(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211134581.9 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 河南省科 学院生物研究所有限责任 公司 地址 450003 河南省郑州市花园路28号 (72)发明人 张宗源　张英涛　岳丹丹　陈盈方　 周留柱　李冠杰　徐宏光　郭文阳　 亓兰达　潘梦诗　王雪妍　 (74)专利代理 机构 郑州天阳专利事务所(普通 合伙) 41113 专利代理师 聂孟民 (51)Int.Cl. A23K 50/30(2016.01) A23K 10/18(2016.01) A23K 20/189(2016.01)A23K 20/163(2016.01) A23K 20/142(2016.01) A23K 20/105(2016.01) A23K 10/12(2016.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01) C12R 1/25(2006.01) C12R 1/10(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/145(2006.01) C12R 1/865(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种猪用液态菌酶协同饲料添加剂的制备 方法及其应用 (57)摘要 本发明涉及猪用液态菌酶协同饲料添加剂 的制备方法及其应用， 可有效解决制备液态菌酶 协同饲料添加剂， 实现在猪饲料中的应用问题， 该添加剂 的制备方法是， 以无菌水为载体， 加入 添加剂质量20～50% 的菌保护剂， 再加入添加剂 质量0.1～0.3%的酶保护剂， 加入添加剂质量 0.05～0.25%的稳定剂， 制成添加剂基础液； 然后 加入有益菌， 使有益菌浓度≥4 ×108CFU/mL， 最 后加入活性酶， 使饲料添加剂中活性酶的活力为 80～1800U/L， 用磷 酸盐缓冲液调pH5 ‑6， 即成。 本 发明原料丰富， 制备方法简单， 成本低， 使用效果 好， 开拓了猪饲料添加剂制备的新途径， 有效用 作猪饲料的添加剂， 显著提高生猪的采食量和日 增重， 降低肉料比， 提高饲料利用率， 促进育 肥猪 的生长。 权利要求书3页 说明书7页 CN 115462460 A 2022.12.13 CN 115462460 A 1.一种猪用液态菌酶协同饲料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添加剂是由有益菌、 活性酶、 酶保护剂、 菌保护剂、 稳定剂和无菌水混合均匀制成， 包括以下步骤： （1） 、 制备种子液： 将有益菌接种到种子液培养基中， 34～37℃培养18～24h复壮， 制备成有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的种子液； 所述的有益菌为植物乳杆菌、 乳酸片球菌、 粪肠球菌、 地衣芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 凝 结芽孢杆菌、 丁 酸梭状芽孢杆菌、 酿酒酵母中的一种或其任意比的混合物； 所述的种子液培养基为MRS培养基， 是由10g蛋白陈、 5g牛肉粉、 4g酵母粉、 2g葡萄糖、 1mL吐温80、 2g磷酸氢二钾、 5g乙酸钠、 2g柠檬酸三铵、 0.2g硫酸镁、 0.05g硫酸锰和15g琼脂 粉加入10 00mL蒸馏水中， 加热 溶解， 调节pH 6， 121℃高压灭菌15～ 20分钟制成； （2） 、 制备发酵 液： 将种子液接种于优化的发酵培养基中， 接种量均 为发酵培养基体积的2～5%， 34～37℃ 培养16～24h， 发酵 液中的残糖为0～3g/L， 有益菌的活菌数≥2.4 ×109/mL； 所述的优化后的发酵培养基是由重量百分比的： 红糖或糖蜜2～5%、 酵母浸粉1～ 1.8%、 磷酸氢二钾0.18～0.25%、 硫酸镁0.001～0.003%和吐温 ‑80 0.08～0.1%， 加无菌水至100% 制成； （3） 、 制备活性酶： 所述的活性酶为纤维素酶、 木聚糖酶、 β ‑葡聚糖酶、 植酸酶、 果胶酶、 β ‑甘露聚糖酶、 α ‑ 半乳糖苷酶中的一种或两种以上的混合物， 分别加无菌水制成800～1000U/L的纤维素酶、 1500～1800U/L的木聚糖酶、 500～800U/L的β ‑葡聚糖酶、 500～800U/L的植酸酶、 800～ 1500U/L的果胶酶、 40 0～1000U/L的β‑甘露聚糖酶、 80～ 200U/L的α‑半乳糖苷酶； （4） 、 混配制成猪用液态菌酶协同饲料 添加剂： 将有益菌、 活性酶、 酶保护剂、 菌保护剂和稳定剂加入无菌水， 混配均匀， 制成猪用液态 菌酶协同饲料 添加剂， 方法是： 首先以无菌水为载体， 加入饲料添加剂质量20～50%的菌保护剂， 再加入饲料添加剂质 量0.1～0.3%的酶保护剂， 加 入饲料添加剂质量0.05～0.25%的稳定剂， 制成饲料添加剂基 础液； 再加入有益菌， 使有益菌浓度≥4 ×108CFU/mL， 然后加入活性酶， 使饲料添加剂中活 性酶的活力为80～180 0U/L， 用磷酸盐缓冲液调pH 5‑6， 即成猪用液态菌酶协同饲料 添加剂； 所述的酶保护剂为EDTA； 所述的菌保护剂为甘油、 海藻糖、 壳聚糖、 低聚果糖、 低聚异麦芽糖或其任意比的混合 物； 所述的稳定剂为海藻酸钠、 黄原胶、 瓜尔胶、 卡拉胶或其任意比的混合物。 