(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210915588.8 (22)申请日 2022.08.01 (71)申请人 五康生物科技股份有限公司 地址 641000 四川省内江市 市中区文英街 烟草大楼6楼 (72)发明人 韩赛虎　 (74)专利代理 机构 深圳国联专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 44465 专利代理师 晏达峰 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 65/20(2009.01) A01N 63/23(2020.01) A01N 63/22(2020.01) A01N 63/20(2020.01)A01N 25/04(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C09K 17/14(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/245(2006.01) (54)发明名称 一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌 剂及制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种水土保持用枯草芽孢杆 菌复合水凝菌剂及制备方法， 包括如下重量份的 组分： 枯草芽孢杆菌活孢粉剂30 ‑80份、 苏云金芽 孢杆菌活孢粉剂15 ‑40份、 干酪乳杆菌活孢粉剂 15‑40份、 谷类皮壳水解物15 ‑30份、 长效缓释储 菌凝胶组合物40 ‑100份。 本发明属于复合水凝菌 剂技术领域； 本发明通过加入长效缓释储菌凝胶 组合物， 改善了枯草芽孢杆菌在复杂环境下的繁 殖条件， 提高了枯草芽孢杆菌及其辅助菌株的生 存活性及抗逆活性； 同时， 谷类皮壳水解物通过 枯草芽孢杆菌的降解及辅助菌株的降解， 形成可 以直接被植物吸收的成分， 从而提高了植物的生 长， 本发明提供的复合水凝聚剂可以应用于多种 环境中的水土保持， 对降低水土流失、 形成稳定 的生态环境具有重要的价 值。 权利要求书2页 说明书7页 附图2页 CN 115029288 A 2022.09.09 CN 115029288 A 1.一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂， 其特征在于： 所述复合水凝菌剂包括 如下重量份的组分： 枯草芽孢杆菌活孢粉剂3 0‑80份； 苏云金芽孢杆菌活孢粉剂15 ‑40份； 干酪乳杆菌活孢粉剂15 ‑40份； 谷类皮壳水解物15 ‑30份； 长效缓释储菌 凝胶组合物40 ‑100份。 2.根据权利要求1所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂， 其特征在于： 所 述复合水凝 菌剂包括如下重量份的组分： 枯草芽孢杆菌活孢粉剂40 ‑60份； 苏云金芽孢杆菌活孢粉剂20 ‑30份； 干酪乳杆菌活孢粉剂20 ‑30份； 谷类皮壳水解物15 ‑20份； 长效缓释储菌 凝胶组合物5 0‑80份。 3.根据权利要求2所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂， 其特征在于： 所 述长效缓释储菌 凝胶组合物包括如下重量份的组分： 可德胶10 ‑30份； 中药材粉剂组合物1 ‑15份； 海藻糖5‑20份； β‑环糊精1‑15份。 4.根据权利要求3所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂， 其特征在于： 所 述长效缓释储菌 凝胶组合物包括如下重量份的组分： 可德胶15 ‑20份； 中药材粉剂组合物5 ‑10份； 海藻糖10 ‑15份； β‑环糊精5‑10份。 5.根据权利要求4所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂， 其特征在于： 所 述谷类皮壳水解物 为花生外壳水解物、 稻米外壳水解物、 黄豆外壳水解物、 小麦外壳水解物 中的一种或者多种组合。 6.