(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210769278.X (22)申请日 2022.07.01 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 202 2821 202 2.06.07 CCTCC NO： M 202 2820 202 2.06.07 (71)申请人 中国烟草总公司四川省公司 地址 610041 四川省成 都市高新区世纪城 路936号1栋1单 元 申请人 西南大学 (72)发明人 丁伟　龚杰　余佳敏　江其朋　 余祥文　董晏伶　陈芷莹　林正全　 李峰　 (74)专利代理 机构 北京中政联科专利代理事务 所(普通合伙) 11489 专利代理师 曲晶晶(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/27(2020.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) A01C 1/08(2006.01) A01G 7/06(2006.01) A01G 22/45(2018.01) C12R 1/38(2006.01) (54)发明名称 一种烟草种子内生拮抗菌及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种烟草种子内生拮抗菌DW15， 保藏编号： CCTCC  NO： M 2022820， 分类命名为副 黄假单胞菌Pseu domonas parafulva， 保藏于中 国典型培养物保藏中心。 该菌株呈黄色圆形， 表 面湿润光滑， 微隆起。 本发明筛选的种子内生菌 DW15对青枯雷尔氏菌的抑菌作用强， 是对烟草青 枯病具有良好效果的生防细菌， 能产生较多的蛋 白酶， 以及较强的解磷和固氮能力。 同时对烟草 植株具有良好的促生效果， 能显著提高烟苗生物 量， 可单用或复配使用， 对烟草青枯病生物防治 具有广阔的应用前景， 对保护生态环 境也有重要 意义。 权利要求书1页 说明书14页 附图7页 CN 114934001 A 2022.08.23 CN 114934001 A 1.一种烟草种子内生拮抗菌， 其特征在于， 所述烟草种子内生拮抗菌为DW15， 分类命 名： 副黄假单胞菌Pseudomonas  parafulv a， 保藏于中国典型培养物保藏中心， 地址： 武汉， 保藏日期： 202 2年6月7日， 保藏编号： C CTCC NO： M 2022820。 2.根据权利要求1所述的烟草种子 内生拮抗菌， 其特征在于， 烟草种子 内生拮抗菌的菌 株呈黄色圆形， 表面湿润光滑， 微隆起。 3.根据权利要求1所述的烟草种子内生拮抗菌， 其特 征在于， 菌株能产生蛋白酶。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的烟草种子内生拮抗菌作为生物菌剂用于抑制和/或防治 青枯病中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 生物菌剂中烟草种子内生拮抗菌的使用浓 度为1×106cfu/mL‑1×1012cfu/mL。 6.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述生物菌剂的制备方法为： 将烟草种子 内生拮抗菌DW15菌株活化后， 挑取单菌落接种至LB液体培养基， 30℃、 180r/min培养至对 数 期， 使用无菌水稀释至1 ×106cfu/mL‑1×1012cfu/mL对植株进行灌根处 理。 7.权利要求1 ‑3任一项所述的烟草种子 内生拮抗菌作为生物菌剂用于促进烟株植株生 长中的应用。 8.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 生物菌剂中烟草种子内生拮抗菌的使用浓 度为1×106cfu/mL‑1×1012cfu/mL。 9.一种生物菌剂， 其特征在于， 包含权利要求1 ‑3任一项所述的烟草种子 内生拮抗菌菌 株。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114934001 A 2一种烟草种子 内生拮抗菌及其应用 技术领域 [0001]本发明属于农业 微生物防治技 术领域， 涉及一种烟草种子内生拮抗菌及其应用。 背景技术 [0002]青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia  solanacearum)引起的一种毁灭性的土传 病害， 其病原菌 极具破坏性， 可侵染超过200种植物， 造成巨大的经济损失， 诸如 使番茄减产 0‑91％， 马铃薯减产33 ‑90％， 烟草减产10 ‑30％， 香蕉减产80 ‑100％， 花生减产20％等。 烟草 青枯病(Tobacco  bacterial  wilt)是当前烟草生产中危害严重、 防控困难的一种土传病 害。 烟草青枯病在中 国西南烟区为害广泛， 并有向高海拔冷凉地区迁移的趋势， 是实际生产 中亟待解决的植物病害。 在我国， 由于长期以来烟草连作、 施肥和管理方式不当等因素， 烟 草连作障碍严重、 烟草青枯病大面积爆发， 严重降低各 大烟区烟叶的产质量。 [0003]烟草青枯病防治面临着极大挑战。 对于烟草青枯病的防治， 目前主要有选育抗性 品种、 生物防治、 化学防治等措施。 由于化学防治存在危害人类健康和破坏生态平衡等问 题， 而生物防治具有对人畜安全、 环境友好等优点， 因此， 近年来对土传病害烟草青枯病的 生物防治越来越受到 重视， 用于防治烟草青枯病的生防细菌的研究较为广泛。 [0004]目前， 对烟草青枯病的防治研究主要集中在诱抗化合物对烟草青枯病的防治效果 和机制、 青枯病与根际微生物的互作等方面， 对植物内生菌与烟草青枯病互作关系的相关 研究较少 。 植物与内生菌协同进化， 根据内生菌的作用， 将其分为三类： 一是中性内生微生 物， 该类微生物对植物没有明显的有害或者有益作用； 二是有益内生微生物， 能够发挥保护 植物免受病原体或食草生物的侵害、 促进植物生长等有益作用； 三是潜在病原内生微生物， 产生不利于植物生长的物质。 所以找到对烟草 植株有益内生 微生物是亟需解决的问题。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一株具有促生作用等多性能的烟草种子内生拮 抗菌， 还提供其可在 农业产业 化上的各种应用。 [0006]为达到上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0007]1.烟草种子内生拮抗菌， 其特征在于， 所述烟草种子内生拮抗菌为DW15， 分类命 名： 副黄假单胞菌Pseudomonas  parafulv a， 保藏于中国典型培养物保藏中心， 地址： 武汉， 保藏日期： 202 2年6月7日， 保藏编号： C CTCC NO： M 2022820。 [0008]进一步， 烟草种子内生拮抗菌的菌株呈黄色圆形， 表面湿润光滑， 微隆起。 [0009]进一步， 烟草种子内生拮抗菌的菌株能产生蛋白酶。 [0010]2、 上述任一项所述烟草种子内生拮抗菌作为生物菌剂用于抑制和/或防治青枯病 中的应用。 [0011]进一步， 具有烟草种子内生拮抗菌作为生物菌剂用于抑制和/或防治青枯病中的 应用中， 生物菌剂中烟草种子内生拮抗菌的使用浓度为1 ×106cfu/mL‑1×1012cfu/mL。 [0012]进一步， 具有烟草种子内生拮抗菌作为生物菌剂用于抑制和/或防治青枯病中的说　明　书 1/14 页 3 CN 114934001 A 3