(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210628009.1 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 云南省烟草农业科 学研究院 地址 650021 云南省昆明市圆通 街33号 申请人 华南理工大 学 (72)发明人 胡彬彬　麦景　朱明军　邹聪明　 蔺忠龙　宁英　陈颐　姜永雷　 邹玲　周桂园　王保兴　蔡洁云　 孙浩巍　张轲　张晓伟　 (74)专利代理 机构 北京海虹嘉诚知识产权代理 有限公司 1 1129 专利代理师 巩固 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/36(2006.01)A24B 15/20(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/22(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种用于提升烟草品质的微 生物发酵 方法 (57)摘要 一种用于提升烟草品质的微生物发酵方法， 包括以下步骤： (1)以烤烟作为接种源接种于烟 草粉末培养基中， 在20 ‑40℃中培养20 ‑50h； (2) 将步骤(1)中的菌液接入到新鲜的烟草粉末培养 基中， 在20 ‑40℃中培养20 ‑50h， 循环15 ‑25个周 期， 获得稳定的烤烟微生物菌群； (3)将步骤(2) 获得的微生物菌群接种到新鲜的烟草粉末培养 基中， 在20‑40℃中培养2 0‑50h， 得到微生物 菌群 的种子液； (4)对步骤(3)获得的菌 液进行离心并 收集菌体； (5)对步骤(4)收集的菌体进行洗涤； (6)对步骤(5)洗涤后的菌体进行重 悬， 得到菌 悬 液； (7)往烟叶上喷施步骤(6)的菌 悬液， 发酵6 ‑8 天。 本发明利用从烤烟中富集驯化的微生物菌群 进行烟叶发酵， 能够多方面 提升烟草的品质。 权利要求书1页 说明书11页 附图1页 CN 115058356 A 2022.09.16 CN 115058356 A 1.一种用于提升烟草品质的微 生物发酵 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)以烤烟作为接种源接种于烟草粉末培 养基中， 在20 ‑40℃中培 养20‑50h； (2)将步骤(1)中的菌液接入到新鲜的烟草粉末培养基中， 在20 ‑40℃中培养20 ‑50h， 循 环15‑25个周期， 获得 稳定的烤烟微 生物菌群； (3)将步骤(2)获得的微生物菌群接种到新鲜的烟草粉末培养基中， 在20 ‑40℃中培养 20‑50h， 得到微 生物菌群的种子液； (4)对步骤(3)获得的菌液进行离心并收集菌体； (5)对步骤(4)收集的菌体进行洗涤； (6)对步骤(5)洗涤后的菌体进行重悬， 得到 菌悬液； (7)往烟叶上喷施步骤(6)的菌悬 液， 发酵6 ‑8天。 2.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于在步骤(2)中， 所述培养为在步骤(1)的温度 下培养同样的时间。 3.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于在步骤(3)中， 所述培养为在步骤(1)的温度 下培养同样的时间。 4.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于步骤(2)结束后， 对步骤(2)获得的微生物菌 群的结构进行分析， 得到属水平下top  10的物种相对丰度信息 。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于在步骤(1)中， 所述培 养为在37℃培 养24h。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于在步骤(1)中， 所述培 养为在25℃培 养48h。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于在步骤(2)中， 循环 20个周期。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于在步骤(7)中， 发酵 7天。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于在步骤(1)中， 所述烟草粉末培养基成分为 烟草粉末8 ‑12g/L， 胰蛋白胨8 ‑12g/L、 酵母 粉4‑6g/L、 氯化钠4 ‑6g/L。 10.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于在步骤(1)中， 烟草粉末是在低温粉碎成粉 末， 过200目筛。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058356 A 2一种用于提升烟草品质的微生物发酵 方法 技术领域 [0001]本发明属于烟草 技术领域， 具体涉及一种用于提升烟草品质的发酵 方法。 背景技术 [0002]烤烟叶片上存在着 许多微生物， 而烟草的自然陈化过程主要就依靠这些微生物产 生各种酶和代谢产物来提升烟草的品质。 尽管自然陈化可以明显提升烟草的品质， 但其所 需要的时间较长， 通常为1 ‑3年， 且容易受到外界环 境的影响， 使 得生产成本难以估计。 而通 过人工接种微生物来进 行发酵的方法， 不仅可以使发酵时间缩短至1 ‑2周， 还能够有效的提 升烟草的品质。 目前， 人工接种的微生物主要分为两种， 一种是从烟草中分离得到的能够降 解烟草中淀粉、 纤维素和蛋白质等会影响烟草品质的微生物， 另一种 是能够提高香气的产 香微生物。 但是用于人工 接种的微 生物大多是 单一菌株， 只能提升烟草某一方面的品质。 发明内容 [0003]为了解决现有技术自然陈化发酵时间长、 人工接种微生物提升品质单一的技术问 题， 本发明提供一种用于提升烟草品质的微 生物发酵 方法。 [0004]本发明的技 术方案如下： [0005]一种用于提升烟草品质的微 生物发酵 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： [0006](1)以烤烟作为接种源接种于烟草粉末培 养基中， 在20 ‑40℃中培 养20‑50h； [0007](2)将步骤(1)中的菌液接入到新鲜的烟草粉末培养基中， 在20 ‑40℃中培养20 ‑ 50h， 循环15 ‑25个周期， 获得 稳定的烤烟微 生物菌群； [0008](3)将步骤(2)获得的微生物菌群接种到新鲜的烟草粉末培养基中， 在20 ‑40℃中 培养20‑50h， 得到微 生物菌群的种子液； [0009](4)对步骤(3)获得的菌液进行离心并收集菌体； [0010](5)对步骤(4)收集的菌体进行洗涤； [0011](6)对步骤(5)洗涤后的菌体进行重悬， 得到 菌悬液； [0012](7)往烟叶上喷施步骤(6)的菌悬 液， 发酵6 ‑8天。 [0013]优选的， 在步骤(2)中， 所述培 养为在步骤(1)的温度下培 养同样的时间。 [0014]优选的， 在步骤(3)中， 所述培 养为在步骤(1)的温度下培 养同样的时间。 [0015]优选的， 步骤(2)结束后， 对步骤(2)获得的微生物菌群的结构进行分析， 得到属水 平下top 10的物种相对丰度信息 。 [0016]优选的， 在步骤(1)中， 所述培 养为在37℃培 养24h。 [0017]优选的， 在步骤(1)中， 所述培 养为在25℃培 养48h。 [0018]优选的， 在步骤(2)中， 循环 20个周期。 [0019]优选的， 在步骤(7)中， 发酵 7天。 [0020]优选的， 在步骤(1)中， 所述烟草粉末培养基成分为烟草粉末8 ‑12g/L， 胰蛋白胨8 ‑ 12g/L、 酵母 粉4‑6g/L、 氯化钠4 ‑6g/L；说　明　书 1/11 页 3 CN 115058356 A 3