(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210717653.6 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 柴天领 地址 477193 河南省周口市郸城县汲冢镇 柴堂行政村 柴堂村001号 (72)发明人 柴天领　 (74)专利代理 机构 北京盛凡佳华专利代理事务 所(普通合伙) 11947 专利代理师 张晓东 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种治疗作物枯黄 萎病的微 生物菌剂 (57)摘要 本发明公开了一种治疗作物枯黄萎病的微 生物菌剂， 包含两种细菌成分： 短小芽孢杆菌和 枯草芽孢杆菌， 将短小芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌 分别制得菌体保藏液A、 菌体保藏液B， 然后将菌 体保藏液A和菌体保藏液B分别培养， 最后混合呈 微生物菌剂， 微生物菌剂中活菌总浓度为1 ×10 ～10CFU/ml。 本发明是专 门针对棉花枯、 黄萎病 病害开发的微生物菌剂。 由于是生物制剂， 完全 没有因化学农药的使用所带来的一系列问题， 因 而有利于棉花的无公害生产， 农民可以不用或减 少其他化学农药的用量， 这不仅可为农民节省开 支， 而且有利于棉花的出口贸易。 权利要求书1页 说明书3页 CN 115093997 A 2022.09.23 CN 115093997 A 1.一种治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂， 其特征在于， 包含两种细菌成分： 短小芽孢杆 菌和枯草芽孢杆菌， 将短小芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌 分别制得菌体保藏液A、 菌体保藏液B， 然后将菌体保藏液A和菌体保藏液B分别培养， 最后混合呈微生物菌剂， 微生物菌剂中活菌 总浓度为1 ×10～10CFU/ml。 2.根据权利要求1所述的一种 治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂， 其特征在于， 所述短小 芽孢杆菌CS23(Bacillus  pumilus)， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心， 菌种保藏 号为CGMCC NO.4735。 3.根据权利要求2所述的一种 治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂， 其特征在于， 所述枯草 芽孢杆菌SM16(Bacillus  subtilis)， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心， 菌种保藏 号为CGMCC NO.3127。 4.根据权利要求1所述的一种 治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂， 其特征在于， 所述短小 芽孢杆菌CS23菌体保藏液的制备： pH6.8， 0.03mol/L的磷酸盐缓冲液中加入Tween20， 至 Tween20在缓冲液中的终浓度为0.02mo l/L， 即得菌体保藏液A。 5.根据权利要求4所述的一种 治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂， 其特征在于， 所述枯草 芽孢杆菌SM16菌体保藏液的制备： pH7.0， 0.15mol/L的Tris缓冲液中加入聚氧乙基脂肪酸 酯， 至聚氧乙基脂肪酸酯在缓冲液中的终浓度为0.01mo l/L， 即得菌体保藏液B。 6.根据权利要求1所述的一种治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂的使用方法： 将已用少 量水溶解的抗菌剂、 杀虫剂和微生物菌剂加入含有10克羧甲基纤维素钠的溶液中， 加水至 体积为1L， 充分搅拌均匀， 用喷雾器均匀喷雾在30 ‑50公斤脱绒棉种表面， 晾干后避光放置 至少3天， 然后常规 播种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115093997 A 2一种治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂 技术领域 [0001]本发明涉及棉花预防治疗技术领域， 具体是指一种治疗作物枯黄萎病的微生物菌 剂。 背景技术 [0002]棉花属于锦葵科木槿亚科棉， 其耐干旱， 喜光， 喜热。 其花朵乳白色， 开花后不久转 成深红色然后凋谢， 留下绿色小型的蒴果， 称为棉铃。 棉铃内有棉籽， 棉籽上 的茸毛从棉籽 表皮长出， 塞满棉铃内部， 棉铃成熟时裂开， 露出柔软的纤维。 棉花可分成3大类： 第一类纤 维细长(长度在2.5 ‑6.5公分(1 ‑2.5寸)范围内)、 有光泽、 包括品质极佳的海岛棉、 埃及棉和 匹马棉等。 长绒棉产量低， 费工多， 价格昂贵， 主要用于高级纱布和针织品； 第二类包括一般 的中等长度的棉花， 例如美国陆地棉， 长度约1.3 ‑3.3公分(0.5 ‑1.3寸)； 第三类为纤维粗短 的棉花， 长度约1 ‑2.5公分(0.375 ‑1寸)， 用来制造棉毯和价格低廉的织物， 或与其他纤维混 纺。 [0003]棉花枯、 黄萎病是十分难以防治的棉花的严重病害之一， 每年给棉花生产造成巨 大经济损失， 尤其是转基因的抗虫棉， 发病率很高。 由于枯黄萎病菌侵害棉花植株的维管 束， 一般药剂无法进入维管束 杀灭病菌， 目前防治棉花黄萎病、 枯萎病的主要方法是培育抗 病品种、 使用化学药剂和农业措施、 转基因技术等， 但防治效果 都不理想或者存在潜在的危 险。 抗病品种往往较难获得， 且黄萎病、 枯萎病致病力变异大， 抗性极易丧 失。 化学防治在棉 花病害防治中发挥重要的作用， 但受到四个因素限制： 目前高效低毒的杀菌剂农药品种较 少； 环境条件对防治效果影响很大， 在环境条件适宜病原菌侵入和传播时， 防治效果不令人 满意； 容易造成环境污染； 长期使用化学农药， 病菌的抗药性增强， 导致使用频率和用量逐 年增加， 形成了恶性循环。 因此， 提供一种治疗作物枯黄萎病的微生物菌剂， 有利于棉花的 无公害生产， 农民可以不用或减少其他化学农药的用量， 这不仅可为农民节省开支， 而且有 利于棉花的出口贸易。 发明内容 [0004]本发明要解决的技术问题就是克服以上的技术缺陷， 提供一种治疗作物枯黄萎病 的微生物菌剂。 [0005]为解决上述技术问题， 本发明提供的技术方案为： 一种治疗作物枯黄萎病的微生 物菌剂， 包含两种细菌成分： 短小芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌， 将短小芽孢杆菌和枯草芽孢杆 菌分别制得菌体保藏液A、 菌体保藏液B， 然后将 菌体保藏液A和菌体保藏液B分别培养， 最后 混合呈微 生物菌剂， 微 生物菌剂中活菌总浓度为1 ×10～10CFU/ml。 [0006]进一步的， 所述短小芽孢杆菌CS23(Bacillus  pumilus)， 保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会 普通微生物中心， 菌种保藏 号为CGMCC NO.4735。 [0007]进一步的， 所述枯草芽孢杆菌S M16(Bacillus  subtilis)， 保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会 普通微生物中心， 菌种保藏 号为CGMCC NO.3127。说　明　书 1/3 页 3 CN 115093997 A 3