(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210733329.3 (22)申请日 2022.06.27 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.6554 2012.09.1 1 (71)申请人 宁波大学 地址 315211 浙江省宁波市江北区风 华路 818号 (72)发明人 何山　丁立建　林思晓　石煜彤　 王潇　 (74)专利代理 机构 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 专利代理师 何仲 (51)Int.Cl. C07K 5/12(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12P 21/02(2006.01) C07K 1/14(2006.01) C07K 1/16(2006.01) C07K 1/20(2006.01) C07K 1/36(2006.01) A61K 38/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种环脂肽类化 合物及其制备方法和用途 (57)摘要 本发明公开了一种环脂肽类化合物及其制 备方法和用途， 特点是该环脂肽类化合物的结构 式如Ⅰ所示， 其制备方法步骤包括将保藏号为 CGMCC No.6554的芽孢杆菌通过微生物发酵培养 来获取环脂肽类化合物的发酵物， 然后将发酵物 用乙酸乙酯浸泡提取得粗浸膏， 经减压柱层析， 正相中压柱层析、 反相中压柱层析和反相半制备 高效液相色谱分离纯化得到， 优点是该环脂肽类 具有抗耐甲氧西林金葡菌、 金黄色葡萄球菌、 溶 藻弧菌和溶血弧菌的作用， 可用于抑制由多种致 病菌引起的相关病害及感染的先导药物的开发 和利用。 权利要求书2页 说明书6页 CN 115490753 A 2022.12.20 CN 115490753 A 1.一种环脂肽类化 合物， 其特 征在于该环脂肽类化 合物的结构式如 （I） 所示； （I） 。 2.一种权利要求1所述的环脂肽类化 合物的制备 方法， 其特 征在于包括如下步骤： （1） 发酵生产 将保藏号为CGMCC  No.6554的解淀粉芽孢杆菌在含高氏一号的培养皿上进行活化， 于 28 ℃恒温培养7天后， 接种 到A液体培养基中， 旋转摇床28℃， 150  rpm/min的转速下培养3 天， 得到种子液， 将种子液按体积比10  %的接种量接种到预先灭菌好的YSP培养基中， 放置 于摇床上28℃、 15 0rpm培养7天， 最终 获得发酵物； （2） 浸膏提取 在步骤 （1） 得到的发酵物中加入与发酵物等体积的乙酸乙酯， 反复萃取3次后， 将乙酸 乙酯浸提液经减压蒸发后， 加入与发酵物等体积的由乙酸乙酯和水等体积混合的混合液重 复萃取3次， 合并三次萃取 所得乙酸乙酯萃取 液在减压浓 缩蒸发后， 获得粗浸膏； （3） 化合物的分离制备 将步骤 （2） 得到的粗浸膏用甲醇溶剂溶解后， 经过减压柱色谱VLC进行初步的分离， 以 体积比20:1， 5:1， 1:1， 1:2， 0:1 的石油醚/乙酸乙酯进行梯度洗脱， 按极性从大到小排列按 序合并相似组分， 得到了5个组分； 将收集的第3个组分进 行正相中压 色谱层析， 以体积比1: 0， 4:1， 3:2， 1:1， 3:7， 1:4， 0:1的石油醚/乙酸乙酯进行梯度洗脱， 按极性从大到小 排列按序 合并相似组分， 得到了4个组分； 将收集的第3个组分进 行反相中压柱层析分离， 采用的洗脱 剂为甲醇和水， 甲醇体积百分数为30% ‑100%， 洗脱时间120  min， 共收集50管； 取第28管进行 半制备反相高效液相色谱分离， 采用乙腈与水按体积比65:35的比例混合而成的混合液为 洗脱剂， 分离纯化得到环脂肽类化 合物， 其结构如 （I） 所示：  （I） 。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115490753 A 23.根据权利要求2所述的一种环脂肽类化合物的制备方法， 其特征在于步骤 （1） 中所述 的A液体培养基的配制方法如下： 将淀粉20  g， 蛋白胨2g， 酵母粗提物6g， CaCO3 1 g， KBr  100 mg， Fe2(SO4)3•4H20 40mg溶于1L  海水中配制而成。 4.根据权利要求2所述的一种环脂肽类化合物的制备方法， 其特征在于所述的YSP培养 基的配制方法如下： 将10  g蛋白胨， 5  g酵母浸粉， 20  g蔗糖和35  g海盐溶于1000  ml蒸馏水 中配制而成。 5.根据权利要求2所述的一种环脂肽类化合物的制备方法， 其特征在于步骤 （3） 中所述 的反相中压柱层析中梯度洗脱剂为甲醇和水， 甲醇体积百分数从30 ‑60%， 洗脱时间0 ‑45  min； 甲醇体积百分数从83% ‑100%， 洗脱时间为 46‑120 min。 6.根据权利要求2所述的一种环脂肽类化合物 的制备方法， 其特征在于： 步骤 （3） 中所 述的半制备反相高效液相色谱的化 合物分离制备的流速为  2.0 mL/min。 7.一种权利要求1 ‑6中任一项所述的环脂肽类化合物在制备抑制耐甲氧西林金葡菌药 物、 抑制金黄色葡萄球菌药物、 抑制溶藻弧菌药物和抑制溶 血弧菌药物中至少一种的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115490753 A 3