(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210840329.3 (22)申请日 2022.07.18 (71)申请人 中国农业大 学 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 李平兰　谭春明　韩飞　穆文强　 张世奇　康慎敏　尚楠　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 刘鑫鑫 (51)Int.Cl. C12N 1/38(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种植物促 生菌的液体发酵 方法 (57)摘要 本发明公开了一种植物促生菌的液体发酵 方法。 本发明植物促生菌的液体发酵方法， 包括 如下步骤： S1、 在通气条件下， 将发酵培养液 灭菌 后接入植物促生菌进行第一次培养； S2、 在第一 培养结束后的培养体系中接入蔬菜苗的根系分 泌物提取液进行第二次培养； S3、 在第二次培养 结束后的培养体系中添加补料液， 降低通气量进 行第三次培养； S4、 关闭通气， 对第三次培养结束 后的培养体系进行第四次培养， 得到发酵液。 本 发明所制得的发酵液中活菌 数可达到10^10C FU/ mL， 芽孢率80％以上， 显著提高了菌剂产品质量 和货架期。 权利要求书2页 说明书9页 CN 115181717 A 2022.10.14 CN 115181717 A 1.一种植物促 生菌的液体发酵 方法， 包括如下步骤： S1、 在通气条件下， 将发酵培 养液灭菌后接入植物促 生菌进行第一次培 养； S2、 在第一培养结束后的培养体系中接入蔬菜苗的根系分泌物提取液进行第二次培 养； S3、 在第二次培 养结束后的培 养体系中添加补料 液， 降低通气量进行第三次培 养； S4、 关闭通气， 对第三次培 养结束后的培 养体系进行第四 次培养， 得到发酵 液。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于： 所述 植物促生菌为芽孢杆菌； 所述发酵培养液由下述组分组成： 10～15g/L的玉米浆干粉、 5～10g/L豆饼粉、 3～5g/L 豆粕提取物、 7.5～12.5g/L糖蜜、 1～3g/L柠檬酸、 0.4～0.6g/L氯化钾、 0.2～0.4g/L硫酸 镁、 0.025～0.05g/L氯化锰、 0.2～0.4g/L氯化钙、 0.05～0.1g/L有机硅消泡剂、 调节pH至 7.0～8.5的调节量的pH调节剂和余 量的水； 所述植物促生菌以其种子液的形式接入， 所述种子液的接入量为所述发酵培养液体积 的2％～10％； 所述第一次培 养的温度为34～38℃， 时间为18～ 24h， 通气量 为0.12～0.18L/mi n。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其特 征在于： 所述蔬菜苗 为黄瓜、 番 茄或茄子； 制备所述根系分泌物提取 液的方法， 包括如下步骤： 1)取定植期蔬菜苗， 对蔬菜苗的根系进行消毒； 2)将经所述消毒的蔬菜苗进行定植， 用蔬菜苗培 养液进行培 育； 3)将经所述培育的培养液中的杂质和养分离子依次去除， 然后再进行过滤除菌， 得到 所述根系分泌物提取 液。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于： 所述消毒为采用水培植物消毒液浸泡 根系10～15mi n； 所述蔬菜苗培养液由硝酸钾0.4～0.6g/L、 磷酸二氢钾0.1～0.15g/L、 硫酸镁0.3～ 0.4g/L、 硝酸钙1～ 1.5g/L、 硼酸钠0.01～0.015mg/L、 EDTA铁钠0.2～0.3mg/L、 硫酸锰0.03 ～0.05mg/L、 硫酸铜0.0 6～0.1mg/L和硫酸锌0.01～0.02mg/L组成； 所述培育的温度为25～3 5℃， 时间为1～ 2周； 采用孔径为0.45 μm的滤膜过 滤去除所述培 养液中的杂质； 采用大孔吸附树脂去除所述培养液中的矿物质离子， 其中， 每500mL蔬菜小苗培养液， 用100～200mL乙醇洗脱， 收集 流出液， 蒸发浓 缩至5～10mL， 等体积水复溶； 所述过滤除菌为采用孔径为0.2 2 μm的滤膜过 滤。 5.根据权利要求1 ‑4中任一项所述的方法， 其特征在于： 所述蔬菜苗的根系分泌物提取 液的接入量 为第一培 养结束后的发酵 液体积的0.5％～1％； 所述第二次培 养的温度为34～38℃， 时间为18～ 24h， 通气量 为0.12～0.18L/mi n。 6.根据权利要求1 ‑5中任一项所述的方法， 其特征在于： 以质量百分含量计， 所述补料 液由20％～ 25％氢氧化钠、 5 0％有机硅消泡剂和余 量的水组成； 所述补料 液的体积为第二次培 养结束后的发酵 液的体积的15％～ 25％； 所述第三次培 养的温度为34～38℃， 时间为12 ～24h， 通气量 为0.06～0.1L/mi n。 7.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的方法， 其特征在于： 所述第四次培养的温度为34～ 38℃， 时间为1～ 2h。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115181717 A 28.权利要求1 ‑7中任一项所述的植物促生菌的液体发酵方法获得的植物促生菌发酵 液。 9.权利要求8所述的植物促 生菌的发酵 液在制备植物促 生菌菌剂中的应用。 10.一种植物促 生菌菌剂， 其由权利要求8所述的植物促 生菌的发酵 液制成。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115181717 A 3