(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210835047.4 (22)申请日 2022.07.16 (71)申请人 山东金洋药业有限公司 地址 256300 山东省淄博市高青 县经济开 发区金洋路1号 (72)发明人 魏哲　陈鑫鑫　张智　吴喜　 夏瑶瑶　崔新冉　 (74)专利代理 机构 淄博佳和专利代理事务所 (普通合伙) 37223 专利代理师 张雯 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 19/44(2006.01) C12P 13/24(2006.01) C07H 1/06(2006.01)C07H 15/04(2006.01) C12R 1/15(2006.01) (54)发明名称 一种甘油葡糖苷提纯工艺 (57)摘要 一种甘油葡糖苷 提纯工艺， 属于甘油葡糖苷 提纯方法技术领域。 甘油葡 糖苷通过催化甘油与 蔗糖反应生成， 甘油葡糖苷粗产品中存在大量甘 油、 果糖杂质甘油的化学性质接近， 树脂色谱， 结 晶等常规手段难以分离， 混合溶剂萃取与膜过滤 虽然可以实现分离纯化， 但是成本高， 污染大。 本 发明将待提纯的甘油葡糖苷粗产品配置成发酵 培养基， 利用谷氨酸棒状杆菌在发酵培养基中发 酵培养， 提纯获得高纯度甘油葡糖苷。 利用谷氨 酸棒状杆菌的特性， 以甘油与果糖作为碳源， 能 够转化为羟脯氨酸等脯氨酸、 氨基酸， 而甘油葡 糖苷无法被其消耗分解， 从而实现了甘油葡糖苷 粗产品的分离提纯， 提高甘油葡糖苷纯度， 能够 达到90%以上 纯度， 提纯过程环保、 提升产值。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115074293 A 2022.09.20 CN 115074293 A 1.一种甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 待提纯的甘油葡糖苷粗产品配置成发酵培 养基， 利用谷氨酸 棒状杆菌在发酵培 养基中发酵培 养， 提纯获得高纯度甘油葡糖苷。 2.根据权利要求1所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的谷氨酸棒状杆菌为 高产羟脯氨酸的谷氨酸 棒杆菌。 3.根据权利要求1所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的发酵培养基包括酵 母提取物  6.0 g/L， 蛋白胨  4.0 g/L， Na2HPO4·12H2O 25.0 g/L， KH2PO4 6.0 g/L， 柠檬酸   2.0 g/L， MgSO4·7H2O 1.0 g/L， 甘油葡糖苷粗产品10 0ml/L， 调节pH 至7.0。 4.根据权利要求1所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的发酵培养采用50L 发酵罐发酵工艺， 以种后体积25  L计， 菌种液200~300ml， 控制罐温30~35℃、 流加氨水控制 pH 6.5~7.0、 DO 10~15%条件下培养， 溶氧回升后流加发酵培养基， 控制流加速度20~500ml/ h周期50~70h； 发酵至羟脯氨酸大于60g/L后停止补料， 继续发酵至甘油、 果糖的含量均小于0.4g/L， 停止发酵。 5.根据权利要求1所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 包括以下步骤： 接种培养、 发酵、 发酵 液澄清除盐、 树脂吸附。 6.根据权利要求5所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的接种培养为斜面培 养， 斜面培养培养基包括酵母提取物5.0  g/L， 蛋白胨10.0  g/L， NaCl  10.0 g/L， 琼脂粉 20.0 g/L， 采用划线接种， 培 养温度35~39℃， 培养10~14h。 7.根据权利要求6所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的斜面培养后经过种 子培养， 种子培养培养基包括酵母提取物  10.0 g/L， 蛋白胨  5.0 g/L， KH2PO4 2.0 g/L， 柠 檬酸 2.0 g/L， NaCl  1.0 g/L， MgSO4·7H2O 1.0 g/L， 葡萄糖  25.0 g/L， pH为7.0， 培养温度 35~39℃， 200~250 rpm/min培养5~9h， 获得菌种 种子液。 