取物2~5份， 维生素C  0.5~2份， 维生素E  0.8~1.8份， 甜菊糖 苷1.2~2.5份。 2.如权利要求1所述的益 生菌冻干片， 其特 征在于， 由如下组分及其重量份数组成： 复合益生菌剂30份， 低聚半乳糖15份， 燕麦β ‑葡聚糖10份， 冻干保护剂15份， 银杏提取 物7份， 怀山药提取物3份， 维生素C  1.5份， 维生素E  1.2份， 甜菊糖苷 2份。 3.如权利要求1或2所述的益生菌冻干片， 其特征在于， 所述复合益生菌剂由鼠李糖乳 杆菌、 嗜酸乳杆菌、 短双歧杆菌和戊糖乳杆菌按重量比5:3:1:1培 养而得。 4.如权利要求1或2所述的益生菌冻干片， 其特征在于， 所述冻干保护剂包括如下组分 及其重量份数： 辛烯基琥珀酸淀粉钠10~16份， 普鲁兰多糖6~10份， 低取代羟丙纤维素3~9份， 6‑羟基山 奈酚5~8份， 精氨酸1~5份， L‑半胱氨酸1~3份， 海藻酸丙二醇酯1~3份， 碳酸钙1~3份， 去离子 水30~60份。 5.如权利要求4所述益生菌冻干片， 其特征在于， 所述冻干保护剂由如下组分及其重量 份数组成： 辛烯基琥珀酸淀粉钠12份， 普鲁兰多糖8份， 低取代羟丙纤维素6份， 6 ‑羟基山奈酚6份， 精氨酸3份， L ‑半胱氨酸2份， 海藻酸丙二醇酯2份， 碳 酸钙1.5份， 去离 子水50份。 6.如权利要求 4所述益生菌冻干片， 其特 征在于， 所述冻干保护剂的制备 方法如下： 将辛烯基琥珀酸淀粉钠， 普鲁兰多糖， 低取代羟丙纤维素， 6 ‑羟基山奈酚， 精氨酸， L ‑半 胱氨酸， 海藻酸丙二醇酯， 碳 酸钙溶于去离 子水中， 搅拌均匀， 即得。 7.一种如权利要求1~6任一项所述的益生菌冻干片的制备方法， 其特征在于， 包括如下 制备步骤： S1、 将冷冻保存的菌种分别接种于 MRS液体培 养基中， 传代培 养1~3次， 得到活化菌种； S2、 取步骤S1所得的活化菌种， 按比例混合， 接种于MRS液体培养基中进行培养， 然后将 培养好的培养液进 行离心处理， 除去 上清液保留菌泥， 用灭活生理盐水洗涤菌泥， 即得复合 益生菌剂； S3、 向步骤S2所得的复合益生菌剂中加入冻干保护剂， 搅拌均匀， 再加入低聚半乳糖， 燕麦β‑葡聚糖， 银杏提取物， 怀山药提取物， 维生素C， 维生素E， 甜菊糖苷， 搅拌均匀 后， 放入 真空冷冻干燥机中冷冻干燥， 然后进行压片处 理， 即得。 8.如权利要求7所述益生菌冻干片的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S1中培养温度为 35~38℃， 培养时间为20~28h。 9.如权利要求7所述益生菌冻干片的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S2中接种总量为 1.5~2.5%， 培养温度为37℃， 培养时间为18~24h； 进行离心处理时的离心转速为4000~ 8000rpm， 离心时间为10~15min； 采用灭活生理盐水对菌泥的洗涤次数为1~2次。 10.如权利要求7所述益生菌冻干片的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S3中冷冻干燥 的具体步骤为： 将物料放入真空冷冻干燥机中于 ‑80~‑70℃预冻2~3h小时后， 抽真空， 真空 度为10~20pa， 升温至 ‑50~‑40℃， 冻干24~28h。