(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210962070.X (22)申请日 2022.08.11 (71)申请人 郑州安图生物工程股份有限公司 地址 450016 河南省郑州市经济技 术开发 区经北一路87号 (72)发明人 林松洋　曹琳琳　卢雪　余春霞　 王华栋　王玮　栗梦婷　郭晴　 金建闻　胡明明　郑业焕　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 王欢 (51)Int.Cl. C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/689(2018.01) C12N 1/20(2006.01)C12R 1/46(2006.01) (54)发明名称 一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备 方法 (57)摘要 本发明涉及生物 技术领域， 尤其涉及一种检 测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法。 该质 控品包括 GBS灭活菌株、 内标质粒和稀释液； 所述 GBS灭活菌株包 括Ia、 Ib、 III、 V型中的至少一种； 所述稀释液由P300、 P950、 硅酮、 EDTA ·2Na和 HEPES缓冲液组成。 实验结果表明， 本发明提供的 质控品具有良好的稳定性， 3 7℃热加速可稳定 保 存超过14天， 2‑8℃环境稳定保存至少18个月， 稳 定性明显优于现有产品。 该质控品与实际GBS临 床拭子样 本具有一致性， 可作为一种标准质控品 被上市厂家检测出来， 能够真实地模拟GBS在体 外核酸检测过程， 通用性强； 且产品具有成本低 廉、 稳定性高、 便于存与转运等优势， 便于工业级 别的大规模生产， 具有重要的价 值与应用前 景。 权利要求书1页 说明书9页 CN 115161383 A 2022.10.11 CN 115161383 A 1.一种检测B族链球菌的阳性质控品， 其特征在于， 包括GBS灭活菌株、 内标质粒和稀释 液； 所述GBS灭活菌株包括 Ia、 Ib、 III、 V型中的至少一种； 所述稀释液由P3 00、 P950、 硅酮、 EDTA ·2Na和HEPES缓冲液组成。 2.根据权利要求1所述的阳性质控 品， 其特征在于， 所述稀释液中各组分占所述稀释液 的百分比为： 0.1～0.2vol％P300、 0.15～0.3vol％P950、 0.01～0.02vol％硅酮消泡剂和0.035～ 0.07wt％EDTA ·2Na。 3.根据权利要求2所述的阳性质控 品， 其特征在于， 所述稀释液中各组分占所述稀释液 的质量分数为： 0.1vol％P300、 0.15vo l％P950、 0.01vo l％硅酮和0.0 35wt％EDTA ·2Na； 或， 0.2vo l％P300、 0.3vol％P950、 0.02vo l％硅酮和0.07wt％EDTA ·2Na。 4.根据权利要求1所述的阳性质控品， 其特征在于， 所述内标质粒为含有人源性β 珠蛋 白基因的质粒。 5.根据权利要求4所述的阳性质控品， 其特征在于， 所述人β 珠蛋白基因包括sequence   ID为MK476491.1、 MK476483.1、 MK476464.1中的至少一种基因。 6.根据权利要求1～5任一项所述的阳性质控品， 其特征在于， 所述GBS菌株在所述阳性 质控品中的浓度为1 ×104～1×105CFU/mL。 7.根据权利要求1～5任一项所述的阳性质控品， 其特征在于， 所述有人源性β 珠蛋白基 因的内标质粒在所述阳性质控品中的浓度为1 ×104～1×105copies/mL。 8.权利要求1～7任一项所述的阳性质控品的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 将GBS菌株活化、 传代、 扩大培 养； 经离心、 重悬、 灭活， 获得GBS菌株菌悬 液； 将GBS菌株菌悬液和含有人β 珠蛋白基因的内标质粒溶液混合， 加入P300、 P950、 硅酮消 泡剂和EDTA ·2Na， 获得 阳性质控品。 9.权利要求1～7任一项所述的阳性质控 品在制备检测B族链球菌的核酸检测试剂 盒中 的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115161383 A 2一种检测B族 链球菌的阳性质控品及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 尤其涉及一种检测B族链球菌 的阳性质控品及其制 备 方法。 背景技术 [0002]B族链球菌(Group  B Streptococci,GBS)为兼性厌氧的革兰氏阳性链球菌， 是一 种无症状的肠道和泌尿生殖道共有细菌， 属于条件致病菌， 正常寄居于阴道和直肠， 正常妇 女带菌率30％以上。 GBS感染孕妇可通过产 道传播给新生儿， 引起新生儿的败 血症、 脑膜炎、 肺炎等， 是目前引发新 生儿感染的主 要致病菌之一。 [0003]1996年美国疾病控制中心(CDC)与其他机构共同制定了 《围产期B族链球菌 感染筛 查及防治指南》 ， 2002年、 2010年美国CDC对该指南进行2次修订， 针对妊娠期产妇GBS预防与 治疗最终决定采用普遍筛查方案。 其中提及到， 在孕妇分娩时， 如无培养结果或培养结果未 知， 且存在以下任一危险因素(分娩胎龄<37周、 胎膜破裂≥18h、 产前体温≥38℃)的孕妇应 及时给予治疗； 对没有任何危险因素的孕妇， 可直接阴道和直肠取样进 行核酸扩增， 快速检 测GBS阴阳性结果。 [0004]核酸检测主要通过孕妇生殖道和直肠道拭子中GBS靶标DNA的特异性扩增监测病 人有无感染GBS， 而B族链球菌核酸检测质控品则用于 GBS核酸检测时的质量控制。 但目前 临 床试验室所使用的GBS质控品基本上是上市核酸检测产品的附属产品， 存在着稳定性不好， 批间变异较大， 各个单位标定的靶值不一致等诸多不稳定因素； 而且， 各厂家试剂盒 中的阳 性质控品有效成分均为含有靶标序列的质粒或利用靶标质粒构建的重组菌株， 各厂家所选 择扩增的靶标序列又不尽相同， 只能被本试剂盒中的扩增试剂扩增检测出来， 不能用于其 他厂家试剂盒的质量控制， 对于GBS核酸检测质量控制的统一性和规范性非常不利。 另外， 国内目前尚无单独生产质控品的厂家， 且各厂家质控品需储存于 ‑20℃条件下， 使用不便， 更重要的是， 反复的冻融对检测结果有较大影响。 因此， 急需提供一种通用性强、 可稳定保 存的B族链球菌核酸检测阳性质控品。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本 发明提供了一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法。 该阳性 质控品具有良好的稳定性、 通用性和一 致性。 [0006]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0007]一种检测B族链球菌的阳性质控品， 包括GBS灭活菌株、 内标质粒和稀释液； [0008]所述GBS灭活菌株包括 Ia、 Ib、 III、 V型中的至少一种； [0009]所述稀释液由P3 00、 P950、 硅酮、 EDTA ·2Na和HEPES缓冲液组成。 [0010]在一个具体实施例中， 本发明考察了不同稀释液制成的阳性质控品的加速稳定性 和长期稳定性， 结果表明， 本发明稀释液制得的阳性质控品能够有效防止质控品靶标和内 标物质的降解， 为质控品提供稳定的环境， 延 长质控品的保存时间， 使 得采用所述质控品保说　明　书 1/9 页 3 CN 115161383 A 3