(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210681312.8 (22)申请日 2022.06.16 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 202 2888 2022.06.15 (71)申请人 山东省科学院生物研究所 地址 250014 山东省济南市历下区科院路 19号 申请人 中国科学院生态 环境研究中心 (72)发明人 李哲　王雯雯　蔡春静　郑泽慧　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 专利代理师 李筝 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23L 5/20(2016.01)C02F 3/34(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C02F 101/36(2006.01) (54)发明名称 一种枯草芽孢杆菌及其在降解中链和短链 氯化石蜡中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌及其在降解 中链和短链氯化石蜡中的应用。 本发 明提供了一 种枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)RX17， 该 菌株保藏编号为CGMCC  NO.7.447。 本发明提供的 RX17菌株能够高效降解 短链氯化石 蜡(SCCPs)和 中链氯化石蜡(MCCPs)， 可在15天内将SCCPs和 MCCPs降解到较低的程度。 该菌株可用于制备氯 化石蜡生物清除剂， 一方面可应用于降解水体及 土壤环境中的SCCPs和MCCPs污染， 另一方面可应 用于清除发酵饲料(青贮饲料)中的SCCPs和 MCCPs残留， 在促进环境治理及保障饲料安全等 方面具有巨大的应用前 景。 权利要求书1页 说明书8页 附图3页 CN 114921384 A 2022.08.19 CN 114921384 A 1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)RX17， 其特征在于， 该菌株已于2022年6月 15日保藏于中国典型培养物保藏中心， 简称 CCTCC， 地址为： 中国， 武汉， 武汉 大学， 其生物保 藏号为： CCTCC NO： M 2022888。 2.如权利要求1所述枯草芽孢杆菌(B acillus subtilis)RX17， 其特征在于， 所述枯草 芽孢杆菌RX17的菌体特征如下： 菌株杆状， 圆形菌落， 大小1 ‑2mm， 边缘整齐， 呈浅黄色， 不透 明； 表面粗糙灰暗， 质地干燥， 表面粗糙， 边缘不规则， 正面灰白色或浅色， 形态扁平， 易挑 起， 不产色素； 内生孢子， 芽孢(0.6～0.9)μm ×(1.0～1.5)μm,椭圆到柱状， 位于菌体中央或 稍偏， 芽孢形成后菌体不 膨大。 3.如权利要求1所述枯草芽孢杆菌(B acillus subtilis)RX17， 其特征在于， 所述枯草 芽孢杆菌RX17采用营养肉汁培养基进行培养， 所述营养肉汁培养基配置方式如下： 每1L水 中含有牛肉膏2 ～4g、 蛋白胨8～12g、 琼脂18～ 22g， pH6.8～7.2， 灭菌 。 4.如权利要求1所述枯草芽孢杆菌(B acillus subtilis)RX17， 其特征在于， 所述枯草 芽孢杆菌RX17的产孢培养基的配方如下： 葡萄糖1～3％、 豆粕0.5～1.5％、 蛋白胨0.05～ 1.15％、 硝 酸钠0.1～0.3％、 磷酸二氢钾0.05～0.15％、 磷酸氢二钠0.03～0.08％， 硫酸镁 0.01～0.04％， 硫酸锰0.01～0.04％， 余 量为水； 优选的， 所述产孢培养方 式如下： 初始pH值7 ‑7.2， 温度28～32℃， 转速150～220r/min， 接种量为1～4％接种至产孢培 养基中。 5.一种菌剂， 其特征在于， 所述菌剂包括权利要求1 ‑4任一项所述枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)RX17或所述菌株的培 养物、 代谢物。 6.如权利 要求5所述菌剂， 其特征在于， 所述菌剂中， 包括所述枯草芽孢杆菌(Bacillus   subtilis)RX17的活化菌株或保藏菌株； 或， 所述菌剂的剂型包括液体菌剂、 粉剂或颗粒剂； 进一步的， 所述液体菌剂的具体为水悬浮剂、 可分散油悬浮剂； 所述粉剂的具体为可湿 性粉剂； 所述颗粒剂的具体为水分散 颗粒剂。 7.如权利要求5所述菌剂， 其特征在于， 所述菌剂中， 还包括培养基载体； 所述培养基载 体为包括但不限于 硅藻土、 草炭、 麸皮中的一种或其组合； 进一步的， 所述菌剂中包含2 ×(106‑108)CFU·g‑1的RX17芽孢， 制备方法如下： 将芽孢液 和培养基载体搅拌混合， 置 于65℃下保温烘干后， 粉碎， 制得 所述菌剂。 