(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211073113.5 (22)申请日 2022.09.02 (83)生物保 藏信息 GDMCC No:62697 202 2.08.12 (71)申请人 上海市农业科 学院 地址 201106 上海市闵行区北翟路2 901号 (72)发明人 王金斌　岳童　叶海龙　黄艳娜　 何川　蒋玮　吕贝贝　曾海娟　 刘华　周益帆　白寅霜　 (74)专利代理 机构 上海开祺知识产权代理有限 公司 31114 专利代理师 费开逵 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01G 13/00(2006.01)A01N 63/22(2020.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C05F 11/08(2006.01) C05G 3/00(2020.01) C05G 3/60(2020.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种番茄青枯病拮抗细菌WJB0802及其应用 (57)摘要 本发明提供一种番茄青枯病拮抗细菌 WJB0802及其应用。 所述番茄青枯病拮抗细菌 WJB0802分类命名为枯草芽孢杆菌， 保藏号为 GDMCC62697。 根据本发明， 还提供一种番茄青枯 病拮抗细菌WJB0802在制备防治番茄青枯病的生 防菌剂中的应用， 以及制备促进植物 生长制剂中 的应用。 本发 明从不同地域青枯病发病田间的健 康番茄根际进行功能细菌的定向筛选， 通过根际 浸染复筛法最终筛选出这样一种防治效果最好 的番茄青枯病拮抗细菌WJB0802， 其抑菌圈直径 达37.73mm， 盆 栽试验结果表明WJB0802 显著降低 了番茄青枯病的病情指数67.9％， 本发明为防控 番茄青枯病建立模式生物菌 株提供了新策略。 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 CN 115369062 A 2022.11.22 CN 115369062 A 1.一种番茄青枯病拮抗细菌WJB0802， 其特征在于， 所述番茄青枯病拮抗细菌WJB0802 分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)， 于2022年8月12日保藏于广东省微生物菌 种保藏中心， 地址为广州市先烈中路10 0号大院59号楼5楼， 保藏 号为GDMCC62697。 2.一种根据权利要求1所述的番茄青枯病拮抗细菌WJB0802在防治番茄青枯病中的应 用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 将根据权利要求1所述的番茄青枯病拮抗细菌WJB0802接种于TSB液体培养基中， 32 ±2℃、 180～200r/min振摇培养至对数期， 在4000～6000rp m条件下离心8～12min， 用无菌 水重悬， 调整OD600为0.8～1.0， 备用； S2： 番茄种子播种于 育苗盆中， 待幼苗长 至15～20cm高时， 移栽至盆中； S3： 采用步骤S1备好的菌液对植株进行灌根处理， 用量为30～50mL/株， 即可实现对番 茄青枯病的防治。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 步骤S3包括： 幼苗移栽3天后采用菌液进行 灌根处理， 每隔5天施加一次菌液， 共计3～5次。 5.一种根据权利要求1所述的番茄青枯病拮抗细菌WJB0802在制备防治番茄青枯病的 生防菌剂中的应用。 6.一种根据权利要求1所述的番茄青枯病拮抗细菌WJB0802在制备促进植物生长制剂 中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述促进植物生长制 剂为微生物菌剂 或微 生物肥料。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369062 A 2一种番茄青枯病拮抗细菌WJB0802及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及番茄青枯病防治领域， 更具体地涉及一种番茄青枯病拮抗细菌 WJB0802及其应用。 背景技术 [0002]番茄原产于美洲大陆， 大约十六、 十七世纪作为观赏性植物传入我国。 上世纪50年 代我国的种植规模迅速发展， 随着多年连作病原菌和番茄中可能带有的毒素在土壤中积 累， 导致了青枯病等土传病害的严重发生。 番茄青枯病(bacterial  wilt disease)是由 Ralstonia  solanacearum引起的番茄细菌性枯萎病， 在全球严重威胁着热带和温带番茄作 物的生长。 近些年， 随着设施番茄大棚的种植面积的扩大以及高温高湿的土壤环境， 给青枯 病发展提供了有利条件。 青枯病 是世界上最具破坏性的植物细菌性土传病害之一， 分布于 全球各大洲； 其致病菌茄科劳尔氏菌具有多样性高、 寄主范围广等特点(可侵染50多科200 多种植物)， 据不完全统计， 青枯病引起的经济损失 高达30万/公顷， 尤其我国山东、 新 疆、 内 蒙古、 河北、 河南、 云南、 江苏等地番茄青枯病发生严重， 常常造成毁灭性灾害。 目前还没有 有效措施管理这种土传病害。 此外， 若大量使用化学杀菌剂会导致农药残留而造成土壤和 水污染， 从而影响到人类的健康和发展。 同时会引起病原菌产生抗性。 因此， 非化学方法包 括培养方法、 抗性品种和拮抗细菌剂的生物防治对 管理番茄青枯病具有重要的意义。 然而， 由于抗病品种缺乏稳定性和耐久性， 因此并不完全有效。 采用生防策略控制该病害， 以番茄 为模式植物开展青枯菌相关研究。 [0003]青枯菌主要从番茄的根际部分侵入， 也能从植物的茎部伤口进入导管内， 吸收植 物内的营养物质从而大量繁殖并产生代谢物质， 阻碍植物体内的水分运输， 继而使植株发 病。 番茄青枯菌可随病残植物体在土壤中存活大约1～6年。 在田间能通过雨水和灌溉水传 播， 也能通过人畜、 农具、 带菌土壤和昆虫等传播。 生物防治剂(BCAs)是一种自然生长的土 壤微生物， 它可以积极地攻击植物病原体， 抑制疾病的发生， 并帮助控制害虫和杂草的生 长。 已有研究利用木霉、 芽孢杆菌和假单 胞菌等防治方法对番 茄青枯病进行了控制。 [0004]环境友好型生物杀虫剂和有益微生物是化学杀虫剂的替代品。 利用芽孢杆菌属对 植物病害进行生物防治， 其防治机制主要通过其代谢产物及其产生的抗菌活性物质对病菌 起到抑制作用， 并诱导植物的系统抗性。 据报道， 对植物有益的芽孢杆菌属还能有效的在根 际定植， 并显示出促进植物生长和/或疾病 抑制活性。 研究发现， 解淀粉芽孢杆菌、 枯草芽孢 杆菌、 巴氏芽孢杆菌、 短小芽孢杆菌和球形芽孢杆菌重的某些特定菌株可显著降低多种宿 主上各种疾病的发病率或严重程度。 这些菌株能诱导番茄植株产生的系统抗性(ISR)已在 温室或田间试验中得到证明。 植物病害的生物防治方法研究已被证明是环保的， 对许多植 物病原体有效， 并被认为是植物病害管理的长期解决方案 。 [0005]董等从青枯病发病田间的健康番茄根际土壤中分离出了对青枯菌具有显著的抑 制作用的黏菌R31， 黏菌R31对青枯病的生物防治效果为81.09％； 同样， Manigundan等从尼 尔吉里斯番茄根际土中分离的链霉菌UT4A 49对番茄青枯病具有较好的抑菌能力， 在盆栽试说　明　书 1/7 页 3 CN 115369062 A 3