(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210734463.5 (22)申请日 2022.06.27 (71)申请人 陈华友 地址 212013 江苏省镇江市京口区学府路 301号 (72)发明人 陈华友　蔡康涛　吴正粉　卢晨曦　 姚丹　陈华撑　 (74)专利代理 机构 南京智造力知识产权代理有 限公司 32382 专利代理师 李侨飞 (51)Int.Cl. A23K 50/80(2016.01) A23K 10/12(2016.01) A23K 10/37(2016.01) A23K 20/163(2016.01)A23K 50/00(2016.01) A23K 10/30(2016.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01) C12R 1/72(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种水质改良型发酵饲料的生产方法及在 水产养殖中的应用 (57)摘要 本发明属于生物饲料领域， 涉及一种水质改 良型发酵饲料生产方法及在水产养殖中的应用； 步骤为： 筛选发酵菌种中无机氮 转化能力较好的 产朊假丝酵母， 协 同乳双歧杆菌、 植物乳杆菌和 枯草芽孢杆菌活化得到发酵种子液， 接种到厌 氧 发酵培基中进行发酵， 发酵后得到饲料成品； 并 利用PMA‑qPCR方法检测 发酵饲料中产朊假丝酵 母活菌的数量； 可进一步添加α ‑淀粉和黄原胶 后作为粘合剂， 用于水产养殖时提升饲料在水中 的稳定性。 本发明饲料的使用可以有效净化水 质、 高效转化无机氮， 显著提高水产养殖效益； 此 外， 还可加入碳源控制碳氮比为10 ‑20， 能更好更 快的转化水体中的无机氮、 优化水体菌群结构、 抑制病害杂菌， 提高动物生产性能、 改善免疫指 标。 权利要求书1页 说明书15页 附图14页 CN 115191523 A 2022.10.18 CN 115191523 A 1.一种水质改良型发酵饲料的生产方法， 其特 征在于， 制备步骤如下： (1)将枯草芽孢杆菌、 产朊假丝酵母菌、 植物乳酸菌和乳双歧杆菌分别接种到相应的液 体培养基中进行活化培 养， 经培养后得到各菌种的发酵种子液； (2)将步骤(1)得到的种子液分别接种到厌氧发酵培养基中， 混合均匀， 得到厌氧发酵 混合物； 所述厌氧发酵培养基的各 组分重量百分含量分别为： 豆粕40％～55％、 豆渣35％～ 40％； 次粉8％～10％； 调整发酵温度 为20～35℃， 培养基含水量为38～55 ％， 在密封条件下进行厌氧发酵， 厌 氧发酵4～3 0天后获得成品， 得到产朊假丝酵母发酵饲料， 即为水质改良型发酵饲料。 2.根据权利要求1所述的一种水质改良型发酵饲料的生产方法， 其特征在于， 步骤(2) 中所述产朊假丝酵母种子液的接种 量与厌氧发酵培养基重量比为2～4mL： 100g； 所述产朊 假丝酵母种子液的活菌总数为1.3 ×107～2.7×108cfu/mL。 3.根据权利要求1所述的一种水质改良型发酵饲料的生产方法， 其特征在于， 步骤(2) 中所述枯草芽孢杆菌种子液的接种 量与厌氧发酵培养基重量的比为1～3mL： 100g； 所述枯 草芽孢杆菌种子液的活菌总数为1.0 ×108～2.1×109cfu/mL。 4.根据权利要求1所述的一种水质改良型发酵饲料的生产方法， 其特征在于， 步骤(2) 中所述乳酸菌种子液包括乳双歧杆菌种子液和植物乳杆菌种子液的一种或多种； 乳双歧杆 菌种子液的接种 量与厌氧发酵培养基重量的比为4～6mL： 100g， 所述乳双歧杆菌种子液的 活菌总数为2.5 ×108～5.3×109cfu/mL； 植物乳杆菌种子液的接种量与厌氧发酵培养基重 量的比为2 ～4mL： 10 0g， 所述植物乳杆菌种子液的活菌总数为1.1 ×108～3.7×109cfu/mL。 5.根据权利要求1所述的一种水质改良型发酵饲料的生产方法， 其特征在于， 步骤(2) 中所述发酵的温度为25～32℃， 时间为5～15天； 所述调整培 养基的含水量 为40％～50％。 6.根据权利要求1～5任一项所述的方法制备的水质改良型发酵饲料用于添加到水产 养殖饲料中进行 水产养殖的用途。 