8.权利要求1 ‑4任一项所述枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)RX17和/或权利要求5 ‑ 7任一项所述菌剂在降解中链和短链氯化石蜡中的应用。 9.如权利要求8所述枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)RX17和/或菌剂在降解中链和 短链氯化石蜡中的应用， 所述在氯化石蜡降解方面的应用包括大气、 水体、 土壤、 生物体及 食物中中链和短链氯化石蜡的降解； 优选的， 所述食物为动物饲料或饲料原料， 所述饲料原料包括但不限于小麦、 玉米、 大 豆及其副产品； 具体的， 如豆粕、 小麦秸秆、 麦麸或玉米秸秆； 优选的， 所述土壤中 中链和短链氯化石蜡的降解， 采用权利要求5 ‑7任一项所述菌剂。 10.一种氯化石蜡的生物清除剂， 其特征在于， 所述生物清除剂中包括权利要求1 ‑4任 一项所述 枯草芽孢杆菌(Baci llus subtilis)RX17， 和/或权利要求5 ‑7任一项所述菌剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921384 A 2一种枯草芽孢杆菌及其在降解中链和短链氯化石蜡中的应用 技术领域 [0001]本发明属于微生物石蜡降解技术领域， 具体涉及一种枯草芽孢杆菌(Bacillus   subtilis)RX17， 所述菌株的菌剂及其在降解中链和短链氯化石蜡中的应用。 背景技术 [0002]公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解， 而不必然 被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技 术。 [0003]氯化石蜡(chlorinated  paraffins， CPs)是烷烃经氯化形成的混合物， 根据碳链 长度主要分为短链氯化石蜡(C10 ‑13， short ‑chain chlorinated  paraffin s， SCCPs)、 中链 氯化石蜡(C14‑17， mediumchain  chlorinated  paraffin s， MCCPs)与长链氯化石蜡(C≥18， long‑chain chlorinated  paraffins， LCCP s)。 CPs一种价格低廉的氯代烷烃混合物， 因具 有阻燃性、 低挥发性以及绝缘性等特点， 被广泛用于阻燃剂、 人造革、 聚氨酯防水涂料等产 品的生产。 然而， CPs也是环境中普遍存在的难以降解的有毒污染物， 广泛分布于大气、 生物 体、 水体、 土壤以及沉积物等各种环境介质中， 甚至极地地区也有检出。 短链氯化石蜡 (SCCPs)和中链氯化石蜡(MCCPs)是氯化石蜡的两个主要类别， 尤其是SCCPs， 由于其具有高 毒性、 难降解， 并能够在食物链中富集放大的特点， 于2017年被列入 《关于持久性有机污染 物的斯德哥尔摩公约》 ， 目的是限制氯化石蜡混合物 中SCCPs的浓度。 最近研究表明， MCCPs 和SCCPs具有相似的性质， 如生态毒性、 远距离迁移 性以及容易在生物体内蓄积而被限制使 用。 有研究发现， 氯化度超过46％的MCCPs具有持久性和毒性， 在环 境样品中检出含量较高， 因此MCCPs的生产应用可能给环境和生物圈带来 新的负面影响与健康风险。 [0004]人体和畜禽动物的CPs暴露途径分为食品摄入、 呼吸吸收、 皮肤接触等， 其中食品 摄入是最大暴露源之一。 人类暴露于CPs主要是通过饮食摄入， 特别是动物源性食品。 然而， 关于乳制品中氯化石蜡浓度的信息仍然很少。 最近 关于畜产品以及饲料中短链和中链氯化 石蜡污染特征的研究， 揭示了氯化石蜡在 “环境—青贮饲料—奶牛—生鲜乳 ”生产链条中的 迁移转化规律， 发现奶牛饲料(青贮饲料)可能是牛奶中短链和中链氯化石蜡的重要来源。 因此， 控制动物饲料中氯化石蜡的浓度， 是减少动物源性食品中氯化石蜡、 限制人类接触这 些化合物的关键。 生物去除法作为最经济的方法， 对污染物进 行生物吸附或生物降解， 被认 为是去除环 境中有机污染物最可靠的方法之一， 备 受研究者青睐。 在CPs的生物降解研究方 面， 已经鉴定出多株能够以SCCPs为碳源和能源的SCCPs降解菌， 但缺点在于有效降解周期 较长。 而能够有效降解MCCPs的菌株还未见报道。 因此， 寻找能够高效降解SCCPs和MCCPs的 菌株具有重要意 义。 [0005]芽孢杆菌属革兰阳性菌， 一般好氧生长， 菌体呈杆状， 在特定条件下可形成圆形、 椭圆形或圆柱形芽孢。 芽孢杆菌由于其芽孢的抗逆性及功 能代谢产物分泌的多样性， 目前 已经被广泛应用于生物农药、 生物肥 料、 生物保鲜、 医药保健、 生物饲料和污染防治等领域。说　明　书 1/8 页 3 CN 114921384