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115197847 A 2一种益生菌冻干片及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于微 生物制备技 术领域， 具体涉及一种益 生菌冻干片及其制备 方法。 背景技术 [0002] [0003]益生菌是一类通过促进宿主肠道内多种微生物菌群的生态平衡， 对宿主健康或生 理功能产生有益作用的活性微生物， 能够有明确 健康作用 、 改善维持微生态平衡和发挥益 生功效。 益生菌对人体具有多种健康保护及疾病防御的功 能， 其代谢产物可以通过调节机 体的酸性环境抑制 部分病原菌的生长繁殖， 进而有益于身体的健康。 其可以通过调节肠道 的益生菌菌群， 防止腹泻等疾病的发生； 再有可以影响机体免疫系统、 促进机体的免疫应 答、 降低胆固醇含量、 减少机体肿瘤发生率、 减缓乳糖不耐症等， 因此， 益生菌的功效在食 品、 药品及保健品领域已得到广泛认可， 但是在实际应用中， 益生菌还有不 足之处， 比如： 益 生菌进入人体消 化道后容易受到胃酸、 胃蛋白酶等的作用而失活， 利用率会较低； 在生产、 加工、 运输、 保存过程中， 会因为不利环境的影响而导致益生菌活性降低， 这也是导致其无 法在工业 生产中广泛应用的主 要原因。 [0004]为使益生菌能够长期保存,最好将其制成干燥状态。 目前， 常采用的制备菌粉干燥 方法有气流干燥法、 冷冻干燥法和喷雾干燥法。 冷冻干燥是目前保护微生物发酵剂 中活菌 数和生物活性的较为常用的手段之一， 具有适用范围广， 对各种微生物都有很好的效果； 发 酵粉剂活菌成活率高， 活性 成分保藏时间长。 但该工艺 实施过程中， 冷冻和干燥过程中会对 益生菌细胞造成死 亡并对细胞内部物质造成变性， 造成过多的菌体失活。 [0005]中国专利申请CN112841657A公开了一种多菌种复合冻干粉及其制备工艺， 多菌种 复合冻干粉， 包括纳豆菌、 红曲菌、 益生菌、 山楂、 蛋白质， 制备工艺包括如下步骤： (1)纳豆 菌制备； (2)固态培养基经灭菌处理后， 接种红曲菌菌种进行发酵， 二次发酵结束后再经干 燥处理得到含有纳豆菌的红曲菌； (3)制作益生菌培养基， (4)分别将纳豆菌、 红曲菌、 益生 菌、 山楂、 蛋白质分别进行筛选， 并按重量份称量， 取纳豆菌、 红曲菌、 益生菌、 山楂、 蛋白质 原料组份进行打磨粉碎处理； (5)获得多菌种复合冻干粉。 中国专利申请 CN 101926428  A公 开了一种益生菌银杏花粉冻干粉及其制备方法， 该益生菌银杏花粉冻干粉 是以当年破壁或 不破壁银杏花粉为原料， 配以一定比例的红糖， 经鼠李糖乳杆菌、 嗜酸乳杆菌两种益生菌单 株或混合发酵， 然后再经冷冻干燥而 成的活菌冻干粉。 益生菌 活菌数达109cfu/g以上， 并含 有大量银杏花粉功能成分及益生菌发酵产物。 虽然上述发明中均添加了益生菌， 理论上可 以起到在宿 主体内产生抑菌素、 调节肠道菌群、 增强机体免疫的功效， 但是添加的益生菌由 于冻干过程将活细胞暴露在额外应激压力下， 引起活性损失。 并且形成胞内冰晶和再结 晶 均能引起细胞膜损伤， 造成部分活细胞死亡， 同时由于益生菌在人体酸性环境中的耐受性 较差以及各种微生态制剂中益生菌的贮藏稳定性不佳， 从而影响了益生菌的活性及其功能 特性的发挥。 [0006]因此， 有必要研发一种可以有效提高冻干后益生菌的存活率以及提高益生菌在胃说　明　书 1/8 页 3 CN 115197847 A 3