根据权利要求5所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂， 其特征在于： 所 述中药材粉剂组合物为黄芪粉、 马齿 苋粉、 土茯苓粉、 槟榔粉呈比例1： 1： 0.8： 1混合配制。 7.一种根据权利要求6所述的水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂的制备方法， 其 特征在于： 所述制备 方法包括如下步骤： （1） 制备枯 草芽孢杆菌活孢粉剂、 苏云金芽孢杆菌活孢粉剂和干酪乳杆菌活孢粉剂； （2） 制备谷类皮壳水解物： 将谷类皮壳使用粉碎机粉碎， 使用60 ‑100目的网筛过滤得到 谷类皮壳粉， 将所述谷类皮壳粉加入体积比为1 ‑2%的H2SO4溶液中121℃水解120min， 冷却后 调整pH为5 ‑8， 离心收集上清液， 所述上清液为谷类皮壳水解物； （3） 制备长 效缓释储菌凝胶组合物： 取黄芪粉、 马齿苋粉、 土茯苓粉、 槟榔粉呈比例1： 1： 0.8： 1混合得到中药材粉剂组合物， 然后按照 常规凝胶制备工艺与可德胶、 海藻糖、 β ‑环糊权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115029288 A 2精混合制备 得到长效缓释储菌 凝胶组合物； （4） 将枯草芽孢杆菌活孢粉剂、 苏云金芽孢杆菌活孢粉剂和干酪乳杆菌活孢粉剂与谷 类皮壳水解物混合后加入长效缓释储菌 凝胶组合物中得到所述复合水凝 菌剂。 8.根据权利要求7所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂的制备方法， 其 特征在于： 所述 枯草芽孢杆菌活孢粉剂的制备 方法包括如下步骤： （1） 活化菌液： 将枯草芽孢杆菌稀释5 ‑10倍后涂布于活化固体培养基上， 于37℃培养 12h得到活化 枯草芽孢杆菌； （2） 菌株扩大活化培养： 使用接种针挑取活化枯草芽孢杆菌的单个菌落于500mL扩繁液 体培养基中， 37℃， 180rpm， 培 养12h得到扩大培 养枯草芽孢杆菌； （3） 菌液富集培养： 吸取5mL所述扩大培养枯草芽孢杆菌于扩繁液体培养基中， 于37℃， 180rpm培 养24‑48h得到枯 草芽孢杆菌 培养液； （4） 粉剂制备： 将枯草芽孢杆菌培养液在150rpm下离心1min后去除上清液得到枯草芽 孢杆菌菌体， 然后置 于30‑37℃中烘干 30‑60min， 得到枯 草芽孢杆菌活孢粉剂。 9.根据权利要求8所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂的制备方法， 其 特征在于： 所述苏云金芽孢杆菌活孢粉剂的制备 方法包括如下步骤： （1） 活化菌液： 将苏云金芽孢杆菌稀释5 ‑10倍后涂布于活化 固体培养基上， 于37℃培养 12h得到活化苏云金芽孢杆菌； （2） 菌株扩大活化培养： 使用接种针挑取活化苏云金芽孢杆菌的单个菌落于500mL扩繁 液体培养基中， 37℃， 180rpm， 培 养12h得到扩大培 养苏云金芽孢杆菌； （3） 菌液富集培养： 吸取5mL所述扩大培养苏云金芽孢杆菌于扩繁液体培养基中， 于37 ℃， 180rpm培 养24‑48h得到苏云金芽孢杆菌 培养液； （4） 粉剂制备： 将苏云金芽孢杆菌培养液在150rpm下离心1min后去除上清液得到苏云 金芽孢杆菌 菌体， 然后置 于30‑37℃中烘干 30‑60min， 得到苏云金芽孢杆菌活孢粉剂。 10.根据权利要求9所述的一种水土保持用枯草芽孢杆菌复合水凝菌剂的制备方法， 其 特征在于： 所述干酪乳杆菌活孢粉剂的制备 方法包括如下步骤： （1） 活化菌液： 将干酪乳杆菌稀释5 ‑10倍后涂布于活化固体培养基上， 于37℃培养12h 得到活化干酪乳杆菌； （2） 菌株扩大活化培养： 使用接种针挑取活化干酪乳杆菌的单个菌落于500mL扩繁液体 培养基中， 37℃， 180rpm， 培 养12h得到扩大培 养干酪乳杆菌； （3） 菌液富集培养： 吸取5mL所述扩大培养干酪乳杆菌于扩繁液体培养基中， 于37℃， 180rpm培 养24‑48h得到干酪乳杆菌 培养液； （4） 粉剂制备： 将干酪乳杆菌培养液在150rpm下离心1min后去除上清液得到干酪乳杆 菌菌体， 然后置 于30‑37℃中烘干 30‑60min， 得到干酪乳杆菌活孢粉剂。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115029288 A 3