(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211008121.1 (22)申请日 2022.08.22 (71)申请人 广东省农业科 学院蚕业与农产品加 工研究所 地址 510610 广东省广州市天河区东莞庄 一横路13 3号 (72)发明人 胡腾根　余元善　徐玉娟　吴继军　 温靖　邹波　安可婧　傅曼琴　 李璐　彭健　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 田立媛 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01)C12P 19/14(2006.01) C12P 19/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A61P 3/00(2006.01) C12R 1/15(2006.01) (54)发明名称 一种益生元、 提取方法及在富集肠道 益生菌 中的应用 (57)摘要 本发明公开了益生元、 提取方法， 并将提取 的益生元应用于筛选调节糖脂代谢肠道益生菌 中， 益生元的结构为α ‑T‑Glcp‑1→3‑β‑Glcp‑1 →(5‑α‑Araf‑1)3→3‑α‑(6‑OAc)→Glcp‑1， 由 2个葡萄糖、 1个6 ‑乙酰基葡萄糖及3个阿拉伯 糖 分子通过α ‑1,3、 α‑1,5、 β‑1,5连接而成； 以该 益生元筛选肠道益生菌， 对小鼠进行灌胃处理， 筛选益生元最显著富集的肠道菌群， 然后将该菌 群与其他菌群进行相关性分析， 获得肠道益生 菌。 权利要求书1页 说明书7页 附图10页 CN 115433289 A 2022.12.06 CN 115433289 A 1.益生元在筛选调节糖脂代谢肠道益生菌中的应用， 所述益生元由2个葡萄糖、 1个6 ‑ 乙酰基葡萄糖及3个阿拉伯糖分子通过α ‑1,3、 α‑1,5、 β‑1,5连接而成， 其结构为α ‑T‑Glcp‑1 →3‑β‑Glcp‑1→(5‑α‑Araf‑1)3→3‑α‑(6‑OAc)→Glcp‑1。 2.一种益生元， 所述益生元为α ‑T‑Glcp‑1→3‑β‑Glcp‑1→(5‑α‑Araf‑1)3→3‑α‑(6‑ OAc)→Glcp‑1。 3.一种益 生元的提取 方法， 其特 征在于， 过程包括： (1)以干燥 的桑叶为原料， 将16 ‑20％(w/v)桑叶粉添加至pH7.0的去离子中， 在75℃的 条件下水提多糖10 ‑15h， 使用终浓度为60％ ‑80％乙醇醇沉， 5000 ×g离心10min， 收集沉淀， 得到桑叶多糖； (2)取5‑9％(w/v)桑叶多糖溶液， 加入半纤维素酶0.2 ‑0.5％(w/v)， 调整pH值为6.0 ‑ 6.5， 在300 ‑600MPa的条件下反应1 ‑2h， 8000×g离心5min， 将上清液过反渗透膜进行浓缩， 得到益生元粗反应液； (3)将益生元粗反应液依次经过醇沉、 纳滤、 反渗透， 将益生元粗反应液中的未被酶降 解的多糖和单糖去除， 经反渗透浓 缩得到初步纯化的益 生元溶液； (4)将20‑25％(w/v)初步纯化 的益生元溶液加入到80cm ×5.0cm离子交换树脂层析柱 DEAE‑Spepharose  Fast Flow中， 以0.3mol/L  NaCl为洗脱剂， 洗脱流速为1.0 ‑2.0mL/min， 收集60‑200min洗脱液， 反渗透浓缩， 然后将20 ‑25％(w/v)浓缩液加入到80cm ×5.0cm葡聚 糖凝胶G‑15柱中， 以去离子水为洗脱剂， 洗脱流速为1.0 ‑2.0mL/min， 收集150 ‑250min洗脱 液， 反渗透浓 缩， 得到纯化后的益 生元溶液； (5)通过核磁分析鉴定所制备的益生元具有特定的结构， 其为： α ‑T‑Gl cp‑1→3‑β‑ Glcp‑1→(5‑α‑Araf‑1)3→3‑α‑(6‑OAc)→Glcp‑1。 4.一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法， 其特征在于， 以权利要求1所述的益生 元筛选， 过程包括： 以所述益生元对小鼠进行灌胃处理， 筛选益生元最显著富集的肠道菌 群， 然后将该菌群与其 他菌群进行相关性分析， 获得肠道益 生菌。 5.