8.根据权利要求5所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的发酵液澄清除盐采 用50nm陶瓷膜过 滤澄清， 过 滤所得清液采用电渗析脱盐， 控制pH 6~6.5。 9.根据权利要求5所述的甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征在于： 所述的树脂吸附包括以下 步骤： 除盐后溶液pH调至1.8~2.2， 加入阳离子交换树脂， 以0.8~1.2BV/h流速，  1.8~2.2BV 酸水洗涤， 1.8~2.2BV去离子水洗涤， 0.8~1.2M氨水洗脱， 洗脱速率0.8~1.2BV/h， 洗脱液减 压浓缩除氨水， 继续浓缩至密度1.13~1.15g/cm3， 加入3.5~4.5BV乙醇结晶， 晶体干燥后获 得甘油葡糖苷产品。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074293 A 2一种甘油葡糖苷 提纯工艺 技术领域 [0001]一种甘油葡糖苷提纯工艺， 属于甘油葡糖苷提纯 方法技术领域。 背景技术 [0002]甘油葡萄糖苷是由一分子甘油及一分子葡萄糖通过糖苷键连接而形成的糖苷类 化合物， 甘油葡萄糖苷拥有优异的保湿能力， 同时拥有良好的皮肤渗透性， 能有效减少水分 流失。 [0003]甘油葡糖苷通过催化甘油与蔗糖反应生成， 中国发明专利CN  110734899  A公开了 一种制备获得甘油 葡糖苷的方法， 其主要原理是利用 蔗糖磷酸化酶， 催化转化甘油与蔗糖 获得甘油 葡糖苷， 为促使反应进行， 甘油需要过量添加， 并且反应会生成副产物果糖， 因此 获得的产品——甘油葡糖苷粗产品中， 存在大量甘油、 果糖杂质甘油的化学性质接近， 树脂 色谱， 结晶等常规手段难以分离， 混合溶剂萃取与膜过滤虽然 可以实现分离纯化， 但是成本 高， 污染大。 此外， 甘油、 果糖被浪费， 增加环保负 担， 甘油和果糖是发酵优质碳源， 分离后的 甘油果糖难以重复使用， 只能进污水系统， 增加环保系统负担， 有酵母发酵的方法分解甘油 果糖， 提高甘油葡糖苷纯度， 但造成甘油和果糖的浪费。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题是： 克服现有技术的不足， 提供一种高效、 充 分处理甘 油葡糖苷粗产品中甘油、 果糖， 提高废物利用率， 保护环境， 节约原料的甘油 葡糖苷提纯工 艺。 [0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 一种甘油葡糖苷提纯工艺， 其特征 在于： 待提纯 的甘油葡糖苷粗产品配置成发酵培养基， 利用谷氨酸棒状杆菌在发酵培养基 中发酵培 养， 提纯获得高纯度甘油葡糖苷。 [0006]利用谷氨酸棒状杆菌 的特性， 该菌种的发酵以甘油与果糖作为碳源， 能够转化为 羟脯氨酸等脯氨酸、 氨基酸、 有机酸、 二氧化碳等易于分离的产物， 而甘油葡糖苷无法被其 消耗分解， 从而实现了甘油葡糖苷粗产品的分离提纯， 提高甘油葡糖苷纯度， 能够达到90% 以上纯度； 尤其其中能够转化 获得副产 物羟脯氨 酸， 羟脯氨 酸是抗病毒 药物、 血液症治疗药 物等医学领域中必需的成分， 具有较高的价值， 因此在提纯甘油葡糖苷的同时， 将废品、 碳 源转化为了高价值副产品， 既提高了产品质量， 又避免了高COD难处理废水产生， 还充分利 用资源转 化价值， 一举多得。 [0007]优选的， 所述的谷氨酸 棒状杆菌为高产羟 脯氨酸的谷氨酸 棒杆菌。 [0008]包括中国专利CN202011316277.7、  CN201710385500.5中提及的经过改造重建的 菌株或美国Microbi ologics公司生产的ATC C13807标准号的菌株。 [0009]优选菌种产生目标的氨基酸、 羟脯氨酸浓度更高， 更有利于提纯甘油葡糖苷， 同时 能够产生更多的有价 值副产物。 [0010]优选的， 所述的发酵培养基包括酵母提取物  6.0~8.0g/L， 蛋白胨4.0~6.0g/L，说　明　书 1/5 页 3 CN 115074293 A 3