2.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添 加剂是由无菌水作载体， 加入添加剂总重量： 20%甘油、 0.2%海藻酸钠、 0.05%黄原胶、 0.2%   EDTA混合在一起， 加入有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的植物乳杆菌、 乳酸片球菌和粪肠球菌 种子液， 使活菌数达到4 ×108CFU/mL， 再加入纤维素酶900U/L、 植酸酶650U/L、 β ‑葡聚糖酶 700U/L、 木聚糖酶1600U/L， 添加无菌水至100%， 混匀， 用磷酸盐缓冲液调pH5.5， 即成猪用液 态菌酶协同饲料 添加剂。 3.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115462460 A 2加剂是由无菌水作载体， 加入添加剂总 重量： 20%甘油、 30%海藻糖、 0.1%海藻酸钠、 0.05%黄 原胶、 0.1%  EDTA混合在一起， 加入有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的植物乳杆菌、 乳酸片球菌 和粪肠球菌种子液， 使活菌数达到4 ×108CFU/mL， 再加入β ‑甘露聚糖酶700U/L、 果胶酶 1100U/L、 α ‑半乳糖苷酶140U/L， 添加无菌水至100%， 混匀， 用磷酸盐缓冲液调pH6.0， 制成猪 用液态菌酶协同饲料 添加剂。 4.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添 加剂是由无菌水作载体， 加入添加剂总 重量： 50%甘油、 0.1%海藻酸钠、 0.0.3%  EDTA混合在 一起， 加入有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的植物乳杆菌、 乳酸片球菌和粪肠球菌种子液， 使活 菌数达到4 ×108CFU/mL， 再加入木聚糖酶1800U/L、 α ‑半乳糖苷酶100U/L、 β ‑甘露聚糖酶 500U/L、 植酸 酶750 U/L， 添加无菌水至100%， 混匀， 用磷酸盐缓冲液调pH5.0， 制成猪用液态 菌酶协同饲料 添加剂。 5.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添 加剂是由无菌水作载体， 加入 添加剂总重量： 20%海藻糖、 0.2%海藻酸钠、 0.1%黄原胶、 0.15%   EDTA混合在一起， 加入有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的植物乳杆菌、 乳酸片球菌和粪肠球菌 种子液， 使活菌数达到4 ×108CFU/mL， 再加入纤维素酶1000U/L、 β ‑葡聚糖酶600U/L、 果胶酶 1400U/L， 添加无菌水至100%， 混匀， 用磷酸盐缓冲液调pH5.5， 制成猪用液态菌酶协同饲料 添加剂。 6.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添 加剂是由无菌水作载体， 加入添加剂总 重量： 30%甘油、 20%海藻糖、 0.1%海藻酸钠、 0.05%黄 原胶、 0.15%  EDTA混合在一起， 加入有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的植物乳杆菌、 乳酸片球菌 和粪肠球菌种子液， 使活菌数达到4 ×108CFU/mL， 再加入纤维素酶900U/L、 植酸酶650U/L、 β‑葡聚糖酶700U/L、 木聚糖酶1600U/L， 添加无菌水至100%， 混匀， 用磷酸盐缓冲液调pH5.0， 制成猪用液态菌酶协同饲料 添加剂。 7.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法， 其特征在于， 该添 加剂是由无菌水作载体， 加入 添加剂总重量： 50%海藻糖、 0.2%海藻酸钠、 0.1%黄原胶、 0.15%   EDTA混合在一起， 加入有效活菌数≥1 ×108CFU/mL的植物乳杆菌、 乳酸片球菌和粪肠球菌 种子液， 使活菌数达到4 ×108CFU/mL， 再加入纤维素酶900U/L、 植酸酶650U/L、 β ‑葡聚糖酶 700U/L、 木聚糖酶1600U/L， 添加无菌水至100%， 混匀， 用磷酸盐缓冲液调pH6.0， 制成猪用液 态菌酶协同饲料 添加剂。 8.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲 料添加剂的制备方法