根据权利要求4所述的一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法， 其特征在于， 灌 胃用的益 生元为25 ‑100mg/kg.bw的益 生元溶液。 6.根据权利要求4所述的一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法， 其特征在于， 益 生元能特异 性显著促进肠道菌群慢葡萄球菌、 停滞棒杆菌、 鼠乳杆菌的增殖， 显著抑制毛螺 菌科细菌28 ‑4、 梭菌sp.ASF5 02菌的生长 。 7.根据权利要求4所述的一种筛选调节糖脂代谢的肠道益生菌的方法， 其特征在于， 肠 道益生菌的有效活菌总数为108‑1010CFU/mL， 灌胃剂量为2.5 ‑10mL/kg·bw， 灌胃时间为60 ‑ 90d。 8.一种能调 节糖脂代谢的肠道益生菌， 其特征在于， 所述益生菌由权利要求3 ‑7任一项 所述的方法筛 选得到。 9.根据权利要求8所述的一种能调节糖脂代谢的肠道益生菌， 其特征在于， 所述益生菌 为停滞棒杆菌 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115433289 A 2一种益生元、 提取方 法及在富集肠道益生菌中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及肠道益生菌筛选技术领域， 更具体地说是涉及一种益生元、 提取方法 及应用。 背景技术 [0002]糖脂代谢是机体能量供给的重要生命过程， 其稳态平衡是宿主应对体内外各种应 激反应的重要保障。 糖脂代谢紊乱会引发肥胖、 糖尿病、 血脂异常及脂肪肝等系列慢性疾 病， 严重威胁人类健康。 随着人们生活节奏及饮食习惯的改变， 与环境及营养等因素息息相 关的慢性疾病的患病人 数急速上升 。 [0003]糖脂代谢紊乱的发生与高脂饮食及缺乏运动的生活方式、 遗传、 代谢及环境等因 素相关。 此外， 研究证实肠道菌群在肥胖和糖尿病等糖脂代谢紊乱疾病的发病 过程中起关 键作用。 近年来研究显示， 膳食干预是影响肠道菌群结构及功能的重要手段， 其中， 肠道菌 群可对营养组分的变化作出迅速反应， 而好的饮食习惯也对肠道微生物结构的稳定起到了 关键性的作用， 由此， 通过膳食干预肠道微生物改善糖脂代谢紊乱成为食品营养学研究的 新切入点。 而通过直接补充肠道益生菌是一种直接有效的方式， 但目前益生菌主要从环境 或者土壤中筛 选， 存在工作量大、 且不确定性高等 缺点。 [0004]因此， 如何提供一种益生元的提取方法及应用 是本领域技术人员亟需解决的问 题。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本 发明提供了一种益生元、 提取方法及 应用， 通过制备特定结构的益生 元， 富集具有调控糖脂代谢活性的肠道益 生菌。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]益生元在筛选调节糖脂代谢肠道益生菌中的应用， 益生元由2个葡萄糖、  1个6‑乙 酰基葡萄糖及3个阿拉伯糖分子通过α ‑1,3、 α‑1,5、 β‑1,5连接而成， 其结构为α ‑T‑Glcp‑1→ 3‑β‑Glcp‑1→(5‑α‑Araf‑1)3→3‑α‑(6‑OAc)→Glcp‑1。 [0008]作为与上述技术方案相同的发明构思， 本发明还请求保护一种益生元， 所述益生 元为α‑T‑Glcp‑1→3‑β‑Glcp‑1→(5‑α‑Araf‑1)3→3‑α‑(6‑OAc)→Glcp‑1。 [0009]作为与上述技术方案相同的发明构思， 本发明还请求保护一种益生元的提取方 法， 过程包括： [0010](1)以干燥的桑叶为原料， 将16 ‑20％(w/v)桑叶粉添加至pH7.0的去离子中， 在75 ℃的条件下水提多糖10 ‑15h， 使用终浓度为60％ ‑80％乙醇醇沉， 5000 ×g离心10min， 收集 沉淀， 得到桑叶多糖； [0011](2)取5‑9％(w/v)桑叶多糖溶液， 加入半纤维素酶0.2 ‑0.5％(w/v)， 调整pH值为 6.0‑6.5， 在300 ‑600MPa的条件下反应1 ‑2h， 8000×g离心5 min， 将上清液过反渗透膜进行 浓缩， 得到益 生元粗反应液；说　明　书 1/7 页 3 CN 115433289 A 3