7.根据权利要求6所述的用途， 其特征在于， 具体操作是： 将产朊假丝酵母发酵饲料添 加到水产养殖饲料中得到混合饲料进 行喂养； 所述产朊假丝酵母发酵饲料的添加量占混合 饲料的重量为25％～50％， 同时添加占混合饲料重量0.2～0.6％的黄原胶和/或2.5％～ 5％的α‑淀粉。 8.根据权利要求7所述的用途， 其特征在于， 当产朊假丝酵母发酵饲料的添加量占混合 饲料的重量 为25％时， 添加0.2％～0.4％的黄原胶。 9.根据权利要求7所述的用途， 其特征在于， 当产朊假丝酵母发酵饲料的添加量占混合 饲料的重量 为50％时， 添加2.5％～5％的α ‑淀粉。 10.根据权利要求7所述的用途， 其特征在于， 所述混合饲 料进行喂养时， 当混合饲 料投 入水体后， 再 投入碳源， 使得碳源与混合饲料整体的碳氮比为 10～20； 所述碳源为葡萄糖或 糖蜜。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115191523 A 2一种水质改良型发酵饲料的生产方 法及在水产养殖中的应用 技术领域 [0001]本发明属于生物饲料领域， 具体涉及一种水质改良型发酵饲料的生产方法及在水 产养殖中的应用。 背景技术 [0002]近年来， 水产养殖存在因饲料投放过量， 饲料利用率低， 养殖动 物排泄导致的水质 差、 饲养效益低等问题。 生物絮团技术被应用于解决水产养殖中无机氮过多和水体频繁换 水问题， 且添加 益生菌也是帮助净化水质， 减少病害菌， 提高动物免疫力的常用手段。 但在 盲目添加碳源改善水质的同时， 水体中杂菌大量生长， 给水产养殖带来一定的风险。 微生物 是水体中重要组成单元， 微生物群落结构的变化影响着生物絮团的功 能。 如何人为定 向控 制菌群结构是水产养殖调控中的关键技术。 投放菌种的方式有菌液直接投放、 菌液混合饲 料饲喂使用、 制备活菌发酵 料使用等， 其中菌液直接投放工作量增 加， 成本也增 加。 [0003]目 前已 有 一 些 研 究 将 产 朊 假 丝 酵 母 应 用于 各 类 饲 料 制 剂 ， 如 专 利 CN202210051444.2中将植物提取物和 含产朊假丝酵母的益生菌菌剂复配进行使用提高动 物免疫力。 CN202011394949.6采用不同中药组合作为发酵原料， 利用含产朊假丝酵母的益 生菌进行发酵制备制剂 。 此两个授权发明专利均未从菌种影响方面阐述选用产朊假丝酵母 及其他菌种 搭配的理由， 且对应用实例中产朊假丝酵母活菌的影响也无准确探究。 尤其像 专利CN202011394949.6中已在步骤3中将产朊假丝酵母培养液与固体基料混合发酵24h， 后 又在45℃下干燥48h， 其活菌数很难保证， 故在后期步骤6中又补充活菌来保证产朊假丝酵 母活菌数， 制作步骤 上比较复杂， 且效果还有待提高。 总体来讲这些文 献所用产朊假丝酵母 不是从水质改良角度去发挥作用； 同时针对水产养殖中对于改善水质的发酵饲料研究也鲜 有报道。 发明内容 [0004]本发明从菌种筛选出发， 通过对益生菌筛选得到高效利用三态无机氮的产朊假丝 酵母， 并发现其活菌能有效抑制嗜水气单胞菌活菌的生长， 以确定产朊假丝酵母为主要发 酵菌种制备发酵饲料， 并保证在发酵过程中产朊假丝酵母一定的活菌含量， 为水质改善提 供基础。 本发明的目的在于提供一种 水质改良型水产发酵饲料的特别制作方法， 既能提高 饲料利用率改善肠道， 特别又能改善水质、 转化氨氮、 控制菌群， 抑制有害菌。 通过筛选高效 转化氨氮的产朊假丝酵母， 搭配乳双歧乳杆菌、 植物乳杆菌、 枯草芽孢杆菌进 行厌氧固态发 酵豆粕、 豆渣和次粉， 控制发酵条件， 从而制备一种富含产朊假丝酵母活菌的发酵饲料， 小 肽含量高， 具有酸香味， 含有产朊假丝酵母活菌菌量高， 适口性好， 饲料利用率高， 生产成本 低， 具有较强的养殖 塘水质改善作用。 [0005]为了实现以上目的， 本发明采用的技 术方案具体如下： [0006](1)将枯草芽孢杆菌、 产朊假丝酵母菌、 植物乳酸菌和乳双歧杆菌分别接种到相应 的液体培 养基中进行活化培 养， 经培养后得到各菌种的发酵种子液；说　明　书 1/15 页 3 CN 115191523 A 3