(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210627065.3 (22)申请日 2022.06.02 (71)申请人 广东容大生物 股份有限公司 地址 511500 广东省清远市清远高新 技术 产业开发区建 设二路31号 申请人 清远一生自然生物研究院有限公司 (72)发明人 谭文俊　韦崟崟　张文　黄炜乾　 孟葵开　叶彩云　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 许羽冬 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 21/00(2006.01) C07K 1/14(2006.01)A23K 20/147(2016.01) A23K 20/163(2016.01) A23K 20/28(2016.01) A23K 50/30(2016.01) A23K 50/60(2016.01) A23K 50/75(2016.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种枯草芽孢杆菌抗菌肽及其制备方法与 应用 (57)摘要 本发明属于生物工程技术领域， 具体涉及一 种枯草芽孢杆菌抗菌肽及其制备方法与应用， 本 发明采用将产抗菌肽的枯草芽孢杆菌接种于斜 面种子培养基， 进行菌株活化， 将活化后的菌株 洗脱制得备用种子液； 将备用种子液接种于发酵 培养基培养， 制得 发酵液； 将发酵液进行浓缩、 干 燥制得抗菌肽； 将抗菌肽应用于断奶仔猪、 产蛋 母鸡的基础日粮中， 能够改善断奶仔猪的生长性 能以及产蛋母鸡的产蛋性能。 权利要求书1页 说明书4页 CN 114921379 A 2022.08.19 CN 114921379 A 1.一种枯 草芽孢杆菌抗菌肽的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： S1： 将产抗菌肽的枯草芽孢杆菌接种于斜面种子培养基， 于37℃培养12～24h进行菌株 活化， 将活化后的菌株洗脱制得 备用种子液； S2： 将备用种子液接种于发酵培养基， 于100～250rpm、 37℃培养10～14h， 并于培养过 程中持续 通入无菌空气， 制得发酵 液； S3： 将发酵 液进行浓 缩、 干燥制得抗菌肽。 2.根据权利要求1所述制备方法， 其特征在于， 所述产抗菌肽的枯草芽孢杆菌包括 Bacillus subtilis Kc23659。 3.根据权利要求1所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤S2中的发酵培养基包括如下组 分： 葡萄糖3～50g/L， 豆粕粉10～100g/L， 硫酸铵1～10g/L， 维生素B1 0.001～0.05g/L， 发 酵培养基的pH＝7.0 。 4.根据权利要求1所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤S3将发酵液进行浓缩的步骤如 下： 于步骤S2制得的发酵液中加入1％～5％的有机酸， 再将发酵液浓缩至其体积的30 ％～ 60％， 制得浓 缩液。 5.根据权利要求1所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤S3中的干燥为喷雾干燥， 喷雾 干燥的参数如下： 进风温度180～ 230℃， 出风温度80～10 0℃。 6.一种抗菌肽， 其特 征在于， 由权利要求1～5任一项所述制备 方法制得。 7.权利要求6所述 抗菌肽在制备饲料 添加剂中的应用。 8.一种饲料添加剂， 其特征在于， 所述饲料添加剂由抗菌肽、 玉米淀粉、 滑石粉复配而 成。 9.根据权利要求8所述饲 料添加剂， 其特征在于， 所述抗菌肽、 玉米淀粉、 滑石粉的复配 比例为5:6 0:35。 10.权利要求8 或9所述饲 料添加剂在畜禽饲 料中的应用， 其特征在于， 所述饲 料添加剂 在畜禽饲料中的添加量 为200～300g/T。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921379 A 2一种枯草芽孢杆菌抗菌肽及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于生物工程技术领域， 具体属于微生物发酵领域， 更具体涉及一种枯草 芽孢杆菌抗菌肽 及其制备 方法与应用。 背景技术 [0002]抗菌肽(ant imicrobial  peptides， AMPs)是生物机体在抵御病原 微生物的防御反 应中所产生的一类抵抗微生物与一些恶性细胞的短肽， 具有分子质量小、 水溶性好、 耐热性 强、 无免疫原性、 抗菌谱广等特点， 在食品加工过程中不易到破坏， 同时它又可生物降解生 物吸收， 因而安全性较高。 [0003]目前抗菌肽在工业化发酵生产过程中存在如下问题： 1)发酵成本过高； 2)抗菌肽 和培养成分难以分离； 3)发酵周期长； 4)抗菌谱窄； 5)抗菌肽产量和质量低等。 基于现有抗 菌肽在工业化生产中存在的问题， 有必要对工业 化发酵生产的抗菌肽的方法进行改进。 发明内容 [0004]针对现有抗菌肽在工业化发酵生产过程中存在的问题， 本发明旨在提供一种枯草 芽孢杆菌抗菌肽及其制备方法与应用。 本发明生产抗菌肽的工艺成本低、 发酵周期短， 且本 发明所述制备 方法能够大幅提高抗菌肽的产量和质量。 [0005]基于上述目的， 本发明采用的技 术方案如下： [0006]第一方面， 本发明提供一种枯 草芽孢杆菌抗菌肽的制备 方法， 包括如下步骤： [0007]S1： 将产抗菌肽的枯草芽孢杆菌接种于斜面种子培养基， 于37℃培养 12～24h进行 菌株活化， 将活化后的菌株洗脱制得 备用种子液； [0008]S2： 将备用种子液接种于发酵培养基， 于100～250rpm、 37℃培养10～14h， 并于培 养过程中持续 通入无菌空气， 制得发酵 液； [0009]S3： 将发酵 液进行浓 缩、 干燥制得抗菌肽。 [0010]本发明通过将产抗菌肽的枯草芽孢杆菌经斜面培养活化、 发酵、 再将发酵液浓缩 干燥制得抗菌肽， 本发明制备抗菌肽的工艺过程简单易行， 且由本发明所述方法制得的抗 菌肽具有优异的抑菌效果。 [0011]优选地， 产抗菌肽的枯草芽孢杆菌包括但不限于Bacillus  subtilis  Kc23659， 亦 可采用其 他能够产生 抗菌肽的枯 草芽孢杆菌 。 [0012]优选地， 步骤S1的斜 面种子培养基为LB培养基。 [0013]优选地， 步骤S2中的发酵培养基包括如下组分： 葡萄糖3～50g/L， 豆粕粉10～ 100g/L， 硫酸铵1～10g/L， 维生素B1 0.001～0.05g/L， 发酵培 养基的pH＝7.0 。 [0014]本发明利用简单易得LB培养基、 组分简单的发酵培养基用于枯草芽孢杆菌的活化 及培养， 极大降低了抗菌肽的生产成本 。 [0015]优选地， 步骤S3将发酵 液进行浓 缩的步骤如下： [0016]于步骤S2制得的发酵液中加入1％～5％的有机酸， 再将发酵液浓缩至其体积的说　明　书 1/4 页 3 CN 114921379 A 3