(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210634403.6 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 陕西科技大 学 地址 710021 陕西省西安市未央大 学园区 (72)发明人 舒国伟　徐笠豪　李博豪　许运利　 陈立　陈合　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 李彬 (51)Int.Cl. C12P 33/20(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种生物转 化制备薯蓣皂素的方法 (57)摘要 本发明公开了一种生物转化制备薯蓣皂素 的方法， 涉及生物转化技术领域。 本发明通过单 因素和Box ‑Behnken试验设计对副干酪乳杆菌 B56和乳酸乳球菌 K172菌体直接转化和边培养边 转化穿山龙皂苷制备薯蓣皂素的工艺进行了优 化。 通过高效液相色谱UV和ELSD对皂素进行定性 检测， 自制薯蓣皂素和标准品、 工业皂素的出峰 时间一致， 峰形完整， 确定为薯 蓣皂素。 本发明以 穿山龙皂苷 为原料， 通过乳酸菌生物 转化制备薯 蓣皂素解决了传统酸水解带来的污染问题， 优化 确定了菌体转化和生长转化两种生产工艺， 最高 转化率可达76.73％， 为穿山龙资源的高值化利 用提供了新思路， 也为乳酸菌制备皂素提供理论 依据和技 术支撑。 权利要求书1页 说明书18页 附图6页 CN 114934092 A 2022.08.23 CN 114934092 A 1.一种利用乳酸菌转化制备薯蓣皂素的方法， 其特征在于， 包括(1)或(2)所示的任一 种方法： (1)直接转 化法， 其包括如下步骤： A1： 将活化后的乳酸菌接种到MRS培养基， 分离收集菌泥， 并将所述菌泥加入皂苷溶液 中转化制备皂素； A2： 向步骤A1所 得发酵液中加入四氯化 碳萃取， 再 经分离纯化， 得到所述薯蓣皂素； (2)边培养边转化法， 其包括如下步骤： B1： 将乳酸菌 接种至皂苷 ‑MRS培养基中边培 养边转化制备皂素； B2： 向步骤B1所 得发酵液中加入四氯化 碳萃取， 再 经分离纯化， 得到所述薯蓣皂素。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述乳酸菌为副干酪乳杆菌(Lactobac illus  paracasei)B5 6， 其保藏 号为CICC 20355。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述菌泥按照质量分数2％加入所述皂苷 溶液中。 4.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 采用直接转化法， 用所述副干酪乳杆菌B56 转化时， 转化条件为： 将 MRS培养基的pH调至7， 在36℃下恒温转化72h； 所述皂苷溶液中皂苷 浓度为W/V ＝0.7‑1.3％； 所述乳酸菌接种至MRS 培养基中的菌体的浓度， 按照质量浓度计为 3‑5％。 5.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 采用边培养边转化法， 用所述副干酪乳杆 菌B56转化时， 转化条件为： 按照质量浓度计， 将2％ ‑3％的副干酪乳杆菌B56接种至皂苷 ‑ MRS培养基中培养24h； 将皂苷 ‑MRS培养基的pH调至7， 在36℃下恒温转化72h； 所述皂苷 ‑MRS 培养基中皂苷的浓度， 按照体积分数计为0.8 ‑1.0％。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述乳酸菌为乳酸乳球菌(Lactococcus   lactis)K172， 其保藏 号为CICC 20410。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 采用直接转化法， 用所述乳酸乳球菌K172 转化时， 转化条件为： 将 MRS培养基的pH调至7， 在36℃下恒温转化72h； 所述皂苷溶液中皂苷 浓度为W/V ＝0.7‑1.3％； 所述乳酸菌接种至MRS 培养基中的菌体的浓度， 按照质量浓度计为 3％‑5％。 8.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 采用边培养边转化法， 用所述乳酸乳球菌 K172转化时， 转化条件为： 按照质量浓度计， 将2％ ‑3％的副干酪乳杆菌K172接种至皂苷 ‑ MRS培养基中培养24h； 将皂苷 ‑MRS培养基的pH调至7， 在36℃下恒温转化72h； 所述皂苷 ‑MRS 培养基中皂苷的浓度， 按照体积分数计为0.8 ‑1.0％。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述MRS ‑皂苷培养基的配包括： 向pH＝7.0 的磷酸缓冲液中加入按照质量浓度计为0.9％的皂苷， 溶解后进行抽滤， 再向滤液中加入 MRS培养基。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述皂苷的添加方式为分批次添加， 所述 分批次为第一天加入0.2％， 第三天和第四天分别加入0.3 5％。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114934092 A 2一种生物转化制备薯蓣皂素的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物转 化技术领域， 特别是 涉及一种生物转 化制备薯蓣皂素的方法。 背景技术 [0002]薯蓣皂素为众多甾体激素类药物中重要的合成原料， 因其昂贵的价格和不可取代 性， 有着“医药黄金 ”的美誉， 在医药等领域发挥其价值。 除直接应用于药物生产外， 薯蓣皂 素在临床方面的应用也有相关研究。 除此之外， 薯蓣皂 素在医美、 保健等方面也有不错的前 景。 现有技术中薯蓣皂 素的检测是评判粗提物质量、 产品纯度、 工艺水平和提取效率等指标 的重要手段。 目前， 薯蓣皂 素检测方式多样， 其基本可以分为物理法、 化学法、 高效液相法和 其他方法 几方面。 根据现有的研究进展， 薯蓣皂 素的制备工艺大致可以分为三类， 即酸水解 法、 生物转化法和其它 方法， 其中生物转化法包括酶转化法、 微生物转化法、 酶菌共转化法 等。 [0003]薯蓣皂素是甾体激素类药物不可缺少的原料， 目前， 薯蓣皂素的生产主要以黄姜 为原料， 而其他富含薯蓣皂苷的原料作物如穿山龙没有被应用于皂素生产， 而仅仅用于分 离生产薯蓣皂苷粗产 物。 如以穿山龙为原料生产薯蓣皂 素， 既能提高其产品附加值， 又能填 补日益提高的薯蓣皂 素需求， 因此利用穿山龙皂苷转化制备薯蓣皂 素是很有必 要的。 此外， 目前相对于微生物转化法生产薯蓣皂素 的研究主要以曲霉、 木霉等霉菌为主， 研究细菌的 相对较少。 [0004]穿龙薯蓣广 泛生长于东北、 华北等地区， 也可通过耕种生长收获， 是薯蓣皂素生产 理想的补充和替换方式。 目前穿山龙主要用于制备薯蓣皂苷粗品， 其产值低、 消耗量大、 会 极大消耗野生自然资源。 而随着穿山龙人工培养技术的日趋成熟， 其必定会存在市场饱和 情况， 因此通过深加工进一步制备成薯蓣皂 素很有必 要， 既能提高产品附加值， 同时也为生 物转化制备薯蓣皂素提供新工艺与新思路， 又能扩大市场， 还能进一步补充国内外皂素需 求市场。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种生物转化制备薯蓣皂素的方法， 以解决上述现有技术存 在的问题。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0007]技术方案一： 一种利用乳酸菌转化制备薯蓣皂素的方法， 包括(1)或(2)所示的任 一种方法： [0008](1)直接转 化法， 其包括如下步骤： [0009]A1： 将活化后的乳酸菌接种到MRS培养基， 分离收集菌泥， 并将所述菌泥加入皂苷 溶液中转化制备皂素； [0010]A2： 向步骤A1所得发酵液中加入四氯化碳萃取， 再经分离纯化， 得到所述薯蓣皂 素；说　明　书 1/18 页 3 CN 114934092 A 3